沉降式液基细胞学制片质量12 000例分析

贺德智（胜利石油管理局河口医院病理科，山东东营257200）

沉降式液基细胞学制片质量12 000例分析

贺德智（胜利石油管理局河口医院病理科，山东东营257200）

目的提高液基细胞学制片的质量。方法收集该院2009年12月至2015年12月共12000例妇科患者，采用广州安必平医药科技有限公司生产的沉降式液基细胞学系统进行制片。结果通过总结经验改进制片时的操作技术，提高了涂片质量。结论通过对制片过程中严格的质量控制，使每一步都做到细致操作，完全能做出符合诊断要求的涂片。

宫颈肿瘤；细胞诊断学；沉降式；液基细胞学

宫颈癌是女性肿瘤中最常见的恶性肿瘤之一，发病率仅次于乳腺癌，居女性恶性肿瘤第2位，但在一些发展中国家和地区仍居第1位［1］，严重危害妇女的生命。而在我国的发病率呈明显上升和年轻化的趋势［2］，患病率以每年2%～3%的速度增长［3］。因而宫颈病变筛查显得尤为重要，各种检查方法也应运而生，沉降式液基细胞学制片就是其中的一种，相比于其他种类，该方法通过固定液保存标本，再经过一系列的技术处理，去掉了标本中的血液、黏液等杂质，利用自然沉降原理，将具有诊断意义的细胞沉淀下来，制成薄片，片内细胞丰富，分布均匀，易于辨认。自2009年开始，本院病理科使用广州安必平医药科技有限公司生产的沉降式液基薄层细胞学检查系统，通过对大量标本制片，积累了一些制片及染色经验，现介绍如下。

1　资料与方法

1.1一般资料由安必平医药科技公司提供成套设备与耗材。选取本院2009年12月至2015年12月收治的妇科患者12 000例，年龄20～65岁。

1.2方法

1.2.1标本采集由妇科医生进行标本的采集。

1.2.2液基薄层细胞学片的制备将标本瓶放置在漩涡混合器上振荡约30 s；将标本瓶、离心管、载玻片及申请单对应写上编号；在12 mL离心管中注入4 mL分离提取液；使用自动样本转移机转移8 mL样本；第1次离心：1 200 r/min，2 min，吸去8 mL上清液；第2次离心：2 200 r/min，10 min，弃上清液；置漩涡混合器上振荡约30 s。

1.2.3制片染色将处理好的载玻片放置在染色板上并扣上制片染色舱，使用安必平液基细胞沉降式自动制片染色系统进行制片及染色（染色舱的直径决定了涂片直径为1.3 cm）。

1.2.4湿式封片拆除染色舱，将片子放入无水乙醇内进行脱水（2次）；二甲苯内透明（2次）；中性树胶湿式封片。

1.3细胞学诊断采用2001年TBS分类标准［3］：（1）无上皮内病变或恶性病变（NILM）；（2）意义不明的非典型鳞状细胞（ASCUS）和非典型腺细胞（AGC）；（3）不除外高度鳞状上皮内病变的非典型鳞状细胞（ASC-H）；（4）低度鳞状上皮内病变（LSIL）；（5）高度鳞状上皮内病变（HSIL）；（6）鳞状上皮癌（SCC）；（7）非特异性不典型子宫颈管腺细胞（AGC-NOS）；（8）不典型子宫颈管腺细胞倾向于肿瘤（AGC倾向肿瘤）；（9）宫颈原位腺癌（AIS）及腺癌。根据液基薄层细胞学检测报告系统（TBS报告系统）：LSIL包含人乳头瘤病毒（HPV）感染和宫颈上皮内瘤变（CIN）Ⅰ级，HSIL包含CINⅡ级、CINⅢ级或鳞状上皮原位癌（CIS）；该系统也对标本质量进行评估，对微生物和炎症程度或萎缩等分别加以描述。TBS报告正常或炎性反应作为细胞学阴性，ASCUS及以上病变为细胞学阳性。

2　结　果

2.1制片及染色结果12 000份片子中，有11 736份达到制片标准，甲片率97.8%，对不满意片子进行分析，找出原因并进行解决。细胞染色的结果：整张涂片背景干净，上皮细胞核呈深蓝色，核仁红色；角化细胞细胞质粉红色，不全角化细胞细胞质橙黄色，角化前细胞细胞质淡蓝或淡绿色。

