HPLC法测定排石利胆片中芍药苷的含量

王守旭 赵 冰 宋杏花 彭秀中

华佗国药股份有限公司 安徽省亳州市 236800

HPLC法测定排石利胆片中芍药苷的含量

王守旭 赵 冰 宋杏花 彭秀中

华佗国药股份有限公司 安徽省亳州市 236800

目的：通过HPLC方法测定排石利胆片中芍药苷的含量。方法：选择Hypersil CN(4.6mm×250mm,5μm)为色谱柱，流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液（20:80），检测波长：230nm，进样量10μl，1.0mL/min流速，柱温为室温（25℃）条件下进行检测。结果：芍药苷在1.14ug·mL-1～57.00ug·mL-1范围内线性关系良好，线性方程为：Y=238459X-334145（r=0.9992），平均回收率为100.02%，RSD 1.6%。结论：高效液相色谱方法操作简单、结果准确、灵敏度高，可有效评估排石利胆片中芍药苷的含量。

HPLC法；芍药苷；含量；排石利胆片

排石利胆片是由金钱草、茵陈、柴胡(醋炙)、龙胆、赤芍、郁金、蒲黄、五灵脂、大黄、芒硝10味药制成的中药复方制剂，具有舒肝理气，利胆排石的功效，常用于胆囊炎，胆石症的治疗。目前就排石利胆片的质量控制中高效液相测定仅以绿原酸为主，对于其他成分多停留在薄层检测[1]，赤芍是处方臣药，芍药苷是其主要成分之一。本文由此出发，考察高效液相法在排石利胆片中芍药苷的含量测定中的应用，结果报道如下：

1 材料

仪器与试药：岛津10A-vp型高效液相色谱仪；AS3120A型超声波清洗器；甲醇、磷酸、乙腈由MERCK公司提供为色谱醇；芍药苷标准品（中国药品生物制品检定所，批号：160417）；排石利胆片（陕西合生医药研究发展有限公司，批号为：151022、160214、160423）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与样品制备

2.1.1 色谱条件

芍药苷标准品加甲醇适量稀释至澄清，以甲醇为空白对照，在200-400nm波长下对芍药苷对照品溶液进行全波长扫描，结果显示在230nm处有最大吸收，故确定检测波长230nm。

色 谱 柱 选 择Hypersil CN(250mm×4.6mm,5μm)， 流 动 相： 乙腈-0.1%磷酸溶液（20∶80），检测波长：230nm，进样10μl，流速1.0mL/min，柱温为25℃。

2.1.2 溶液的制备

（1）供试品制备。取20颗排石利胆片，精密称定后，研细，取0.15g置于25ml容量瓶中，加入甲醇15ml稀释，称重，超声8min，放冷至室温，稀释至对应刻度，取适量溶液经0.25um微孔滤膜过滤，待用。

（2）对照品制备。采用20ml容量瓶精密称取10.19mg芍药苷标准品，加甲醇稀释至刻度，摇匀即得。

2.1.3 方法学考察

（1）精密度测定。采用“2.1.1”项色谱条件，取芍药苷标准品重复进样（n=6），进样量10ul，测定每次峰面积，并计算标准偏差RSD，结果RSD=1.4%<2.0%，符合药典标准[2]，可见，本法精密度良好。

（2）重复性测定。取相同批号排石利胆片（n=6），按照“2.1.2（1）”项操作制备，采用“2.1.1”项色谱条件测定6份样品峰面积并计算相对标准偏差RSD，结果RSD=1.3%（小于2.0%），符合标准[2]，可见，本法重复性良好。

（3）稳定性测定。选择不同放置时间（0h、4h、8h、12h、24h）分别取供试品，采用“2.1.1”项色谱条件测定色谱峰面积，并相对标准偏差RSD，结果RSD=1.6%<2.0%，可见供试品溶液在24h内较为稳定。

（4）回收率测定。取已知含量样品（n=9），分为3组，每组均依次加芍药苷对照品5.17mg、10.46mg和20.29mg，按照“2.1.2（1）”项供试品制备过程制备供试液，采用“2.1.1”项色谱条件测定色谱峰面积，计算回收率并相对标准偏差RSD，测得回收率为：100.06%、100.04%和99.96%，平均100.02%，RSD 1.6%，符合药典标准[2]。

2.1.4 标准曲线考察

采用10ml容量瓶精密量取不同体积对照品溶液（0.20ml、0.50ml、0.80ml、 1ml、2ml、5ml），加甲醇稀释至刻度，摇匀，过有机滤膜后，采用“2.1.1”项色谱条件测定色谱峰面积，以峰面积为纵坐标和浓度为横坐标绘制标准曲线，得标准曲线方程为：Y=238459X-334145（r=0.9992），提示，芍药苷浓度在1.14ug•mL-1～57.00ug•mL-1范围内与峰面积存在良好的线性关系。

2.2 样品中芍药苷含量测定

结合“2.1.1项”下色谱条件，分别测定3批排石利胆片供试品溶液，供试品制备同“2.1.2（1）”项操作，采用自身对照法对供试品内含有的芍药苷含量进行测定。

3 结果

排石利胆片中芍药苷平均含量为（4.29±0.28）mg/g，见表1。

表1：排石利胆片中芍药苷含量（,mg/g）

表1：排石利胆片中芍药苷含量（,mg/g）

批号 芍药苷含量 平均含量1510224.29±0.28 4.29±0.28 1602144.31±0.32 1604234.27±0.26

4 讨论

通过本文结果我们可知，高效液相色谱法测定排石利胆片中芍药苷含量，准确性高、精密度好、重现性和相关性均符合相关要求。可见，对于排石利胆片中芍药苷含量测定，高效液相法不失为一个较好的测定方法。

[1]陈世虎,陈志成.高效液相色谱法测定排石利胆片中芍药苷的含量[J].中国中医药信息杂志,2011,18(02):57-58.

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:化学工业出版社,2010.