新城疫病毒的常规检测及病毒分离鉴定

程荣华，呼延含蓉，高 原，石 霖，闫海滨，徐 鹏*

（1.吉林省畜牧兽医科学研究院，吉林 长春 130062；2.吉林省动物疫病预防控制中心，吉林 长春 130062；3.辽宁省动物医学研究院，辽宁 沈阳 110164；4.锦州医科大学，辽宁 锦州 121001）

新城疫病毒的常规检测及病毒分离鉴定

程荣华1，呼延含蓉2，高 原3，石 霖3，闫海滨3，徐 鹏4*

（1.吉林省畜牧兽医科学研究院，吉林 长春 130062；2.吉林省动物疫病预防控制中心，吉林 长春 130062；
3.辽宁省动物医学研究院，辽宁 沈阳 110164；4.锦州医科大学，辽宁 锦州 121001）

新城疫是禽类常见的传染病，该疫病在我国常年流行，给养禽业带来了巨大的经济损失，虽然目前已经有多种类型的新城疫疫苗，然而由于疫苗与毒株的匹配度以及免疫程序等因素，该病目前仍然存时而发生。随着疫苗免疫以及毒株的进化，新城疫临床剖检症状越来越不典型，确诊需要依靠实验室检测进行，现将常规的实验室检测方法介绍如下。

1 荧光RT-PCR方法

荧光RT-PCR方法是目前动物疫病预防控制机构以及出入境检疫机构等常用的检测方法，目前市面有很多商品化的荧光RT-PCR试剂盒，该方法的优点是检测结果准确，快速，2～3h即可获得检测结果，适合大批量的实验室样品监测。该方法的局限性是由于荧光RT-PCR的价格昂贵，造成该方法较难在基层实验室推广使用。

2 RT-PCR方法

目前该方法应用较为普遍，很多实验室根据新城疫的保守基因设计检测引物，自己建立了RT-PCR方法，也有实验室直接购买商品化的试剂盒进行检测，该方法的优点是检测结果准确可信，特异性高。不足之处是该方法需要跑凝胶电泳，需要凝胶成像设备观察结果，检测时间相对荧光RT-PCR方法较长。

3 HI试验

HI试验是用来检测新城疫抗体水平的试验，针对免疫的鸡群，根据国家标准当样品HI结果大于等于5log2时，可以判定该样品免疫合格，当群体抗体合格率为70%时，则判定为该群体免疫合格；针对非免疫鸡，当HI结果大于等于5log2时，提示该样品可能感染新城疫病毒。该方法简单，无需仪器设备，在基层饲养场即可推广应用。

4 病毒分离鉴定

病毒分离是确诊新城疫及对该毒株进行深入研究的重要步骤。病毒分离的方法：剖检取鸡的肺脏、气管、脑、腺胃等组织，研磨后取上清液加入双抗后接种9日龄SPF鸡胚，24h内死亡的鸡胚弃去不要，培养24～72h后取鸡胚的尿囊液。取25uL的鸡胚尿囊液做血凝试验，选取有血凝价的样品保存备用。

5 病毒的基因序列测定及分析

应用PCR方法扩增新城疫的HN全长基因和F全长基因，将PCR产物回收后，送生物公司进行基因序列测定，对F基因的序列分析主要研究其裂解位点，同源性分析以及基因进化树的位置，对HN基因主要进行同源性分析及基因进化树的绘制。

目前，新城疫病毒的常规检测技术已经日趋成熟，对于规模化养殖场或者基层实验室可以应用HI试验，鸡胚接种，血凝实验甚至PCR方法进行新城疫病毒的诊断。这些常规检测技术是实现新城疫病毒的综合防控的技术依据。

10．3969/J.ISSN．1671-6027．2016．07.096

★通讯作者