鸡病毒性关节炎的研究进展

王兴和

（内蒙古通辽市科尔沁区动物疫病预防控制中心内蒙古通辽028000）

鸡病毒性关节炎的研究进展

王兴和

（内蒙古通辽市科尔沁区动物疫病预防控制中心内蒙古通辽028000）

鸡病毒性关节炎是由禽呼肠孤病毒引起的一种病毒性传染病。在鸡群中可通过垂直传播和水平传播这两种途径进行传播。该病毒主要以侵害趾关节、跗关节和肌腱为特征，通常导致病鸡呈现跛行、跗关节肿胀等临床症状。剖检病鸡可见到腓肠肌腱出血、坏死或断裂，胫骨干增厚等剖检症状。可根据临床症状、剖检结果、结合实验室检查对该病进行确诊。本文将从病原学、流行病学、诊断方法和预防等几个方面进行综述。

鸡病毒性关节炎；禽呼肠孤病毒；研究进展

鸡病毒性关节炎（Avian Virus Arthritis,AVA）主要是由禽呼肠孤病毒（Avian reovirus,ARV）引起鸡的一种急性或慢性传染病，肉用鸡型多发，肉兼蛋型鸡也有发生。该病毒主要侵害鸡的趾关节、胫跖关节及其肌腱，引起关节滑膜炎或腱鞘炎等，因此该病也被称为病毒性腱鞘炎。病鸡呈现跛行、蹲坐、不愿走动，生长速度减慢或生长停止,当与其它病原混合感染时会加剧其它病原的感染,给家禽养殖业造成巨大的经济损失[1]。

1　病原学

1.1病毒形态结构和理化特性

禽呼肠孤病毒是呼肠孤病毒科（Reoviridae）正呼肠孤病毒属（Orthoreovi）的成员。该病毒是一种RNA病毒，没有囊膜但有双层的衣壳结构，通常人们检测到的病毒粒子直径在73～80 nm之间，其中75 nm较为多见，当其感染细胞后可以在胞浆内看到病毒呈晶格状排列，在细胞内复制可形成包涵体。该病毒基因组可以分为三个大片段（L1、L2、L3）、三个中片段（M1、M2、M3）和四个小片段（S1、S2、S3、S4）三组总共10个节段，这些节段至少可以编码11个原始的翻译产物，它们属于λ、σ、μ这三种类型[2]。其中ARV S组的S1基因含有3个重叠的开放阅读框，能够编码非结构蛋白P10、P17和结构蛋白SigmaC[3]。

ARV对热具有很强的抵抗力，60℃能够存活8～10h、56℃能够存活22～24h、37℃15～16周、22℃48～51周、4℃可以存活3年以上、-63℃可以保存10年以上[4]。氯化镁能够增强病毒对热的稳定性，但浓度过大会使病毒失去活性，该病毒对乙醚不敏感，对低浓度的来苏儿、甲醛有抵抗力，但对2%～3%的氢氧化钠溶液和70%的酒精相对较敏感。

1.2病毒血清学和培养特性

禽呼肠孤病毒各毒株之间存在大量的交叉反应，因此有些群不能作为独立的血清型，病毒通常以抗原亚型存在。国外对ARV鸡源分离株的抗原关系方面有较多的研究，wood等[5]对来自日本、法国和美国的ARV的抗原相关性进行了统计，结果发现了11个血清型，各血清型毒株之间存在共同的群特异抗原，可进行大量的交叉反应。国内对ARV鸡源分离株的抗原关系研究较少，梁英[6]通过血清学中和试验测定了国内四株禽呼肠孤病毒株（YB、YH、CL、S1133）的血清学相关性，结果同样发现各毒株之间都存在一定的抗原相关性。

ARV适合在鸡胚内生长，可以通过绒毛尿囊膜和卵黄囊进行接种。初次分离将病毒接种到5～7日龄SPF鸡胚的卵黄囊内，一般在接种后3～5 d鸡胚死亡，胚体呈现浅紫红色，内脏器官充血或出血。此外，该病毒可在原代鸡胚细胞、肝、脾、肾和巨噬细胞中增殖，导致细胞出现细胞拉网、细胞融合等病变[7]。目前已被证实，ARV还可以在许多细胞系上增殖，如猴肾细胞（Vero）、乳地鼠肾细胞（BHK-21/13）、猪肾细胞（PK）和猫肾细胞（CRFK）等[8]。

