浅析食品抗菌素残留物的筛选检验

尹斯雅

（河北省保定市产品质量监督检验所，河北保定071051）

浅析食品抗菌素残留物的筛选检验

尹斯雅

（河北省保定市产品质量监督检验所，河北保定071051）

食品；抗菌素；残留物；筛选

动物饲料中抗菌药的使用必须受到严格的控制，在美国由FDA兽医学中心（CVM）进行检测。食品性动物在养殖的过程中也会或多或少地使用抗菌素。以美国为例，美国农业部食品安全和检查机构（FSIS）负责检验进入市场的可食组织中药物、农药、化学工业品和重金属残留。检验食品中抗菌素残留的方法有多种，本文浅析了目前国际上较为前沿的食品中抗菌素残留的检测方法，仅供参考。

1　传统抗菌素筛选检验法的原理

据统计，约80%的家禽、75%的猪、60%的肉用牛和75%的奶牛在饲喂的某个时期都曾经被饲喂过抗菌素。传统的抗菌素筛选检验法是基于待测物中存在的抗菌素残留对微生物生长的抑制，这些检验程序是以扩散过程或混浊度为基础。

指示用有机体在透明液体培养基中的生长可以通过监测培养基的混浊度随时间而增加来进行跟踪检测。在基于扩散的检验方法中，待测物通过琼脂培养基扩散，培养基中事先己用敏感微生物的孢子均匀接种，经培养后，假如形成了生长抑制区则说明存在抑制剂，影响抑制区大小和外观的因素有多种。微生物生长的密度取决于微生物的初始数量，因此接种在培养基上能存活的微生物数量是关键因素之一。由于微生物的生长速率和抑制剂的扩散速率与培养温度密切相关，因此必须严格控制培养的温度。

此外扩散速率还受到培养基孔径的影响，一般来说，培养基中琼脂比例越低抑制区则越大。影响抑制区的其他因素包括琼脂层的厚度、接种菌的种龄、往平板加入样品的技术和样品中存在的共萃取物等。混浊度和扩散过程的检测可以手工操作，其他许多步骤都能实现自动化控制。

2　抗菌素残留的微生物检验法

2.1微生物检验法

STOP法（当场棉拭检验）和CAST法（兽仔抗菌素和磺胺制剂试验）是两个典型的抗菌素残留的微生物检验方法。用药棉拭子对可疑组织进行采样，然后将药棉拭子放在成冻胶的生长介质上并相互接触。如果生长介质中接种的为枯草杆菌（ATCC 6633）孢子，在32℃下培养16～18h（STOP法）；如果接种的为巨大芽孢杆菌（ATCC 9885），则在44℃下培养（CAST）。假如结果呈阳性，随后可采用薄层生物自显形法进行检验。

2.2微生物检验法的应用

目前已批准可用于哺乳期奶牛的药物有近40种，其中11种已被批准用于治疗乳腺炎和呼吸道感染。生乳须进行常规的抗菌素残留筛选检验，被抗菌素污染的牛乳（和乳制品）被FDA视作掺假品。最需关注的药物残留包括青霉素、氨苄青霉素、头孢菌素、缩酮氨苄青霉素和阿莫西林，所有这些残留都能引起某些消费者的过敏反应。酪乳及类似产品在制造过程中产生的酸和风味产物、用于加工乳制品和奶酪的发酵剂中的酸性制剂，以及发酵剂在还原脱脂乳中的繁殖生长都能干扰抗菌素残留的测定。

2.3微生物检验法的优缺点

牛乳中抗菌素残留的筛选检验法简单快速（允许多样品同时筛选），是有效的监测方法。不过，这些检验都属于非特异性的，而且只对能够抑制指示生物体生长的生物活性残留有响应。在1991年前，正式用于生乳中药物残留的检验方法是嗜热脂肪芽孢杆菌的圆盘检验（BSDA）。以后，随着检测用试剂盒的连续开发并不断获得批准，现在已经有许多筛选用试剂盒可供选择购买。然而，至今尚没有理想的试剂盒可用于检测生乳中的抗菌药残留。

筛选检验法无法对产生阳性响应的待测物进行鉴别，也不能测定其残留量。筛选检验的阳性结论只能说明可能存在一种或多种待测物。没有一种β-内酰胺检测法能够检到所有六种已被批准使用的β-内酰胺药物。某些测定残留的筛选检验法的检测限低于允许水平。因此，筛选检验法可能提供错误的违法结论（即对于某些残留低于法规允许的水平，而筛选检验法却做出阳性的结论）。此外，每种试剂盒都不能在允许水平上检测一种或多种已批准使用的β-内酰胺残留。有时，牛乳中来自患乳腺炎奶牛自然分泌的抗病分泌物在抗菌剂筛选检验中也呈阳性，甚至是对那些从未用过任何兽药的奶牛产的牛乳的检测也是如此。不过，这些自然抑制剂只有在体细胞数量高出目前法规规定的最大体细胞数量许多倍的情况下才呈阳性。此外，整个兽群似乎也不可能都被感染到使整个卡车罐中装载的牛乳呈阳性反应。

3　CharmⅡ检验

CharmⅡ检验是一个放射性同位素快速检验方法，该法能够检测下述抗菌素族：β-内酰胺、四环素、大环内酯、氨基配糖、新生霉素、磺胺药物和氯霉素。该检验方法基于标记药物和牛乳样品中的药物残留互相竞争样品中的细菌表面上数目有限的特异性结合点。简单地说，该方法是在牛乳样品中添加放射性同位素示踪抗菌素和用于与抗菌素结合的微生物，短时培养、离心、去除脂肪、微生物在闪烁液中重新悬浮和计数。抗菌素残留浓度越大，结合在微生物上的同位素示踪物越少。利用14C和3H示踪抗菌素，每管可检测两组抗菌素。大约可在12min内完成各种抗菌素种类的检测，检测限远低于比较传统的扩散检验。Angenics公司已经开发出了采用试剂盒形式检测β-内酰胺抗菌素残留的快速抗体检测法（只需6min就可完成测定），该法可在载玻片上完成，并由监控装置检测。

10．3969/J.ISSN．1671-6027．2016．10.011

尹斯雅（1982～），河北省保定市人，硕士研究生，工程师，研究方向为食品安全