膜荚黄芪中黄酮类化学成分研究

王雪，唐生安，段宏泉，2

（天津医科大学1.药学院，天津市临床药物关键技术重点实验室；2.基础医学研究中心，天津300070）

论著

膜荚黄芪中黄酮类化学成分研究

王雪1，唐生安1，段宏泉1，2

（天津医科大学1.药学院，天津市临床药物关键技术重点实验室；2.基础医学研究中心，天津300070）

目的：研究膜荚黄芪中黄酮类化学成分。方法：采用硅胶柱色谱和HPLC制备色谱方法分离纯化得到单体化合物，采用有机波谱方法鉴定化合物结构。结果：从膜荚黄芪乙醇提取物中分离得到8个黄酮类化合物，分别为2′，7-二羟基-3′，4′-二甲氧基异黄烷-2′-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（1），3′，4′-二甲基异黄烷（2），芒柄花素（3），芒柄花素-7-O-β-D-葡萄糖苷（4），毛蕊异黄酮（5），（6aR，11aR）3-羟基-9，10-二甲氧基紫檀烷（6），（6aR，11aR）9，10-二甲氧基紫檀烷-3-O-β-D-葡萄糖苷（7），7，2′-二羟基-3′，4′-二甲氧基异黄烷-7-O-β-D-葡萄糖苷（8）。结论：化合物1为首次从该属植物中分离得到。

膜荚黄芪；化学成分；色谱分离；黄酮类；2′，7-二羟基-3′，4′-二甲氧基异黄烷-2′-O-β-D-吡喃葡萄糖苷

膜荚黄芪（Astragalus membranceus（Fisch）Bge）是豆科黄芪属植物，是黄芪的正品之一，为常用中药［1］，具有补气固表，利尿脱毒，益气补中之功效［2］。用于久泻脱肛，久溃不敛，内热消渴，慢性肾炎蛋白尿糖尿病等［3］。黄芪的化学成分主要为三萜皂苷类、黄酮类和多糖类［4］，本文主要对膜荚黄芪中黄酮类成分进行了研究。

1　材料与方法

1.1仪器、试剂及材料核磁共振仪：Bruker AV 400 instrument（TMS内标）；液质联用色谱仪：Alliance 2695，Quattro Micro TM ESI（Waters）；半制备高效液相色谱仪：日本分光公司（JASC O），P U-2089（泵），RI-2031和UV-2075（检测器）；制备HPLC色谱柱：YMC-Pack SIL SL12S05-2510WT（10 mm×250 mm）；氘代试剂（ALDRICH公司）；柱色谱和薄层色谱用硅胶均系青岛海洋化工厂生产，所用试剂均系分析纯。

膜荚黄芪于2010年购买于陕西，由天津医科大学药学院唐生安副教授鉴定，标本（D20100415）存放于天津医科大学药学院。

1.2提取分离将黄芪清膏600 g，加入95%乙醇（1 000 mL）浸泡3次，合并浸泡液，减压浓缩浸泡液的总提取物143 g。将总提物混悬于水（2 000 mL）中，用乙酸乙酯（2 000 m L）萃取3次，合并萃取液，浓缩干燥称重，得乙醇萃取物8 g（0101）。

0101经HW-40柱分离，以二氯甲烷-甲醇（1∶1）为流动相洗脱，得到6个组分（0401-0406）；0404经HPLC纯化，以甲醇-水（8∶2）为流动相，得到化合物3（14.1 mg）；0403经HPLC纯化，以甲醇-水（8∶2）为流动相，得到10个组分（0501-0510）。0503经GPC纯化，以甲醇为流动相，得到12个组分（1101-1112），其中1101为化合物4（38.9 mg），1109经HPLC纯化，以甲醇-水（7∶3）为流动相，得到化合物7（17.4 mg）；0504经GPC纯化，以甲醇为流动相，得到化合物5（34.2 mg）；0505经GPC纯化，以甲醇为流动相，得到11个组分（1501-1511），1508经制备薄层色谱分离，以二氯甲醇-甲醇（95∶5）为展开剂，得到化合物2（9.5 m g）、化合物6（2.5 mg）；0405经GPC纯化，以甲醇为流动相，得到化合物1（2.0 mg）；0406经GPC纯化，以甲醇为流动相，得到化合物8（5.1 mg）。