2.2TBS细胞学诊断结果NILM者11580例（96.50%），ASC-US者244例（2.03%），ASC-H者14例（0.12%），LSIL者242例（2.02%），HSIL者25例（0.21%），SCC者8例（0.07%）。检出霉菌504例（4.20%），滴虫12例（0.10%），线索细胞150例（1.25%）。

2.3与病理组织学结果进行对照分析细胞学诊断中，部分ASC-US和 LSIL以上鳞状上皮病变（包括ASC-H）均行阴道镜下活检，病理组织学检测结果：CINⅠ级254例（2.12%），CINⅡ级26例（0.22%），CINⅢ级8例（0.07%），SCC 7例（0.06%）。

3　讨　论

传统巴氏涂片中，53%～90%为假阴性的原因是涂片中没有能诊断的细胞［4］，有研究发现，常规涂片有80%以上的细胞随取材器被丢弃［5］。另外，传统涂片质量差，涂片不均匀或过厚，血液、黏液等杂质掩盖了不正常细胞，或细胞重叠影响了对异常细胞的识别能力［6］。

液基薄层细胞学技术是1996年美国食品药品监督管理局（FDA）批准上市的改良细胞学技术，其突出优点是标本的利用率高，符合不丢弃任何所取材料的原则［7］。国内从2001年开始做液基薄层细胞学检查筛选宫颈癌的研究［8］。与传统涂片相比，安必平沉降式液基薄层细胞学检查系统具有以下优势：能够有效地收集细胞；标本固定及时，细胞无蜕变、固缩等现象，核浆比的改变易辨认；有效去除了血液、黏液等杂质成分，保证了制片的质量；一次能制成24张片子，非常适合大规模查体工作，减少了技术人员的工作量；机器标准化、自动化的染色保证了染色效果的稳定性；独立的染色舱能有效避免交叉污染。最后制成的涂片中细胞层次薄、平铺，而且能呈现出肿瘤细胞特有的立体结构，这使得诊断的准确性、敏感性都比传统涂片明显提高。该技术漏诊率低，无创伤，因此成为筛查癌前病变的主要手段，对宫颈癌的早防、早治起到积极的作用［9］。

由于制片中的环节比较多，如取材、固定、涂片、染色、封固，既有手工操作也有机器操作，在实际工作中任何一个步骤操作不规范，都会影响到最后的制片质量。因而应注意以下几个方面：（1）提前与妇科医生进行沟通，提高标本采集合格率。90%以上的宫颈癌来自颈管交界处的细胞［10］，所以应采集到病变部位和宫颈的移行区（鳞柱交界区）细胞。取材时还要注意力度要适当，当患者宫颈糜烂严重或分泌物过多时，可用纱布轻轻擦拭后取样。（2）第2次离心后的振荡非常重要，如果振荡不充分，细胞团没有被打散，在片子上的细胞会堆积在一起，影响诊断，作者的经验是：振荡一会儿观察一下试管，试管内呈均匀的混悬状，则是合适的；反之，如果在清亮的液体中见到成团状漂浮物，则应继续振荡直至细胞块充分打散为止（绝经期女性例外）。（3）在向离心管中注入缓冲液后，应逐个检查一遍，当管内的混悬液特别浓稠时，可向管内再次注入少量的缓冲液，稀释一下，以避免制片时，细胞层过厚。反之，当管内的混悬液特别稀时，可将整管的液体全部倒入染色舱内（向染色舱移液时，移液量一般设为300 μL）。（4）安必平医药科技有限公司提供的是改良的巴氏染色法，试剂的用量和染色时间均可以调整，这需要在工作中不断总结经验，找到最合适的用量和染色时间。当染液使用时间过长时，要及时更换。

总之，沉降式液基细胞学制片是一种简单易操作的方法，比传统涂片的检测阳性率较高。掌握上述注意事项，规范操作过程，完全能够制作出一张满意的液基细胞学涂片，为正确的细胞学诊断提供保证。

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10.3969/j.issn.1009-5519.2016.14.041

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1009-5519（2016）14-2223-03

（2016-03-26）