烫伤宁制剂质量标准的研究

2016-02-16叶绘晟柳贤福龚志强广西中医药大学赛恩斯新医药学院广西530222

当代化工研究 2016年8期

O 叶绘晟柳贤福龚志强（广西中医药大学赛恩斯新医药学院广西 530222）

烫伤宁制剂质量标准的研究

O 叶绘晟柳贤福龚志强
（广西中医药大学赛恩斯新医药学院广西 530222）

建立烫伤宁制剂的质量控制标准。方法：薄层色谱法对烫伤宁制剂中的虎进行定性鉴别；采用高效液相色谱方法测定虎杖中大黄素含量。色谱柱：Hypersil ODS C18柱（250mm×4.6mm，5μm），流动相为甲醇-0.2%磷酸溶液（85:15），检测波长为254nm，流速1.0mL・min-1，柱温30℃。结果：薄层色谱斑点清晰，阴性对照无干扰；大黄素进样量在0.14～2.24μg之间呈良好的线性关系(r=0.9999)，平均加样回收率为99.73%，RSD为1.59%（n=9）。结论：所建方法简单、稳定、重复性好，可用于烫伤宁制剂的质量控制。

烫伤宁；虎杖；大黄素；薄层色谱法；高效液相色谱法

烫伤宁由地黄、红花、虎杖、当归、地榆、麦冬、陈皮、冰片组成的中药复方制剂，以食用植物油为基质，具有清凉、消炎、抗菌、止痛、生肌作用，对金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌等多种细菌均有抑制作用，主治烫伤、烧伤等，在临床上可替代常用外科创面用药。目前对烫伤宁的研究主要体现在其镇痛抗炎作用等药理作用及无菌验证检查方面的研究，笔者尚未见到烫伤宁质量控制方面的相关报道。因此，笔者在本实验中建立烫伤宁制剂的质量控制方法。

1.仪器与试药

(1)仪器Agilent1200高效液相色谱仪(DAD检测器，美国安捷伦公司)。SB3200T超声波清洗仪(上海能信超声有限公司)，紫外-可见分光光度计(美国安捷伦公司)，Millipore Simplicity-185超纯水仪(美国密里博公司)，BP211D电子分析天平(德国赛多利斯），硅胶G板(天津博纳艾杰尔科技有限公司)。

(2)试药大黄素(中国食品药品检定研究院，批号：110756-200110，供含量测定)。甲醇（美国Fisher科学世界公司，批号：A452-4），其余试剂为分析纯（来源：北京化工厂）。烫伤宁制剂由广西中医药大学附属瑞康医院制剂中心提供，生产批号(20150505、20120511、20150519)。

2.方法与结果

(1)虎杖的薄层鉴别

量取烫伤宁10ml于锥形瓶中，加10ml氢氧化钠萃取，振摇混匀，静置分层，取氢氧化钠层用盐酸调pH值2～3，用氯仿萃取2次，每次5ml，合并萃取液，挥干，残渣加甲醇1ml溶解，即得供试品溶液，备用。取虎杖对照药材1g加10ml花生油按照处方的工艺制成油剂，再以供试品制备方法制成虎杖对照药材溶液，备用。

取大黄素对照品加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液。参照薄层色谱法（中国药典2015年版一部附录ⅥB法，以下同）试验，吸取上述溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯:乙酸乙酯:甲醇:甲酸:水=3:1:0．2:0．5:0．5为展开剂，在紫外365nm波长下检视，供试品在与对照药材相应的色谱位置上，显相同的蓝色荧光点，而阴性溶液处无此蓝色荧光点（图1）。

图1 虎杖的TLC图1～3. 供试品 4. 虎杖对照药材 5.阴性对照Fig.1 TLC chromatograms of Polygonum cuspidatum 1～3.sample 4.standard 5. negative sample

(2)大黄素的含量测定

①标准溶液的制备。取105℃干燥至恒重的大黄素对照品3．50mg，置25mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，制成大黄素标准贮备液（0．14mg/mL）。

②样品溶液制备。精密量取烫伤宁10．0ml于锥形瓶中，精密加入10．0ml甲醇超声提取40分钟，取甲醇层，蒸干，用甲醇溶解，定容于10ml容量瓶，用0．45μm的滤孔滤膜过滤，取10μL注入液相色谱仪测定，即得。

③采用Hypersil。C18柱（250mm×4．6mm，5μm）；流动相为甲醇-0．2%磷酸溶液（85:15)；检测波长254nm；流速为1．0mL·min-1。柱温30℃；进样量10μL，大黄素的保留时间为6．0min，与相邻峰的分离度＞1．5。结果见图2。