2　流行病学

鸡病毒性关节炎病毒在自然界分布广泛，能够从多种鸟类体内分离得到。但家鸡和火鸡是目前所知道的能被ARV引起关节炎的动物。病毒在鸡群的传播是依靠垂直传播和水平传播这两种方式，其中水平传播是该病传播的主要途径，主要是由直接或间接接触引起的。该病传播迅速，一年四季均可发生，一般呈散发或地方性流行。2011年赵圆圆等[9]应用ELISA方法对采自安徽省的205份鸡血请进行ARV抗体检测，结果发现肉鸡阳性率为55.88%，蛋鸡阳性率为92.23%。2014年靳继惠等[10]应用ELISA标准试剂盒首次大批量地对全国19个省市的17 058份鸡血清样品进行了ARV抗体检测，共检出ARV抗体阳性血清15 680份，阳性率为92.83%。可见，我国多数鸡群都存在ARV的感染。

病毒感染鸡只后首先在呼吸道和消化道内进行复制进入血液，一段时间后出现毒血症，随后向各组织器官扩散，但以关节腱鞘和消化道内含毒量最高。该病毒在肉鸡中传播较为迅速，由于垫料等原因在笼养的蛋鸡中传播较慢。一日龄雏鸡最易感，随着日龄的增大易感性逐渐下降，16周龄以后易感性显著降低[11]。青年肉鸡感染呼肠孤病毒可引起关节炎，生长速度减慢，生产性能下降，但往往不会引起死亡。

3　诊断方法

3.1临床诊断

鸡病毒性关节炎的临床症状与很多细菌引起疾病的症状相似，如大肠杆菌、沙门氏菌等都可引起关节肿胀和消化系统疾病。所以根据临床症状，病理变化及趾部的肿胀情况只能做出粗略的诊断，如需确诊需要依靠试验室先进的诊断技术。

3.2实验室诊断

3.2.1病原分离鉴定根据临床症状，取含病毒较多的组织，进行剪碎，研磨，加入生理盐水，离心后用取上清液，在鸡胚的卵黄囊上培养。如果所取病料中病毒含量较高，鸡胚将在接种后3～5 d内死亡，鸡胚皮下充血，呈紫红色。病原的分离鉴定方法准确可靠，通常可以作为确诊的依据，但该方法操作较为繁琐，需要花费大量的时间。

3.2.2琼脂扩散试验琼脂扩散试验是指可溶性抗原与相应抗体在含有电解质的半固体凝胶中进行自由扩散，当抗原与相应抗体比例合适时，在相遇处产生白色沉淀。琼脂扩散试验敏感性差，但操作简单。陈士友等[12]应用此技术对南京某鸡场鸡群ARV抗体的分布进行了调查，结果发现，琼脂扩散试验不适宜检测低浓度的抗体，但在检测鸡群群抗体水平时易于推广应用。

3.2.3酶联免疫吸附试验（ELISA）酶联免疫吸附试验因具有快速、敏感、简便和易于标准化等优点，所以目前广泛应用于临床诊断和血清学鉴定等方面。用ELISA方法对呼肠弧病毒抗体进行检测时，多用于检测群体呼肠弧病毒的抗体水平。伊春红[13]应用纯化的σB和σC蛋白作为包被抗原建立了ELISA检测方法，能够准确地检测到抗体的产生及消长规律，可以用于ARV的临床诊断和免疫监测。谢志勤等[14]用克隆的杂交瘤细胞株制备ARV的单克隆抗体，并用此抗体作为包被抗体，成功建立了双抗夹心ELISA检测方法，检测敏感性达到5× 10-5ug/uL的病毒量并证明与其它病毒没有交叉反应。可见应用ELISA检测方法能够实现对ARV快速、敏感、特异性的检测。

