动物饲料微生物污染快速检测方法

苏 茂，唐正菊

（1.重庆市沙坪坝区歌乐山镇农业服务中心，重庆 400036；2.重庆市大足区棠香街道办事处农业服务中心，重庆 402360）

动物饲料微生物污染快速检测方法

苏 茂1，唐正菊2

（1.重庆市沙坪坝区歌乐山镇农业服务中心，重庆 400036；
2.重庆市大足区棠香街道办事处农业服务中心，重庆 402360）

饲料中微生物污染阻碍畜牧生产的良性发展。微生物检测时控制污染的源头，快速有效的检测方法可以最大程度的保证饲料安全。根据国内外已发表的文献和最新的研究进展，本文总结了动物饲料中微生物污染快速检测方法，主要包括基于基因技术的检测、基于免疫学方法的检测以及基于蛋白质技术的检测。

动物饲料；微生物污染；快速检测方法

动物饲料在畜牧生产中不可或缺，安全性良好的动物饲料是促进畜牧生产良性发展的因素之一。动物食用被污染的饲料易造成生产能力降低甚至引发疾病，严重者会通过食物链危害人群健康。有害微生物污染是动物饲料安全的主要监控指标，建立快速有效的检测方法是监控工作的第一步。动物饲料由几十种基本原料复合而成，因此有害微生物种类多且常有交叉污染现象。鉴于此一些比传统检测手段更加快速灵敏的方法逐步成为近年来的研究焦点。

1 PCR检测技术

聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR）是一种应用较为广泛，发展较为成熟的分子生物学技术。PCR技术可特异、灵敏的检测出极微量DNA片段，其操作快速简单，对样本纯度要求不高。多重PCR技术是在常规PCR方法基础上在一个体系内加入一对以上引物，在保留常规PCR快速、灵敏优势的基础上可一次检测2种以上有害微生物。随着分子生物学技术的发展科研工作者尝试将PCR技术与多种技术联用以达到更好的实际工作效果。一项研究中利用实时荧光定量PCR以检测幽门螺旋杆菌，结果检测时间短、线性关系好且无交叉反应，有效的提高了饲料中微生物的检测效果。由于饲料成分较为复杂且PCR技术检测敏感度高，在实际工作中常发生能检测到DNA片段但无活性微生物存在的现象，使得PCR技术的应用受到限制。

2 基因芯片检测技术

基因芯片技术是近几年发展迅速，已成为目前检测技术研究热点之一。该法在基片表面固定一系列特定引物，对样品进行扩增、杂交，分析杂交结果即可达到检测目的。基因芯片技术与其它技术相结合应用范围更广，检测效果更好。随着生物信息学技术的发展，基因芯片技术的用途越来越广。利用生物信息学技术分析并找出饲料中常见有害微生物的特异基因序列，设计探针和引物即可快速灵敏的检测多种有害微生物的存在。该技术灵敏度高、耗时短，随着技术的发展检测费用的降低，相信其应用会越来越广。

3 ELISA检测技术

酶联免疫吸附测定（enzyme linked immunosorbent assay, ELISA）方法是一种将抗原-抗体特异性反应与酶高效催化反应相结合的检测方法，是酶免疫测定法中应用最广的一种方法，具有操作简单、灵敏度高、批量检测等优势。检测时首先将抗原或抗体吸附于固相载体表面，后加入待测抗体或抗原，再加入酶标记的抗原或抗体，最后通过底物显色生成有色物质，根据吸光值对样品进行定性及定量分析。识别微生物的特异性抗体的制备是ELISA技术的关键。实际工作中，ELISA方法在沙门氏菌的快速筛查中应用最多，此外也用于饲料中其它有毒有害物残留的检测。

4 蛋白质芯片检测技术

蛋白质芯片检测技术又称蛋白质微阵列技术，其基本结构与基因芯片技术类似。首先将酶、抗原、抗体等特异性蛋白被大量固定在经预处理的硅片或玻璃片上制成蛋白质芯片，后将样品加入固相载体，使其与芯片上蛋白质反应，最后经激光扫描获取图像并使用专门的软件对图像进行定性定量分析以得出结果。研究表明蛋白质芯片检测技术交叉反应较少因此重复性高，检测灵敏度高且整个检测用时较短，是有效的微生物检测方法。检测费用高是限制该技术实际应用的主要因素。

5 总结

快速检测方法能够在短时间内得到微生物污染的检测情况，是大批量饲料中微生物污染筛查的理想工具。然而，饲料中成分较为复杂，有微生物也有基因片段或蛋白质残留，因此与传统方法相比未经过诸如富集等预处理步骤的快速检测方法其检测结果只能作为参考，传统检测方法得出的结果更加可信。随着生物技术的发展，快速检测技术检测结果会越来越可靠，最终成为饲料中有害微生物的检测最终发展方向。

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10．3969/J.ISSN．1671-6027．2016．07.116