σA蛋白表位在鸭和禽呼肠孤病毒感染中的血清学诊断技术应用

鸭呼肠孤病毒(Duck Reovirus,DRV)是呼肠孤病毒科正呼肠孤病毒属的一员，基因组由10 个分节段的双链RNA 构成；DRV 目前分为经典型番鸭呼肠孤病毒(Classical muscovy duck reovirus，C-MDRV)和新型呼肠孤病毒(New duck reovirus，N-DRV)两类。C-MDRV 病，又称为番鸭肝白点病，俗称“白点病”或“花肝病”，主要病变特征表现为肝脏和脾脏肿大、出血，并出现大量针尖大小的坏死点。N-DRV 病，又称“鸭出血性坏死性肝炎”，以肝脏不规则出血、坏死，心肌出血、脾脏肿大斑块状坏死为主要特征的疫病。各种品种鸭(如番鸭、半番鸭、麻鸭、北京鸭等)均可发生。目前对C-MDRV和N-DRV 的分子致病机理还不清楚。禽(鸡)呼肠孤病毒(Avian reovirus，ARV)病，即鸡呼肠孤病毒病，又称鸡病毒性关节炎，感染鸡主要表现为关节炎和腱鞘炎，也可引起呼吸道病、肠道病、矮小综合征等。禽类呼肠孤病毒病是目前危害养禽业健康发展的一种重要的传染病。

与ARV 和哺乳动物呼肠孤病毒(Mammalian reovirus，MRV)相似：DRV 的基因组也分为3 个群：L 组群(L1～3)、 M 组群(M1～3) 和 S 组群 (S1～4)基因，它们分别编码 λ、μ 和 σ 组蛋白。尽管 DRV 和ARV 有很多相似性，但它们在抗原性、宿主特异性、致病机理、电泳类型和基因编码蛋白的种类方面存在差异。例如DRV 外壳蛋白σC 是由S4 基因片段第二个开放阅读框编码(810 nt)；而ARV 和MRV 是由S1 基因片段第三个开放阅读框编码(977 nt)，并且DRV 与ARV 的σC 蛋白的相似性只有21 %。

近期， 《Pathogens》 发表了对 σA 蛋白表位的研究。σA 为呼肠孤的核衣壳蛋白，具有与dsRNA相结合的功能。σA 编码基因组高度保守，例如，DRV 和ARVσA 基因同源性高达87 %～89 %。本研究以表达的DRVσA 为免疫原，免疫小鼠获得抗σA 的5 株单克隆抗体；利用噬菌体展示和定点突变技术，鉴定两个最小表位：56EAPYPG61 和341WVV/MAGLI/V347；其中第341 位的 V/M 和 347位的I/V 分别是可相互替换的必须氨基酸。斑点杂交技术、免疫荧光试验技术和序列分析结果证明，EAPYPG 和 WVV/MAGLI/V 是 DRV 和 ARV 共有交叉表位。以表达的EAPYPG 和WVV/MAGLI/V 为包被抗原建立的ELISA 方法(Epitope-ELISA)，DRV/ARV 感染的血清检测结果为阳性，而SPF 鸭/ 鸡阴性血清以及对其他禽类病原感染阳性血清检测结果为阴性；该方法具有高度的特异性和敏感性。该表位Epitope-ELISA 技术可用于临床DRV/ARV 感染的血清学监测。总之，蛋白表位的研究不仅有助于对蛋白空间结构的解析，还为血清学诊断方法的建立提供技术支撑。