PSCA rs2294008基因变异对膀胱癌分级、分期的影响

杨峻峰 余闫宏 肖民辉 章卓睿 杨茂林

·临床研究·

PSCA rs2294008基因变异对膀胱癌分级、分期的影响

杨峻峰 余闫宏 肖民辉 章卓睿 杨茂林

目的研究PSCA rs2294008多态性是否与膀胱癌易感性相关。方法抽取235例膀胱癌患者和200例非膀胱癌患者的血样，进行基因型测定，确定患者血样中PSCA rs2294008基因型，进行病例对照研究。结果rs2294008的基因型CC、CT和TT在膀胱癌患者中出现的概率分别为42.1%、47.7%、10.2%，在对照组中分别为52.0%、40.0%、8.0%；合并的CT/TT和CC基因型对比，合并基因型使膀胱癌风险显著增加(CT/TT：OR=1.37，95%CI1.08～1.74)。结论PSCA中rs2294008的基因多态性与膀胱癌的风险相关。

膀胱肿瘤； 多态性,单核苷酸； 前列腺干细胞抗原

在中国，膀胱癌处于常见恶性肿瘤的第十位，2009年膀胱癌发病率为6.61/10万(男性9.78/10万，女性3.35/10万)[1]。很多人均暴露于膀胱癌的危险因素中，但仅有部分人发展为膀胱癌，表明人群中不同的遗传易感性与膀胱癌相关。全基因组研究表明前列腺干细胞抗原(prostate stem cell antigen, PSCA)的8q24.3为膀胱癌的易感位点[2]。rs2294008(C/T)位于PSCA启动子前的第一个碱基，本研究拟验证rs2294008的多态性与膀胱癌分级、分期的关系。

对象与方法

一、研究对象

收集2013年1月至2016年5月入住云南省第一人民医院泌尿外科的235例膀胱癌(病理确诊为尿路上皮细胞癌)患者的血样作为实验组，其中包括复发的膀胱癌患者，排除同时患有其他肿瘤、转移癌及预先接受过放、化疗的膀胱癌患者。另选取同时期200例非肿瘤患者(多为结石患者)的血样作为阴性对照。所有患者均签署入组同意书。

实验组和对照组的基本情况见表1。两组患者的年龄、性别差异均无统计学意义(P=0.802，P=0.705)。

表1 实验组和对照组患者的基本情况[例(%)]

二、基因分型

隔离血样中的淋巴细胞，离心后提取血样DNA，使用PCR方法，PCR引物：正向引物5′-AAGTCACCTGAGGCCCTCTC-3′；反向引物5′-CTCACCCCTGCTCCCTTC-3′。反应体系包括200 nmol/L PCR引物[生工生物工程(上海)股份有限公司]，1μmol/L SYTO9荧光染料(Invitrogen，USA)，0.5 U f-Taq聚合酶(Invitrogen，USA)，40 ng基因组DNA构成10 μl的反应体系。循环包括5 min 95 ℃，随后40个循环：95 ℃ 5 s，69 ℃ 30 s，72 ℃ 10 s。使用ABI PRISM 3100型基因分析仪分析单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms, SNPs)位点。

三、统计学方法

方差分析实验组和对照组的基因变异值和rs2294008多态性分布，并使用逻辑回归模型计算调整优势率(OR)和95%的可信区间(CI)，分析与膀胱癌的相关性。设CC基因型为风险基线，预期频率使用Hardy-weinberg平衡测试。以P<0.05为差异有统计学意义。统计软件为SPSS 16.0。

结 果

一、PSCA rs2294008和膀胱癌的风险

rs2294008的等位基因、基因频率和膀胱癌风险的关系见表2。对照组中的基因频率基本保持不变，符合哈迪-温伯格定律(2=0.4，P=0.6)。我们利用CC基因型作为参照，发现CT而不是TT基因型与膀胱癌风险提高更为相关(CT基因型：OR=1.38，95%CI1.05～1.77；TT基因型：OR=1.34，95%CI0.84～2.05)。考虑到TT基因型相对较少且具有类似OR值，我们合并CT和TT基因型作为基因模型，用于随后的统计，结果显示合并基因型CT/TT与膀胱癌发病风险显著相关(CT/TT基因型：OR=1.37，95%CI1.08～1.74)。

表2 PSCA rs2294008基因型和等位基因频次与膀胱癌风险的关系[例(%)]

二、PSCA rs2294008与膀胱癌分级、分期的关系

PSCA rs2294008的基因型与膀胱癌的病理分级和临床分期有相关性，统计结果见表3。在低级别乳头状尿路上皮癌(OR=1.44，95%CI1.02～1.97)、肌层浸润性膀胱癌(OR=1.67，95%CI1.19～2.34)中，T碱基的出现大幅提高了膀胱癌风险，并与肌层浸润性膀胱癌相关。但在低度恶性潜能尿路上皮乳头状瘤、高级别乳头状尿路上皮癌和非肌层浸润性膀胱癌中，尚未显现T碱基与膀胱癌的重要联系。

表3 PSCA rs2294008与膀胱癌进展的关系[例(%)]

