安徽汉族人群血小板膜糖蛋白Ⅱb基因多态性与冠心病的相关性

张 志， 刘 萍

1.安徽省第二人民医院内六科，合肥 200041 2.安徽医学高等专科学校临床医学系，合肥 230061

研究简报

安徽汉族人群血小板膜糖蛋白Ⅱb基因多态性与冠心病的相关性

张 志1， 刘 萍2

1.安徽省第二人民医院内六科，合肥 200041 2.安徽医学高等专科学校临床医学系，合肥 230061

冠心病；基因多态性；血小板膜糖蛋白；糖蛋白Ⅱb

近年来，我国冠心病(coronary heart disease，CHD)的发病率呈上升趋势，严重威胁人们的健康。血栓形成易导致冠状动脉闭塞，引起心肌梗死、心绞痛，是CHD患者病情加重的主要始发因素[1]。血小板膜糖蛋白(glycoprotein,GP) 覆盖在血小板质膜表面，在血小板活化和血栓形成中发挥关键作用[2-3]。目前已发现GP的5种血小板膜受体；GP与受体在一定条件下形成复合体，调节血小板性血栓的形成，其中GPⅡb HPA-3基因具有重要作用[4]。HPA-3基因长17.2 kb，含30个外显子，编码1 039个氨基酸，其中第26外显子上存在I843S多态性，形成HPA-3血型[5]。因此，本研究对安徽汉族人群GPⅡb HPA-3基因多态性进行研究，探讨其与冠心病发生的相关性，为后续研究奠定基础。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2009年1月至2011年12月在安徽省立医院和安徽省第二人民医院心内科就诊的CHD患者74例，其中男性39例，女性35例。CHD诊断符合世界卫生组织(WHO)AHA/WH的诊断标准[6]。患者年龄41～86岁，平均(64.8±12.2)岁。另选健康对照组60例，为安徽医科大学第一附属医院、安徽省立医院和安徽省第二人民医院门诊健康体检者，其中男性38例，女性22例，年龄42～82岁，平均(60.2±9.8)岁。两组人群年龄构成、性别比例、吸烟量及血脂水平差异无统计学意义，具有可比性。本研究通过医院医学伦理委员会审核，所有研究对象均知情同意并签署知情同意书。

1.2 血小板膜GP基因检测及测序鉴定 取研究对象外周静脉血2 mL，用全血基因组DNA抽提试剂盒(上海生工生物工程有限公司)提取DNA，紫外分光光度计测定DNA浓度，-80℃保存备用。PCR扩增外周血基因组DNA，引物序列如下:上游引物5′-CTC AAG GTA AGA GCT GGG TGG AAG AAA GAC-3′，下游引物5′-CTC ACT ACG AGA ACG GGA TCC TGA AGC CTC -3′。扩增目的基因片段长度为253 bp，引物均由上海生工生物工程有限公司合成。PCR反应体系如下：在EP管中加入试剂，使终末浓度分别为1×buffer，MgCl22.8 mmol/L、dNTP 200 μmol/L、基因组DNA 400 ng、Taq酶2 U、引物0.25 pmol/μL，总体积为50 μL。

进行PCR扩增，程序如下：在96 ℃下进行预变性，时间维持在5 min，然后在96 ℃下进行变性，时间为90 s，变性过后在60.5 ℃进行退火处理，时间90 s，在72 ℃下延伸(持续180 s)，然后72 ℃ 40 个循环，7 min。用1×TBE缓冲液进行电泳，在100 V下电泳约30 min，待点样液在凝胶上行进至2/3处时停止电泳。在紫外透射仪下观察结果，通过PCR产物的条带与DNA Marker的对比，分析PCR产物电泳结果。病例组及对照组共134例标本全部进行PCR扩增，扩增产物行凝胶电泳，条带均清晰说明PCR扩增成功。将PCR产物送上海生物科技有限公司测序，分析是否存在GPⅡb HPA-3基因多态性。

1.3 统计学处理 采用SPSS 19.0统计软件。计数资料组间比较采用χ2检验。检验水准(α)为0.05。

2 结 果

2.1 两组患者GPⅡb HPA-3基因型分析 PCR扩增后GPⅡb HPA-3的基因产物经2%的琼脂糖凝胶电泳，观察到产物为253 bp的片段，符合预期大小。测序结果(图1)显示：在GPⅡb HPA-3基因T18809G发生变异，导致丝氨酸取代异亮氨酸，造成I843S(Ile843Ser)多态性。

图1 GPⅡb基因测序结果

A: GPⅡb HPA-3的第843位点的碱基是T; B: GPⅡb HPA-3的第843位点的碱基是G; C: GPⅡb HPA-3的第843位点的碱基是T/G

2.2 两组人群等位基因的分布频次分析 74例冠心病患者中，GPⅡb HPA-3形成了3种基因型：HPA-3aa、HPA-3ab、HPA-3bb。病例组a等位基因出现的频数为80，b等位基因出现的频数为68；对照组a等位基因出现的频数为86，b等位基因出现的频数为34。与对照组相比，病例组aa和ab基因型分布明显增多，a等位基因出现的频率也较高，差异均有统计学意义(P<0.05，表1)。

表1 两组患者GPⅡb HPA-3的基因多态性分析

3 讨 论

GPⅡb/Ⅲa作为细胞表面黏附蛋白受体超基因家族中的成员，在血栓形成中发挥重要作用，这种受体在抑制血小板聚集方面发挥一定作用，是目前研究的热点。但是，目前关于CHD与GPⅡb基因相关性的研究较少，且研究结果不尽相同[6-8]。因此，本研究针对与我国汉族人群关联最大的HPA-3基因进行分析，为后续研究奠定基础。

本研究发现,CHD人群GPⅡb等位基因携带者频数较对照组高，差异有统计学意义(P<0.05)。结果提示：冠心病的发生与GPⅡb基因多态性存在着一定的相关性。这种基因多态性可能是CHD患者的遗传易感因子。由于本研究样本量较小，相关研究结论仍需进一步的大样本研究证实。

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[本文编辑] 叶 婷， 晓 璐

Correlation study of platelet glycoproteinⅡb gene polymorphism and coronary heart disease in Anhui Han population

ZHANG Zhi1, LIU Ping2

1.Department of Internal Medicine Ⅵ, Anhui No.2 Province People’s Hospital, Hefei 200041, Anhui, China 2.School of Clinical Medicine, Anhui Medical College, Hefei 230061, Anhui, China

coronary heart disease; gene polymorphism; platelet membrane glycoprotein; glycoproteinⅡb

2016-03-31[接受日期]2016-10-20

安徽省教育厅科研项目 (KJ2009B188Z).Supported by Research Project of Provincial Education Board of Anhui (KJ2009B188Z).

张 志，主治医师.E-mail:583763687@qq.com

10.12025/j.issn.1008-6358.2016.20160390

R 541.4

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