2　结果

从膜荚黄芪中分离得到8个化合物。

2.1化合物1 2′，7-二羟基-3′，4′-二甲氧基异黄烷-2′-O-β-D-吡喃葡萄糖苷，白色粉末。ESI-MS m/ z481［M+H］+（分子式C23H28O11）。1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）δH：2.64（1H，dd，J=16.0Hz，3.5 Hz，H-4），2.79（1H，dd，J=16.0Hz，3.5 Hz，H-4），3.58（1H，m，H-3），3.72（3H，s，3′-OCH3），3.75（3H，s，4′-OCH3），3.78（1H，t，J=10.0Hz，H-2），4.27（1H，br.d，J= 10.0Hz，H-2），4.87（1H，d，J=6.7Hz，H-1″），6.18（1H，br.d，H-8），6.28（1H，d，J=8.1Hz，H-6），6.80（1H，d，J=8.7Hz，H-5′），6.85（1H，d，J=8.3Hz，H-5），6.90（1H，d，J=8.7Hz，H-6′）；13C-NMR（DMSO-d6，100MHz）δC：69.6（C-2），30.3（C-3），30.8（C-4），130.0（C-5），107.8（C-6），156.4（C-7），102.6（C-8），154.7（C-9），112.9（C-10），128.7（C-1′），147.6（C-2′），141.2（C-3′），152.1（C-4′），108.6（C-5′），121.6（C-6′），103.4（C-1″），73.9（C-2″），77.4（C-3″），70.2（C-4″），76.4（C-5″），61.3（C-6″），60.5（3′-OCH3），55.8（4′-OCH3）。

2.2化合物2 3′，4′-二甲基异黄烷，白色粉末。ESI-MS m/z319［M+H］+（分子式C17H18O6）。1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）δH：2.74（1H，dd，J=15.4Hz，4.6 Hz，H-4），2.85（1H，m，H-4），3.32（1H，m，H-3），3.67（3H，s，H-3′-OCH3），3.75（3H，s，4′-OCH3），3.92（1H，t，J=10.0Hz，H-2），4.16（1H，br.d，J=10.3Hz，H-2），6.18（1H，d，J=2.1Hz，H-8），6.29（1H，d，J=2.2Hz，H-5），6.46（1H，d，J=2.3Hz，H-6），6.78（1H，d，J= 8.6Hz，H-5′），6.86（1H，d，J=8.2Hz，H-6′），8.90（1H，s，2′-OH），9.12（1H，s，7-OH）；13C-NMR（DMSO-d6，100MHz）δC：69.1（C-2），31.4（C-3），29.7（C-4），130.0（C-5），108.0（C-6），156.4（C-7），102.5（C-8），154.5（C-9），112.4（C-10），121.0（C-1′），148.1（C-2′），136.1（C-3′），151.6（C-4′），103.1（C-5′），121.4（C-6′），60.2（3′-OCH3），55.6（4′-OCH3）。

2.3化合物3芒柄花素，白色针晶。ESI-MS m/ z269［M+H］+（分子式C16H12O4）。1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）δH：3.78（3H，s，-OCH3），6.87（1H，s，H-8），6.94（1H，dd，J=6.9Hz，1.9 Hz，H-6），6.99（2H，d，J= 8.6Hz，H-3′，5′），7.51（2H，d，J=8.6Hz，H-2′，6′），7.98（1H，d，J=8.8Hz，H-5），8.34（1H，s，H-2），10.82（1H，s，7-OH）；13C-NMR（DMSO-d6，100MHz）δC：153.1（C-2），124.2（C-3），174.6（C-4），127.3（C-5），115.2（C-6），162.6（C-7），102.1（C-8），157.4（C-9），116.6（C-10），123.1（C-1′），130.0（C-2′），113.6（C-3′），158.9（C-4′），113.6（C-5′），130.0（C-6′），55.1（4′-OCH3）。