讨 论

膀胱肿瘤是泌尿系最常见的恶性肿瘤，据估计，2012年世界范围内膀胱癌的新增病例约有330 400例，另有123 100例的死亡病例[3]。在我国，膀胱癌是泌尿系统病死率最高的肿瘤，其早期诊断及复发进展监测仍以有创的膀胱镜和尿脱落细胞学检测为重要方法，术后易复发及进展是导致其预后不佳的重要因素，一旦进展为肌层浸润性膀胱癌(pT2～pT4)，其5年生存率分别为T2期84.3%、T3期43.9%、T4期10.2%[4]。膀胱癌已成为严重影响人类健康的常见恶性疾病，其发病机制未明，吸烟及化学致癌物的职业暴露是膀胱癌最主要的危险因素，而以往在基因水平上的研究也局限于环境因素和DNA修复等，或者集中于癌基因突变、抑癌基因失活等方面的研究[5]。

全基因关联研究已经发现众多基因变异与多种肿瘤的相关性，这些发现可以帮助了解肿瘤的发病机制。PSCA为前列腺特性细胞表面抗原，PSCA在正常前列腺中有大量表达，在大部分前列腺癌中过量表达。同样在前列腺外的正常组织中也有表达，例如膀胱、食管、胃、胰腺、肾脏等[6-8]。PSCA在其他非前列腺的恶性组织中呈现高表达，包括膀胱癌、肾透明细胞癌、滋养细胞癌和胰腺癌[9-10]。PSCA为糖基磷脂酰肌醇锚定于细胞表面的蛋白，在多种肿瘤中均有表达。它在正常或肿瘤组织中的生物学特性仍不清楚。基于PSCA抗体的免疫治疗已用于前列腺癌和胰腺癌的治疗中。我们通过对膀胱癌患者的血SNPs位点检测，认为PSCA有可能成为膀胱癌的治疗靶点。

本研究表明PSCA中rs2294008的基因多态性是膀胱癌的风险因素，我们探索rs2294008 CT和TT基因型与肌层浸润性膀胱癌的相关性，患者均来源于云南省第一人民医院泌尿外科，这两种基因型可增加罹患膀胱癌的概率。通过分析表明CT/TT基因型和肿瘤的分期、分级数据有助于识别不同浸润程度的膀胱癌信号通路。分层分析表明rs2294008与肌层浸润性膀胱癌有着密切联系。

目前研究表明非肌层浸润性膀胱癌和肌层浸润性膀胱癌的作用通路不同，涉及了不同的病理机制、不同的遗传和表观遗传缺陷[11]。可能的生物学机制表明rs2294008多态性与膀胱风险相关，碱基T降低了PSCA的转录活性，PSCA被认为是抑癌基因并与细胞黏附关系密切[12]。PSCA在正常和肿瘤细胞中的功能尚不清，本研究发现CT和混合基因CT/TT的基因型与膀胱癌风险呈正相关。混合基因型CT/TT是一个优势基因模式，与增加膀胱癌风险相关。rs2294008(C/T)是一个错意突变位点，处于PSCA第一个外显子，rs2294008中T碱基创造了一个新的翻译密码子在常规起始位点上游，引导PSCA蛋白的表达，PSCA的表达减少了启动子的转录活性。有研究报道，膀胱癌中PSCA rs2294008带有碱基T的mRNA的表达比正常组织高[13]。

本研究尚存在不足，因研究仅基于我院泌尿外科的病例，不能完全排除选择性偏差。另外，样本数量过少，还有待加大样本量，进一步全面验证T碱基与膀胱癌分级、分期的关系。

PSCA rs2294008基因多态性与膀胱癌相关，在膀胱癌的发生、发展中起到了一定的作用，rs2294008或许能成为有用的膀胱癌诊断标志物。

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(本文编辑：熊钰芬)

Genetic variant as a selection marker in PSCA and bladder cancer susceptibility

YANGJun-feng,YUYan-hong,XIAOMin-hui,ZHANGZhuo-rui,YANGMao-lin.

DepartmentofUrology,FirstPeople′sHospitalofYunnanProvince,Kunming650032,ChinaCorrespondingauthor：YUYan-hong,E-mail:yyhkmyns@sina.com

Objective To investigate the association between the prostate stem cell antigen (PSCA) rs2294008 and bladder cancer. Methods We conducted a hospital-based case-control study of 235 cases and 200 controls. We genotyped the rs2294008 polymorphism and assessed its association with risk of bladder cancer. Results The genotype of rs2294008 is CC, CT, and TT. In case group, the occurrence probability is 42.1%, 47.7%, 10.2%, and in control group, the occurrence probability is 52.0%, 40.0%, 8.0%. A significant increased risk of bladder cancer was found for rs2294008 CT/TT genotypes (adjusted odds ratio, 1.37; 95% confidence interval, 1.08-1.74) compared with the CC genotype. Conclusions These results indicated that the rs2294008 polymorphism of PSCA gene may play a role in bladder cancer carcinogenesis and it could be served as a biomarker for genetic susceptibility to bladder cancer.

Urinary bladder neoplasms; Polymorphism, single nucleotide; Prostate stem cell antigen

国家自然科学基金地区基金项目(81260375)

650032 昆明，云南省第一人民医院泌尿外科

余闫宏，E-mail:yyhkmyns@sina.com

10.3870/j.issn.1674-4624.2016.05.005

2016-09-01)