猪伪狂犬病的血清学诊断

2016-02-01曹洪志李成贤李德立

中国畜牧兽医文摘 2016年2期

关键词：诊断试验

曹洪志李成贤李德立

（四川宜宾职业技术学院，四川宜宾 644003）

猪伪狂犬病的血清学诊断

曹洪志李成贤李德立

（四川宜宾职业技术学院，四川宜宾 644003）

[摘要]在国内，猪伪狂犬病危害猪群是严重的，仔猪有高发病率，成年猪隐性经过，症状较轻微，为潜在的隐性传染源。用血清学方法检测猪血清中伪狂犬病病毒抗体，在有效诊断此症方面有着极为重要的现实意义。文章应用间接ELISA方法检测猪伪狂犬病病毒抗体，调查了解猪伪狂犬病的流行病学特点，就科学防治此病做技术指导。

[关键词]血清学试验诊断猪伪狂犬病

1 前言

猪伪狂犬病是由猪伪狂犬病毒（Pseudorabies virus，PrV）引起的猪的急性传染病。该病在猪呈爆发性流行。引起妊娠母猪流产、死胎，公猪不育，新生仔猪的大量死亡，育肥猪呼吸困难、生长停滞等，是危害全球养猪业的重大传染病之一。在国内，此病危害猪群是严重的，仔猪有高发病率，成年猪隐性经过，症状较轻微，为潜在的隐性传染源。用血清学方法检测猪血清中伪狂犬病病毒抗体，在猪伪狂犬病的诊断、流行病学调查及疫苗免疫效果的检测上有一定的意义。本试验应用间ELISA方法检测猪伪狂犬病病毒抗体，调查猪伪狂犬病的流行情况，以便有效地控制和消灭猪伪狂犬病。

2 实验室诊断

2.1 试验仪器

采血器械、离心机、酶标仪、消毒液、微量移液器、试管等。

2.2 试验材料

2.2.1 待检血清

2.2.2 病毒鉴别诊断实验盒

猪伪狂犬病毒gE鉴别ELISA诊断试验盒，主要用于检测猪血清中抗猪伪狂犬病毒gE蛋白的抗体，用于区别临床野毒感染猪和利用gE基因缺失疫苗免疫的猪。试剂盒由抗原包被的微孔板、酶标羊抗猪IgG及其他试剂组成，应用间ELISA原理检测猪血清中抗猪伪狂犬病毒gE蛋白的抗体。

2.3 试验方法

2.3.1 血液采集

取准备好的试管、注射器，经灭菌处理后待用。选定的疑似感染病例，经保定后，用酒精棉花球擦拭注射取血耳静脉部，然后用碘酒擦拭，最后用酒精脱碘。采集血液后，放置事先准备好的灭菌试管。

2.3.2 血液分离

分离血液，制备待检血清。准备好的血液，放入离心管。1500rpm离心，15min后，取上清液注入试管，冷藏备用。

2.4 诊断试验

（1）取预包被的微孔板，用样品稀释液将待检样品以1：40稀释后加入板孔中，每孔100μl。再用样品稀释液以1：4稀释阴、阳性对照血清，阴、阳性对照各设2孔，每孔100 μl。另设一空白对照孔，空白对照孔加100μl稀释液。轻轻振摇孔中样品（勿溢出），置37℃温育30 min。

（2）掉板孔中的溶液，用洗涤液洗板5次，200μl/孔，每次静置3 min，倒掉，最后一次在吸水纸上晾干。

（3）每孔加酶标二抗（抗猪IgG-HRP结合物）100μl，置37℃温育30 min。

（4）洗涤5次，方法同上3.2.2。

（5）每孔加底物A液、B液各50μl，混匀，室内避光显色l0 min。

（6）每孔加终止液50μl，10 min内测定结果。

（7）结果判定。以空白孔调零，在酶标仪上测各孔OD630值。实验成立的条件是阳性对照孔平均OD630值大于或等于1.0，阴性对照孔平均OD630值必须小于0.2。样品OD630值大于0.39判为阳性；样品OD630值小于0.39判为阴性。

3 结果分析

共采集和分离血液101份，有效待检血清99份。诊断结果显示：母猪血清25份，其中阳性为20份，阴性为5份，阳性率达80%；仔猪血清66份，其中阳性为7份，阴性为59份，阳性率为10.6%；种猪血清8份，其中阳性为4份，阴性为4份，阳性率达50%。而且，待检中仔猪6日龄下有2只，体内母源抗体效价，均为阳性，阳性率达100%。

血清学检测证实，母猪群体中抗体阳性率最高，达80%；仔猪血清阳性为7份，阳性率为10.6%。其中，仔猪6日龄下的2只，体内母源抗体效价均为阳性，阳性率达100%；种猪阳性为4份，阳性率达50%。由此，该猪群中有一定感染伪狂犬病的比例。同时，母猪生产中有弱仔出现，可判断为伪狂犬病病毒感染。此外，66份经免疫仔猪群体中，仍有10.6%的阳性抗体。说明，经免疫后的仔猪群对此病产生较好的免疫能力。而2只体内母源抗体效价均为阳性，证实：重视母猪种，加强免疫，提升抗体能力，一定程度上可有效缓解此症。