3.2.4免疫荧光技术目前免疫荧光技术被广泛应用于免疫学、兽医学和生物学等领域，它是利用抗原与抗体相结合的原理，通过荧光素对抗原或抗体进行特殊标记形成荧光标记物，再用制成的荧光标记物作为分子探针对被测物内的相应抗原或抗体进行检测、定性及定位。1990年肖成蕊等使用此方法对人工感染ARV的鸡进行了一系列检测，最终发现脾脏和肝脏是使用本方法进行检测的首选器官，检出率高达100%。谢志勤等[15]利用自制的特异性抗ARV结构蛋白σ3的荧光标记IgG抗体检测接种疑似ARV感染的病料，检出的阳性样品与病毒分离结果一致。研究表明，应用免疫荧光检测技术可以对ARV感染的临床样品进行准确地检测。

3.2.5荧光定量 RT-PCR诊断方法 荧光定量RT-PCR方法由于灵敏度高、重复性好、已被大量应用于疾病的早期诊断。曹琛福等[16]根据ARV S1基因设计引物和探针，建立了鸡病性关节炎实时荧光RT-PCR检测方法，检测到核酸最低浓度为0.1023 pg/uL，要比普通的RT-PCR检测灵敏度高2个数量级。李天芝等[17]也根据ARV S1基因保守序列设计引物，建立了ARV SYBR Green I荧光定量RT-PCR检测方法，为快速检测ARV提供了一种新的方法。研究表明，可广泛应用实时荧光RT-PCR方法对ARV进行快速、敏感地检测。

3.2.6其他检测方法针对鸡病毒性关节炎疾病的诊断还有很多其他的检测方法如：基于纳米材料电化学免疫传感器检测技术、基于荧光显色的环介导等温扩增技术、地高辛探针技术等，都能够实现对鸡病毒性关节炎的快速诊断。

4　预防

禽呼肠弧病毒在世界范围内分布广泛，且耐受性强，在日常的光照、温度下能够存活较长的时间，并对一些常用的消毒剂具有一定的抵抗力，如1%来苏儿、过氧乙酸等，但用70%乙醇、0.5%碘液可杀灭本病毒。由于该病毒即可垂直传播又可水平传播，使得控制该病毒在鸡群中的传播变得十分困难。鸡场最好采取全进全出的饲养模式，严禁从该病多发地区引进种鸡和购买种蛋。对该病毒感染的鸡场应该进行彻底的清理和消毒，将感染此病毒的鸡进行隔离，将其排泄物无害化处理。

目前疫苗免疫对预防鸡病毒性关节炎效果显著，1日龄左右的雏鸡对呼肠弧病毒最易感染，而且抵抗力较弱，至2周龄时仔鸡开始建立自己相关的抵抗力，所以应该早期对鸡进行免疫接种。我国现在已经研制成ND、IBD和鸡病毒性关节炎三联苗，接种10 d后产生免疫力，保护率可达90%～100%[18]。经过临床实验发现马立克疫苗可以对呼肠孤病毒疫苗产生干扰作用，这两种疫苗应间隔使用。由于ARV可以垂直传播，所以一定要对开产母鸡做好免疫接种。

结语:目前鸡群中呼肠孤病毒感染较为普遍，被感染的鸡只会出现多种不同的临床症状。通过肉眼和初步的临床诊断无法做出确诊，必须结合相应的实验室诊断技术。目前对感染的鸡只尚无有效的治疗方法和有效的治疗药物，但可以通过加强饲养管理，改善饲养条件,加强免疫防制来预防呼肠孤病毒对鸡群的感染。■（编辑：赵晓松）

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Research Progress of Avian Viral Arthritis in Chicken

Wang Xinghe
(Inner Mongolia Tongliao City Horqin District Animal Disease Prevention and Control Center,TongLiao,Inner Mongolia,028000)

Chicken viral arthritis is a viral infectious disease caused by avian reovirus.In the flocks can be spread through the vertical and horizontal spread of these two channels.The virus is mainly characterized by invasion of the toe joint,tarsal joint and tendon,which usually leads to clinical symptoms such as limping and swelling of tarsal joint.Autopsy of chickens can be seen in gastrocnemius tendon hemorrhage,necrosis or fracture,tibial shaft thickening and other autopsy symptoms.Can be based on clinical symptoms,autopsy results, combined with laboratory tests to confirm the disease.This article will be from the etiology,epidemiology,diagnostic methods and prevention of several aspects of the review.

Avian Virus Arthritis;Avian Reovirus;Research Progress

10.3969/j.issn.1008-4754.2016.11.048