基质金属蛋白酶-7、糖类抗原19-9在胰腺癌与肿块型胰腺炎中的表达及鉴别价值

曲义坤　夏伟滨　徐　剑　陈　刚

(佳木斯大学附属第一医院普外科，黑龙江　佳木斯　154002)



基质金属蛋白酶-7、糖类抗原19-9在胰腺癌与肿块型胰腺炎中的表达及鉴别价值

曲义坤夏伟滨徐剑陈刚1

(佳木斯大学附属第一医院普外科，黑龙江佳木斯154002)

目的探讨基质金属蛋白酶(MMP)-7及糖类抗原(CA)19-9在胰腺癌(PC)与肿块型胰腺炎(MFP)组织及血清中的表达及鉴别意义。方法手术切除PC标本27例，MFP标本15例，胰腺正常组织30例作为对照组。免疫组织化学染色SP法检测3组组织中MMP-7的表达，并用化学发光免疫法检测术前血清CA19-9的含量。结果PC组、MFP组血清CA-199水平明显高于对照组(P均<0.05)，但PC组与MFP组差异无统计学意义。PC组MMP-7阳性表达率明显高于MFP组及对照组(P均<0.05)。结论CA19-9是诊断PC的敏感指标，但特异性不强，独立鉴别PC与MFP的准确性不高。MMP-7可能在癌前病变MFP发展为PC中起重要作用，MMP-7有可能作为生物学指标来鉴别PC与MFP。

胰腺癌(PC)；肿块型胰腺炎(MFP)；糖类抗原19-9；基质金属蛋白酶-7

胰腺癌(PC)是临床最常见且恶性程度极高的肿瘤之一，居全球恶性肿瘤死因的第4位，消化系统恶性肿瘤的第2位〔1〕。美国癌症协会(ACS)监测与卫生研究部指出，大多数癌症死亡率逐年下降，而PC死亡率却一直在上升，为致死性最强的癌症之一，大多患者确诊1年内死亡，与该病一级预防、早期诊断、治疗方面进展不足有关。慢性胰腺炎是PC的癌前病变之一〔2〕，尤以肿块型为著。肿块型胰腺炎(MFP)是慢性胰腺炎的特殊类型，最先于1973年由Bekeker描述，大多位于胰头部，与PC的临床表现相似，术前不易与PC鉴别〔3～5〕。本实验通过检测患者术前血清糖类抗原(CA)19-9和手术病理组织切片中基质金属蛋白酶(MMP)-7的表达，鉴别PC与MFP，提高PC的早期检出率。

1　资料与方法

1.1一般资料2014年7月至2015年1月我院收治手术切除并明确PC组标本27例，男19例，女8例，年龄(61.4±4.2)岁，2006～2015年MFP组标本15例，男9例，女6例，年龄(59.8±9.5)岁。2010～2015年外伤及因其他病行胰十二指肠切除术的正常胰腺组织20例为对照组，男11例，女9例，年龄(60.4±7.5)岁。3组年龄、性别构成无明显差异。

1.2免疫学检测①抽取各组手术前空腹静脉血10 ml，室温下静置3～4 h，抗凝后以3 000 r/min离心10 min，留取血浆，采用化学发光免疫法检测CA19-9的含量。②采用免疫组化链霉菌亲生物素-过氧化物酶法检测标本MMP-7表达水平。用已知胃癌阳性表达切片作为染色阳性对照，磷酸盐缓冲液(PBS)代替Ⅰ抗(兔抗人MMP-7单克隆抗体)作为阴性对照。三组石蜡包埋标本组织切4 μm厚度，置于60℃烤箱中4 h，切片脱水、脱蜡、封闭及抗原修复。加入磷酸盐缓冲液湿盒中4℃孵育过夜。室温复温20 min后PBS洗3×5 min，加入Ⅱ抗(IgG/Bio)37℃静置30 min。PBS冲洗同上。二氨基联苯胺(DAB)显色3 min，苏木精复染5～10 min。随后脱水及封片。③采用CA19-9 测定试剂盒(直接化学发光法) 检测血清CA19-9水平，>37 U/ml为阳性。

