可溶性止血纱布止血效果以及安全性评价试验

可溶性止血纱布止血效果以及安全性评价试验

目的 研究可溶性止血纱布对兔肝脏创面的止血效果以及安全性。方法 制作兔肝脏出血模型，空白对照组用无菌纱布止血，阳性对照组用泰绫止血，受试组用可溶性止血纱布止血。记录止血时间，计算出血量，术后动物进行临床症状观察，测定肝和肾功能指标，组织病理学以及透射电镜检查。结果 受试组的出血量减少，止血时间缩短；其他检查与空白对照组无差异。结论 未见受试组样品对兔机体有毒性作用，止血效果较阳性对照组无差异。

可溶性止血纱布；泰绫；止血；安全性

吸收性止血绫（泰绫）为水溶性纤维素醚化衍生物，主要成分是羧甲基纤维素钠（CMC），具有快速止血、防止术后粘连及促进组织愈合的作用，是目前常见的新型医用止血材料之一[1]。它以止血性能好、可吸收、薄、轻、柔、不易造成组织粘连等特点赢得了外科医生的青睐，被广泛应用于普外科、妇产科、心脏外科、胸科、骨科、神经外科、泌尿外科等科室手术中[2-13]。特别是对于凝血功能障碍和实质性脏器出血的患者，单单使用常规外科技术止血不能起到很好的效果，帮助控制毛细血管、静脉出血。实验以泰绫为对照品，对主要成分相同的可溶性止血纱布的止血效果和安全性进行评价研究，为其临床应用止血效果和安全性评价提供参考。

1 材料与方法

1.1 实验动物

新西兰兔，雌雄各半，随机分组，体重1.8～2.2 kg，由山东鲁抗医药股份有限公司提供；饲养环境：温度：16～26oC；湿度：40%～70%；照明时间：12 h/12 h明暗交替。饲养一周后进行实验，实验前一天禁食不禁水。

1.2 实验样品

空白对照：医用脱脂纱布块，河南天和卫生材料有限公司，规格：6 cm×8 cm-8P。

实验样品：可溶性止血纱布，南阳市久康医疗器械有限公司生产，规格：5 cm×8 cm。

对照样品：吸收性止血绫（泰绫），北京泰科斯曼科技发展有限公司，规格：8 cm×5 cm。

1.3 主要实验试剂和仪器

主要实验试剂为：3%戊巴比妥钠溶液 (默克)；10%甲醛溶液(烟台市双双化工有限公司)；4%的戊二醛溶液 (河北医科大学电镜室配置)。主要仪器为：AMS-18A全自动生化仪；电子天平(沈阳龙腾电子有限公司)；H-7500 透射电镜(日立H7500)；高速台式离心机(sigma3-15)。

1.4 试验方法

1.4.1 分组

试验选用36只新西兰兔，雌雄各半，随机分为空白对照组（实施手术采用普通无菌纱布止血）、阳性对照组（吸收性止血绫（泰绫）进行止血）、受试组（可溶性止血纱布进行止血）。

1.4.2 手术方法

方法[14]，取新西兰兔称重，用3%戊巴比妥钠溶液从新西兰兔耳缘静脉实施麻醉，备皮、消毒、打开腹腔，充分暴露右叶肝脏，用手术刀在右肝同一部位切一十字切口(深度约0.3 cm，长度约0.5 cm)，将样品(1.5 cm×1.5 cm)敷于创面，轻压10 s，并同时开始记时，用质量相同的干净滤纸吸取流出的血液，直到血液停止流出，此时停止计时，记录出血时间；立即称量吸血后滤纸的总重量，记录滤纸片数，根据公式计算出血量：出血量＝吸血后滤纸总重量－(单片滤纸重量×滤纸片数)，以此来评价其止血效果。术毕，逐层缝合，消毒，并腹腔注射青霉素，连续3 d，每天一次。

1.4.3 指标检测临床症状观察

1.4.3.1 止血纱布可吸收程度观察及病理组织学检查

上述新西兰兔分别于术后1、3、7、10 d各取3只新西兰兔肝脏，打开腹腔，肉眼观察样品的吸收情况和肝脏大体变化。并取创伤部位组织保存于10%甲醛溶液中，送病理组织学检查，观察病理学改变。同时取三组样品术后10 d各两只新西兰兔创伤部位组织保存于4%的戊二醛溶液中，送电镜检查，观察细胞的显微改变。

