沉默干扰素诱导蛋白16对人主动脉外膜成纤维细胞凋亡的影响

郭 敏郑中华

沉默干扰素诱导蛋白16对人主动脉外膜成纤维细胞凋亡的影响

郭 敏1郑中华2

目的 探究沉默干扰素诱导蛋白16（IFI16）对人主动脉外膜成纤维细胞（HAAFs）凋亡的影响。方法 检测HAAFs凋亡、IFI16、细胞外调节蛋白激酶1/2（ERK1/2）及磷酸化细胞外调节蛋白激酶1/2（p-ERK1/2）蛋白表达。结果 基因沉默组IFI16低于另两组（P＜0．05），基因沉默组ERK1/2及p-ERK1/2蛋白表达高于另两组（P＜0．05），阴性对照组及空白组HAAFs凋亡率、IFI16、ERK1/2及p-ERK1/2蛋白表达差异无统计学意义（P＞0．05）。结论 沉默IFI16表达能够降低HAAFs凋亡率。

干扰素诱导蛋白16；人主动脉外膜成纤维细胞；凋亡

人主动脉外膜成纤维细胞（HAAFs）增殖和凋亡的失衡是血管重构的细胞学基础，其增殖与迁移过程广泛参与动脉粥样硬化等血管增殖性疾病的发生与发展［1］。本次研究IFI16小干扰核糖核酸转染使IFI16基因沉默，抑制IFI16的表达，探究沉默IFI16对HAAFs凋亡的影响。

1 资料与方法

1.1 一般资料

原代HAAFs、成纤维细胞培养基、成纤维细胞生长因子、转染试剂、IFI16小干扰核糖核酸、对照的小干扰核糖核酸、IFI16抗体、ERK1/2抗体、p-ERK1/2抗体。

1.2 方法

培养HAAFs，取其3～5代细胞，将实验细胞分为IFI16小干扰核糖核酸（基因沉默组）、对照的小干扰核糖核酸（阴性对照组）及未经干扰的HAAFs（空白组）。六孔板中取生长状态较好的HAAFs，使用不含双抗的成纤维完全培养基培养，细胞密度达30%～50%后进行小干扰核糖核酸转染。添加小干扰核糖核酸转染复合物干预6 h，继续培养，使用对照的小干扰核糖核酸检测转染效率。提取细胞蛋白，检测蛋白浓度，加入十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳蛋白上样缓冲液，100℃加热5 min使变性。每孔上样80 µg蛋白样品进行十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳，湿法转膜转移蛋白条带存在聚偏氟乙稀膜。5%的脱脂奶粉室温封闭1 h，洗膜，加入一抗工作液，置入4℃冰箱中冷藏至第2 d，洗膜，室温下孵育稀释的二抗1 h，洗膜，电致化学发光，分析IFI16与内参条带、p-ERK1/2与ERK1/2的吸光度值比。使用Annexin V凋亡检测试剂盒I流式细胞仪检测HAAFs凋亡情况。

1.3 统计学方法

以SSPS 19.0统计学软件分析数据，计量资料采用 t 检验，采用表示。P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 HAAFs凋亡率

基因沉默组、阴性对照组及空白组HAAFs凋亡率分别为（3.3±0.4）%、（7.4±1.5）%、（6.9±1.1）%，基因沉默组HAAFs凋亡率低于另两组（P＜0.05），阴性对照组及空白组差异比较无统计学意义（P＜0.05）。

2.2 IFI16、ERK1/2及p-ERK1/2蛋白表达

基因沉默组、阴性对照组及空白组IFI16蛋白表达为（0.2±0.1）、（1.1±0.3）、（1.0±0.3），基因沉默组IFI16低于阴性对照组及空白组（P＜0.05），阴性对照组及空白组差异比较无统计学意义（P＞0.05）。基因沉默组、阴性对照组及空白组ERK1/2及p-ERK1/2蛋白表达分别为（1.4±0.28）、（1.1±0.25）、（1.1±0.21），基因沉默组ERK1/2及p-ERK1/2蛋白表达高于另两组（P＜0.05），阴性对照组及空白组差异无统计学意义（P＞0.05）。

3 讨论

血管外膜成纤维细胞是血管外膜的主要细胞，在血管重构中发挥重要作用［2］，所以，将血管外膜成纤维细胞作为干预的靶点对血管增殖性疾病起到重要防治效果［3］。IFI16在细胞生长中起到负性调控作用［4］，具有抗增殖效果，对细胞凋亡起促进作用［5］。干扰素α能诱导IFI16的表达［6］，抑制人脑血管成纤维细胞的生长［7］，IFI16小干扰核糖核酸转染沉默IFI16能够促进人脑血管外膜成纤维细胞的生长［8］，所以，人脑血管外膜成纤维细胞的增值调控可能与IFI16的表达有关。

本次研究显示，基因沉默组IFI16低于阴性对照组及空白组（P＜0.05），基因沉默组ERK1/2及p-ERK1/2蛋白表达高于阴性对照组及空白组（P＜0.05），阴性对照组及空白组HAAFs凋亡率、IFI16、ERK1/2及p-ERK1/2蛋白表达差异无统计学意义（P＞0.05），所以，沉默IFI16表达能够降低HAAFs凋亡率，其作用机制与ERK通路有关。

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Effect of Interferon Inducible Protein 16 on Apoptosis of Human Aortic Outer Membrane Fibroblasts

GUO Min1ZHENG Zhonghua21 Department of Cardiology，Affiliated Hospital of Jilin Medical College，Jilin Jilin 132013，China，2 Pathology and Pathophysiology，Jilin Medical College，Jilin Jilin 132013，China

Objective To explore the effect of silencing interferon inducible protein 16（IFI16）on the apoptosis of human aortic outer membrane fibroblasts（HAAFs）． Methods Detection of HAAFs apoptosis，IFI16 and extracellular regulated protein kinase 1/2（ERK1/2）and phosphorylated extracellular regulated protein kinase 1/2（p-ERK1/2）protein expression． Results Gene silencing of group IFI16 was lower than that of the other two groups（P＜0．05），gene silencing and p-ERK1/2 protein expression in ERK1/2 group was significantly higher than that of the other two groups（P＜0．05），negative control group and blank control group HAAFs，IFI16，ERK1/2 apoptosis and p-ERK1/2 protein expression differences were not statistically significant（P＞0．05）． Conclusion Silencing IFI16 expression can reduce the apoptosis rate of HAAFs．

Interferon inducible protein 16，Human aortic outer membrane fibroblasts，Apoptosis

R972

A

1674-9316（2016）19-0074-02

10．3969/j．issn．1674-9316．2016．19．050

课题项目：吉林省卫生厅科研课题（2013Q015）

课题项目：吉林医药学院附属医院青年医师科研课题（2014-3）

1 吉林医药学院附属医院心血管内科，吉林 吉林 132013 2 吉林医药学院病理与病理生理学，吉林 吉林 132013

郑中华，E-mail：968542868@qq．com