1.3结果判定采用双人双盲读片，MMP-7蛋白表达在上皮细胞胞质，以胞质出现棕黄色或棕褐色作为阳性表达。首先将染色程度评分：计数细胞无着色计0分，淡黄色计1 分，棕黄色计2 分，棕褐色计3 分；再将阳性细胞所占百分比评分：0分为阴性，阳性细胞数≤10%为1分，11%～50%为2分，51%～75%为3分，>75%为4分。两项评分相乘，<3分为阴性，≥3分为阳性。

1.4统计学方法采用SPSS20.0统计软件进行χ2检验。

2　结　果

2.1各组血清CA19-9水平比较PC组〔(426.02±261.58)U/ml〕和MFP组CA19-9水平〔(327.68±160.40)U/ml显著高于对照组〔(12.36±35.23)U/ml〕(P均<0.05)，PC组和MFP组无显著差异。

2.2各组组织MMP-7的阳性表达PC组MMP-7阳性表达〔23例(85.2%)〕显著高于MEP组〔6例(40.0%)〕(P=0.005)，而MEP组明显高于对照组(0例)(P=0.003)，3组有显著差异(χ2=33.853,P=0.000)。

3　讨　论

MFP术中肉眼见多为胰头部肿大，表面凹凸不平，质地坚韧，常与周围组织粘连，形态类似PC。MFP与PC鉴别诊断困难，但两者预后大不相同。若有明确指标能区分MFP和PC，表明MFP即将或已发生恶变，则可为手术提供依据。如若表明MFP无恶变，或可行保留手术，减少术后并发症，提高患者生活质量。作为PC筛选肿瘤标志物最敏感指标的CA19-9，是一种黏蛋白类的肿瘤相关抗原，和Lewis血型成分密切相关。正常人于胰、胆管及胃结肠上皮细胞均能产生CA19-9，某些组织液也微量存在，但阳性表达大多见于恶性肿瘤。Kokhanenko等〔6〕对685例PC患者研究发现CA19-9的水平与PC的发展及预后密切相关。但后来研究发现，许多良性疾病患者血清CA19-9水平也明显增高〔7，8〕，原因之一可能是正常人胰液及胆汁中有较高含量的CA19-9，当有结石、炎性因素的存在，影响胰液及胆汁的排泄，使胆管壁的通透性增加，最终导致血清CA19-9升高，临床上出现假阳性。MFP的病理特点是胰腺腺泡细胞减少和纤维结缔组织明显增多，常伴有坏死、假性囊肿、钙化、结石及胰管狭窄，可能导致血清CA19-9升高，而难以与PC鉴别。本研究结果提示MFP发病时一过性CA19-9升高。因此仅用血清CA19-9 作为鉴别PC和MFP的指标不能满足临床需要。

MMPs是Zn依赖性内肽酶的一个重要家族，它是负责降解细胞外基质(ECM)的主要类别。MMPs根据底物特异性和内部同源性，公认被分成5类：胶原酶，明胶酶，基质酶，膜型及其他MMPs。MMP-7对ECM具有最强的降解活性，包括弹力蛋白，明胶， Ⅳ型胶原，纤连蛋白，玻连蛋白，层黏连蛋白，巢蛋白，聚集蛋白聚糖和蛋白聚糖〔9〕。此外，它可以从细胞表面剔除非基质底物，包括E-钙黏蛋白，肿瘤坏死因子-α和Fas配体。它还能触发MMP级联的激活。迄今的研究发现MMP-7在多种恶性肿瘤中均检测到，例如结直肠癌、胃癌、乳腺癌等〔10,11〕。胡育新等〔12〕用免疫组化法检测51例PC组织，结果发现68.6%有MMP-7表达，Fukushima等〔13〕用半定量RT-PCR法检测11个PC细胞系和70例PC组织中MMP-7 mRNA的表达，70例PC组织中MMP-7 mRNA 的表达率为81.4%，而且与肿瘤大小、肿瘤浸润、淋巴结转移、TNM分期明显相关。通过以上研究表明，MMP-7的表达在PC的生长和进展中起重要作用。临床数据和免疫组化分析表明MMP-7在慢性胰腺炎中发挥作用〔14〕。Crawford等〔15〕发现，MMP-7不仅在PC也在胰腺上皮内瘤变和上皮化生中表达。MMP-7还通过对促凋亡分子Fas配体蛋白水解酶的释放来调节胰腺腺泡细胞凋亡。Sri Manjari等〔16〕研究显示，与健康体检者相比，慢性胰腺炎患者MMP-7的GG基因型频率增加。提示MMP-7可能在慢性胰腺炎发展为PC的病理多态性上有重要作用。本研究说明MMP-7可以提高PC、MFP鉴别的准确性。有胆汁阻塞或Lewis抗原阴性患者联合检测更有意义。