1.4.3.2 可溶性止血纱布对新西兰兔肝肾功能的影响

上述新西兰兔术后10 d，各组新西兰兔禁食不禁水12 h后颈动脉取血，应用AMS-18A全自动生化仪和试剂盒，分别测定肝功能指标：谷丙转氨酶(ALT)，谷草转氨酶(AST)，r-谷氨酰基转移酶(r-GT)，碱性磷酸酶（ALP）和肾功能指标：尿素(BUN)，肌酐(Cr)，尿酸(UA)，比较各组间的差异。具体方法：从新西兰兔颈动脉采血，血样于离心管静置约1 h后放于离心机离心，速度为3 000 r/min，离心15 min，取上清液置试管中。用AMS-18A全自动生化仪按试剂盒要求对肝、肾功能指标进行测定。

1.5 统计学方法

应用IBM-SPSS20.0统计软件对实验数据进行处理，Excel绘制图表。实验结果以x±s表示，计量资料多组间比较采用方差分析（One-Way ANOVA）进行比较。

2 结果

2.1 出血时间和出血量

受试组、阳性对照组的出血时间明显短于空白对照组，差异具有统计学意义（P＜0.01）， 出血量小于空白对照组（P＜0.05）；受试组的出血时间和出血量与阳性对照组差异无统计学意义（P＞0.05），结果表明可溶性止血纱布具有明显的止血作用，见表1。

表1 止血时间和出血量（x±s，n=12）Tab.1 Hemostasis and blood loss （x±s，n=12）

2.2 血常规和血液生化指标

表2和表3肝肾功能指标的测定结果，尽管各组间数值有差异但是经SPSS统计发现P＞0.05，即各组间均无显著性差异。尿酸在各组均未检测到说明是由于手术造成的。说明可溶性止血纱布对新西兰兔肝功能无明显损害作用，结果见表2和表3。

表2 血液学统计结果（x± s，n=3）Tab.2 Hematology statistics （x± s，n=3）

表3 血清生化学统计结果（x± s，n=3）Tab.3 Serum biochemistry statistics（x± s，n=3）

2.3 剖检及病理学检查

剖检：术后第1 d，三组样品创面处有轻度水肿，受试组和阳性对照组的肝脏表面有浅白色未完全吸收的样品覆盖；第3，第7和第10 d各组肝脏表面光滑无异物，结果表明可溶性止血纱布在肝脏表面可被完全吸收。三组部分动物肝右叶与网膜有不同程度的粘连，其他脏器未见样品相关的肉眼改变。

病理学检查：空白对照组肝细胞轻度或中度水肿，被膜正常或略增厚，无纤维增生或略有纤维瘢痕形成。阳性对照组和受试组（图1）肝细胞轻度或中度水肿变性，被膜增厚，纤维瘢痕形成，有少许或微量异物肉芽肿形成。各实验组术后1 d～10 d水肿逐渐减轻，炎症和坏死组织3 d达到高峰，7 d可见肉芽组织形成，被膜增厚，血管增生，10 d部分组织纤维化。结果表明可溶性止血纱布虽与空白对照组比较略有差别，但对肝脏的损害并不明显。

图1 (×400)受试组术后1、3、7、10 d的肝脏病理图片Fig.1 (×400)Liver pathologic image after surgery 1,3,7,10 day in the test group

2.4 透射电镜检查

透射电镜结果（图2）显示，空白对照组、阳性对照组和受试组术后 10 d肝细胞显微变化基本相同，核圆核仁可见，核膜连续完整；线粒体正常，脊可见，有的稍有模糊；核旁见丰富的内质网；细胞连接正常，有的间隙稍增大；细胞表面有微绒毛突起，有的略为减少，结果表明可溶性止血纱布可吸收止血纱布对肝细胞显微结构无明显的影响。