图2 a大黄素对照品、b虎杖对照药材、c样品溶液、d阴性对照Fig.2 HPLC chromatograms of standard Emodin(a)、Polygonum cuspidatum(b)、Sample(c)、Negative sample(d)

④线性关系考察。精密吸取“2．2”项对照品溶液分别进样1μL、3μL、6μL、10μL，12μL、16μL测定，以峰面积(Y)为纵坐标，进样量(X)为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程：Y＝1910．3X-3．621 R2=0．999 ，表明大黄素进样量在 0．14-2．24μg之间与峰面积呈良好的线性关系。

⑤精密度实验。精密吸取2．2．1项对照品溶液10μL，注入高效液相色谱仪，连续进样6次，结果测得大黄素峰面积RSD值为0．82%，表明所用液相色谱仪的精密度较好。

⑥重复性实验。取同一批号样品（20150519）重复测定6次，测得大黄素含量，其RSD值为1．82%。结果表明，用上述方法测定大黄素的含量，重复性好。

⑦稳定性实验。取同一批号样品（20150519）分别在0、2、6、10、16、24h精密吸取样溶液10μL，注入液相色谱仪，结果测得样品中大黄素峰面积的RSD值为1．47%，表明供试品溶液在24h内保持稳定。

⑧样品测定。精密吸取按2．2．2项下方法制备好的三个批次样品10μL，注入液相色谱仪测定。用标准曲线法计算，实验结果见表1。

表1 样品大黄素含量测定结果（n=3）

Tab2 The results of sample determinations (n=3)

⑨加样回收率实验。精密吸取已知含量的样品（20150519）5．0mL，精密加入大黄素对照品0．42，0．56，0．70mg（加入量为样品含量的80%、100%和120%）。按“2．2．2”项样品制备方法，各平行制备3份，分别测定含量，计算加样回收率（大黄素含量以0．1082mg·mL-1计），结果见表2。实验结果可知，大黄素的平均加样回收率为99．73% (RSD=1．59%)。

3.讨论

薄层鉴别制备供试品溶液时，笔者曾采用乙醇、甲醇、三氯甲烷萃取法。但试验中发现萃取液浓缩后仍有植物油，难以进一步精制，提取特征成分。主要原因可能是虎杖中大黄素等成分含有酚羟基，因此可用酸碱处理后，再用三氯甲烷提取酸性水溶液，即可得到供试品溶液。

虎杖为君药，大黄素为其主要活性成分之一，因此以测定大黄素的含量作为其质量标准。本实验中笔者采用全波长扫描发现大黄素在254nm处具有最大吸收峰，同时考察了流动相结果发现使用甲醇-0．2%磷酸系统得到的色谱峰型较好、分离度达到要求。从样品测定结果可以看出三批样品测得含量差异不大，说明该制剂生产相对稳定。

本文所建立了的方法，简单、方便、实用，对该制剂制定相关的质量标准具有重要意义。

[1]黄蓓.烫伤宁的无菌检查方法验证[J].中国药业,2010,19(17):32-33.

[2]黄德武,严尚学,陈伯钧等.烫伤宁镇痛抗炎作用的实验研究[J].实验动物科学与管理,1999,16(2):21-23.

[3]王霞,肖海涛,齐晓岚等.虎杖及其成方制剂微乳薄层色谱研究[J].贵阳医学院学报,2011,36(3):238-241.

A Study on Quality of Tangshangning Preparation

Ye Huisheng, Liu Xianfu, Gong Zhiqiang
（Faculty of Chinese Medical Science Guangxi University of Chinese Medicine, Guangxi, 530222)

OBJECTIVE: To establish the standard for the quality control of Tangshangning Preparation. Method: The identifi cation of Polygonum cuspidatum was carried out by TLC. The content of emodin in Polygonum cuspidatum by HPLC. The samples were separated on the Hypersil ODS C18 (250mm ×4.6mm，5μm) colunm which was eluted with methanol-0.2% phosphoric acid solution (85:15) with detective wavelength at 254nm and fl ow rate at 1mL·min-1，column temperature at 30℃. Results: The TLC spots were highly clear without the interference of negative control and were reproductive. The method had good linear relationship within the range of 0.14～2.24μg（r=0.9999）for quercetin. The average recovery rate was 99.73% with RSD of 1.59%. Conclusion: The method is simple，rapid and reliable which can be used for the quality control of the Tangshangning Preparation.

Tangshangning Preparation；Polygonum cuspidatum；Emodin；TLC；HPLC