2.4化合物4芒柄花素-7-O-β-D-葡萄糖苷，白色针晶。ESI-MS m/z431［M+H］+（分子式C22H22O9）。1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）δH：3.79（3H，s，-OCH3），5.10（1H，d，J=5.9Hz，H-1″），7.00（2H，d，J=8.3Hz，H-3′，5′），7.15（1H，d，J=8.9Hz，H-6），7.25（1H，m，H-8），7.54（2H，d，J=8.2Hz，H-2′，6′），8.06（1H，d，J= 8.8Hz，H-5），8.44（1H，s，H-2）；13C-NMR（DMSO-d6，100MHz）δC：154.1（C-2），123.8（C-3），175.1（C-4），127.4（C-5），116.1（C-6），161.9（C-7），103.9（C-8），157.5（C-9），118.9（C-10），124.5（C-1′），130.0（C-2′），114.1（C-3′），159.5（C-4′），114.1（C-5′），130.0（C-6′），100.5（C-1″），73.6（C-2″），77.0（C-3″），69.6（C-4″），77.2（C-5″），61.1（C-6″），55.6（4′-OCH3）。

2.5化合物5毛蕊异黄酮，白色针晶。ESI-MS m/ z285［M+H］+（分子式C16H12O5）。1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）δH：3.80（3H，s，-OCH3），6.87（1H，br.s，H-6），6.93（1H，br.s，H-6），6.95（2H，br.s，H-5′，6′），7.06（1H，br.s，H-2′），7.97（1H，d，J=8.8Hz，H-5），8.29（1H，s，H-2）；13C-NMR（DMSO-d6，100MHz）δC：153.0（C-2），123.3（C-3），174.5（C-4），127.3（C-5），115.1（C-6），162.5（C-7），102.1（C-8），157.3（C-9），116.6（C-10），124.7（C-1′），116.4（C-2′），146.0（C-3′），147.5（C-4′），111.9（C-5′），119.7（C-6′），55.6（4′-OCH3）。

2.6化合物6（6aR，11aR）3-羟基-9，10-二甲氧基紫檀烷，白色粉末。ESI-MS m/z301［M+H］+（分子式C17H16O5）。1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）δH：3.61（1H，d，J=6.0Hz，H-6a），3.70（3H，s，10-OCH3），3.73（3H，s，9-OCH3），4.23（1H，dd，J=10.0Hz，6.0 Hz，H-6），5.56（1H，d，J=5.8Hz，H-11a），6.25（1H，br.d，H-4），6.48（1H，dd，J=8.3Hz，2.0Hz，H-2），6.52（1H，d，J= 8.2Hz，H-8），6.98（1H，d，J=8.1Hz，H-7），7.30（1H，d，J=8.4Hz，H-1），9.65（1H，br.d，3-OH）；13C-NMR（DMSO-d6，100MHz）δC：132.1（C-1），109.7（C-2），158.8（C-3），102.7（C-4），156.2（C-4a），65.6（C-6），39.2（C-6a），121.8（C-6b），118.7（C-7），104.9（C-8），152.7（C-9），133.3（C-10），151.0（C-11），78.5（C-11a），111.0（C-11b），56.0（9-OCH3），59.8（10-OCH3）。

2.7化合物7（6aR，11aR）9，10-二甲氧基紫檀烷-3-O-β-D-葡萄糖苷，白色针晶。ESI-MS m/z463［M+H］+（分子式C23H26O10）。1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）δH：3.71（1H，m，H-6a），3.73（3H，s，10-OCH3），3.79（3H，s，9-OCH3），4.28（1H，d，J=7.1Hz，H-6），4.85（1H，d，J=7.4Hz，H-1′），5.63（1H，d，J=6.5Hz，H-11a），6.53（1H，m，H-8），6.55（1H，d，J=3.2Hz，H-4），6.72（1H，d，J=8.6Hz，H-2），7.01（1H，d，J=8.6Hz，H-7），7.42（1H，d，J=8.5Hz，H-1）；13C-NMR（DMSO-d6，100MHz）δC：132.0（C-1），110.4（C-2），158.5（C-3），103.9（C-4），156.1（C-4a），65.7（C-6），39.2（C-6a），121.5（C-6b），118.7（C-7），105.1（C-8），152.7（C-9），133.3（C-10），151.0（C-11），78.2（C-11a），114.0（C-11b），100.2（C-1′），73.1（C-2′），76.5（C-3′），69.6（C-4′），77.0（C-5′），60.6（C-6′），59.8（9-OCH3），56.0（10-OCH3）。