3 讨论

可溶性止血材料的主要成分是羧甲基纤维素钠（CMC），与市面上销售的可吸收性止血绫（泰绫）以及美国强生公司的止血材料—速即纱（Surgicel）主要成分相同。CMC 是一种可降解的生物高分子材料，能够在生物体内经水解、酶解等过程，逐渐降解成低分子量化合物或单体，降解产物能参加体内正常新陈代谢而消失。CMC 早已被用于食品、医药、化妆品工业中，并且国内外大量的动物及临床试验证明可明显减少手术后腹膜粘连的形成[15-18]。

图2 透射电镜结果Fig.2 Images by transmission electron microscopy

研究发现该类的止血材料通过物理、化学、生理三个途径止血：1）吸收分泌液，形成凝胶，为血凝块提供基础，与血液接触后迅速膨大，具有机械的阻塞作用；2）为血小板与血小板的相互黏着提供机械框架结构，在出血部位促进血栓形成；3）溶解后可形成带负电的胶粒，加速启动内源性凝血系统；4）可以激活内源性凝血因子[19-21]。

实验结果提示，可溶性止血纱布对新西兰兔肝脏损伤后出血能产生明显的止血作用，使出血时间较空白对照组显著缩短，出血量明显减少，其效果与泰绫的止血作用没有明显差异。同时其在体内可被较快吸收，其中在肝脏表面3 d后可被完全吸收。因此术后无需取出，应用于临床将可以大大简化手术过程 ，减少病人痛苦。肝功能和肾功能指标除尿酸外均无显著性差异，由此可见，可溶性止血纱布对新西兰兔肝肾功能尚未造成明显影响。为进一步验证其安全性，该实验还进一步对新西兰兔的肝脏进行病理切片和透射电镜观察，对肝脏组织和肝细胞显微结构做进一步的研究分析。肝脏病理组织学检查结果表明可溶性止血纱布可溶性止血纱布虽与空白对照组比较略有差别，但对肝脏的损害并不明显。透射电镜结果表明可溶性止血纱布对肝细胞显微结构无明显的影响。

Kheiraba认为理想的止血材料应具备以下特点：被权威的机构批准认可；对严重的动脉静脉出血能快速止血（小于2 min）；没有系统和局部毒性；应用时无痛或造成烧伤；对单独应用的药物和敷料无影响；坚固且轻盈；能轻松包扎和移除；能在严峻的条件下使用如光线弱或者下雨；不单单对包扎处的伤口有效；贮藏时间长（大于2年）；性价比高；生物可降解吸收[22]。目前尚没有止血材料符合所有的条件，因此只有在充分了解各种止血材料性能的基础上合理选择使用止血材料，才能在临床工作中起到事半功倍的效果。

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【作 者】徐玉茵1，周小婷1，柳小军1，田林奇1，田源2
1 河南省医疗器械检验所，郑州市，450000
2 南阳市久康医疗器械有限公司，南阳市，473000

The Hemostatic Effect and Safety Evaluation Tests of Soluble Hemostatic Gauze

【 Writers 】XU Yuyin1, ZHOU Xiaoting1, LIU Xiaojun1, TIAN Linqi1, TIAN Yuan2
1 Henan Medical Equipment Inspection Institute, Zhengzhou, 450000
2 Nanyang Jiukang Medical Equipment Co.Ltd., Nanyang, 473000

Objective The aim of this paper is to study the hemostasis and security of soluble hemostatic gauze in the rabbit liver hemorrhage model. Methods After making the rabbit liver hemorrhage model, the control group used sterile gauze to stop bleeding, the positive control group used TISTAT to stop bleeding, the test group used soluble hemostatic gauze to stop bleeding. Hemostasis, blood loss and animal clinical symptoms were measured. Liver and kidney parameters, along with histopathology were recorded and analyzed. Transmission electron microscopy examination was also done. Results The blood loss is cut back and hemostasis is shortened in the test group. Other tests have no difference with the control group. Conclusion No toxic effects on rabbit are found in the test group. The hemostatic effects have no difference with positive control group.

soluble hemostatic gauze, TISTAT, hemostasis, security

R605

A

10.3969/j.issn.1671-7104.2016.05.013

1671-7104(2016)05-0441-04

2016-05-06

徐玉茵，E-mail: 137368469@qq.com