1Jemal A，Bray F，Center MM，etal.Global cancer statistics〔J〕.CA Cancer J Clin，2011；61(2)：69-90.

2Izbicki JR，Bloec C，Broering DC，etal.Extended drainage versus resection in surgery for chronic pancreatitis〔J〕.Ann Surg，1998；228(6)：771-9.

3罗娅红，于韬，王洋，等.联合应用CT、MRI增强扫描鉴别诊断PC与慢性胰腺炎〔J〕.磁共振成像，2011；2(1)：42-6.

4陈叶军.15例胰头部肿块型慢性胰腺炎误诊为PCCT征象分析〔J〕.中外医学研究，2012；20(1)：57-8.

5Leung TK，Lee CM，Wang FC，etal.Difficulty with diagnosis of malignant pancreatic neoplasms coexisting with chronic pancreatitis〔J〕.World J Gastroenterol，2005；32：5075-8.

6Kokhanenko NI，Ignashov AM，Varga EV，etal.Role of the tumor markers CA19-9 and carcinoembryonic antigen(CEA) in diagnosis，treatment and prognosis of pancreatic cancer〔J〕.Vopr Onkol，2001；47(3)：294-7.

7何思春，王永成，焦鑫.胆道结石患者血清糖类抗原CA19-9 升高的研究〔J〕.检验医学与临床，2010；7(1)：34-5.

8Horie Y,Matsui K,Shigoku A.Marked elevation of serum CA19-9 and stomach carcinoma〔J〕.Oncology，1998；55(5)：487-8.

9Egeblad M，Werb Z.New functions for the matrix metalloproteinases in cancer progression〔J〕.Nat Rev Cancer，2002；2(3)：161-74.

10王军，张志勇，冯俊伟.AEG-1和MMP-7在结直肠癌中的表达及其意义〔J〕.中国老年学杂志，2014；34(7)：1784-5.

11韩艳春，张骞.乳腺癌中磷酸化 p38 和 MMP-7 的表达〔J〕.临床与实验病理学杂志，2014；30(7)：732-5.

12胡育新，李平，刘宝姝，等.PC组织中基质金属蛋白酶-7(MMP-7) 的表达〔J〕.癌症，2000；19(6)：521-3.

13Fukushima H，Yamamoto H，Itoh F，etal.Association of matrilysin mRNA expression with Kras mutations and progression in pancreatic ductal adenocarcinomas〔J〕.Carcinogenesis，2001；22(7)：1049-52.

14Sternlicht MD，Werb Z.How matrix metalloproteinases regulate cell behavior〔J〕.Annu Rev Cell Dev Biol，2001；17：463-516.

15Crawford HC，Scoggins CR，Washington MK，etal.Matrix metalloproteinase 7 is expressed by pancreatic cancer precursors and regulates acinar-to-ductal metaplasia in exocrine pancreas〔J〕.J Clin Invest，2002；109(11)：1437-44.

16Sri Manjari K，Jyothy A.Association of matrix metalloproteinase-7(-181A/G) promoter polymorphism in chronic pancreatitis〔J〕.Indian J Med Res，2014；140(5)：609-15.

〔2015-01-25修回〕

(编辑苑云杰)

佳木斯大学校级重点课题(No.Sz2013-006)

陈刚(1981-)，男，主治医师，主要从事胰腺疾病研究。

曲义坤(1975-)，男，副主任医师，主要从事普外科肿瘤研究。

R735.5

A

1005-9202(2016)17-4236-02；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.17.049

1消化科