2.8化合物8 7，2′-二羟基-3′，4′-二甲氧基异黄烷-7-O-β-D-葡萄糖苷，白色粉末。ESI-MS m/z481［M+H］+（分子式C23H28O11）。1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）δH：2.81（1H，dd，J=15.8Hz，4.7 Hz，H-4），2.94（1H，dd，J=15.9Hz，5.2 Hz，H-4），3.19（1H，t，J= 5.5Hz，H-2”），3.46（1H，t，J=5.9Hz，H-3），3.69（3H，s，3′-OCH3），3.75（3H，s，4′-OCH3），3.97（1H，t，J= 9.9Hz，H-2），4.20（1H，d，J=10.1Hz，H-2），4.77（1H，d，J=9.4Hz，H-1”），5.25（1H，d，J=4.6Hz，H-6），6.47（1H，br.s，H-5′），6.54（1H，d，J=8.2Hz，H-8），6.79（1H，d，J=8.6Hz，H-6′），7.00（1H，d，J=8.4Hz，H-5）；13C-NMR（DMSO-d6，100MHz）δC：69.7（C-2），31.8（C-3），29.5（C-4），130.5（C-5），109.3（C-6），157.2（C-7），104.4（C-8），154.9（C-9），116.2（C-10），121.3（C-1′），148.6（C-2′），136.6（C-3′），152.1（C-4′），103.7（C-5′），121.9（C-6′），101.1（C-1”），73.7（C-2”），77.1（C-3”），70.2（C-4”），77.5（C-5”），61.2（C-6”），60.7（3′-OCH3），56.1（4′-OCH3）。

3　讨论

本文对膜荚黄芪进行化学成分分离、纯化并得到单体化合物。通过核磁共振波谱、质谱等方法确定化合物的结构。结果表明，从膜荚黄芪分离得到8个化合物，1H-NMR和13C-NMR数据与文献报道一致，依次鉴定为2′，7-二羟基-3′，4′-二甲氧基异黄烷-2′-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（1）［5］，3′，4′-二甲基异黄烷（2）［6］，芒柄花素（3）［7］，芒柄花素-7-O-β-D-葡萄糖苷（4）［8］，毛蕊异黄酮（5）［9］，（6aR，11aR）3-羟基-9，10-二甲氧基紫檀烷（6）［10］，（6aR，11aR）9，10-二甲氧基紫檀烷-3-O-β-D-葡萄糖苷（7）［11］，7，2′-二羟基-3′，4′-二甲氧基异黄烷-7-O-β-D-葡萄糖苷（8）［12］。其中1为本属植物中首次分离得到，丰富了豆科黄芪属植物化学成分研究。黄酮类成分是黄芪中非常重要的药理活性成分，具有清除氧自由基、抑制脂质过氧化、维持血中NO浓度和保护缺血再灌注损伤等多种药理活性［13］。目前中药谱效关系研究中，以多成分协同作用为主，但各成分对药效的贡献程度不同。本文分离制备更多的单体化合物，进而对中药各单体化合物的药效关系进行研究，为进一步深入研究黄芪化学成分和药理作用提供理论基础。

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（2016-01-12收稿）

Studies on flavonoids and related constituents from Astragalus membranceus（Fisch）Bge

WANG Xue1，TANG Sheng-an1，DUAN Hong-quan1，2
（Tianjin Medical University 1.School of Pharmacy，Tianjin Key Laboratory on Technologies Enabling Development of Clinical Therapeutics and Diagnostics（Theranostics）；2.Research Center of Basic Medical Sciences，Tianjin 300070，China）

Objective：To study flavonoids and related constituents from Astragalus membranceus（Fisch）Bge.M ethods：Chemical constituents were isolated and purified by repeated column chromatography（silica geland preparative HPLC）.Their structures were elucidated by spectral data analysis.Results：Eight compounds（1-8）were isolated and their structures were identified by comparing their spectral data with literature values as follows：sphaerophyside SB（1），isomucronulatol（2），formononetin（3），formononetin-7-O-β-D-glycoside（4），calycosin（5），methylnissolin（6），（6aR，11aR）9，10-dimethoxypterocarpan-3-O-β-D-glycoside（7），7，2′-dihydroxy-3′，4′-dimethoxy-isoflavane-7-O-β-D-glycoside（8）.Conclusion：Compounds 1 could be isolated from this plant for the first time.

Astragalus membranceus（Fisch）Bge；chemical constituents；chromatographic separation；flavonoids；sphaerophyside SB

R91

A

1006-8147（2016）05-0409-03

王雪（1986-），女，实验师，硕士，研究方向：天然药物化学；

段宏泉，E-m ail：duanhq@tmu.edu.cn。