高密度脂蛋白胆固醇的检测方法及临床应用

2016-01-28梁牧丰

中国医药指南 2016年33期

关键词：沉淀法脂蛋白胆固醇

梁牧丰

（长春市绿园区城西医院，吉林长春 130062）

高密度脂蛋白胆固醇的检测方法及临床应用

梁牧丰

（长春市绿园区城西医院，吉林长春 130062）

目的不同HDL-C检测方法的临床应用评估。方法依据超速离心法、电泳法、化学沉淀法和均相测定法操作标准进行HDL-C含量测定，以NECP标准比较四种检测方法的精确度和变异系数。结果超速离心法耗时耗力，精密度较低；电泳法样品用量少，不适用于大规模样本检测；沉淀法方便快捷且精密度最高，适用于临床研究；均相法可完全自动化检测大规模样本。结论四种方法精密度均在NECP允许误差范围内。临床检验中，需根据样本数量、专业水平和仪器试剂等多方面因素选择最适宜的HDL-C检测方法。

HDL-C；检测方法；临床应用

流行病学研究显示，高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）表达水平与冠心病、肝硬化和动脉粥样硬化发病率成负相关关系，即HDL-C表达水平降低，疾病发病率会随之增加。因此，临床检测HDL-C体内含量具有极其重要的临床价值和意义。

1 HDL-C检测方法

近年来，HDL-C检测方法受到了国内外广泛关注，在临床实验室中已常规化。HDL-C检测方法主要包括超速离心法、电泳法、化学沉淀法和均相测定法。

1.1 超速离心法：美国疾病控制与预防中心和美国国家胆固醇教育计划（NECP）都将超速离心法定为HDL-C测定推荐参考方法。超速离心法分为三步：①超速离心去除富含TG的脂蛋白；②悬浮液用肝素-MnCl2处理，离心除去富含apoB的脂蛋白；③用ALBK法测定上清中HDL-C含量。超速离心法操作严格且较为复杂，耗时长且技术要求高，因此这种检测方法不适用于大规模样本检测。

1.2 电泳法：由于脂蛋白分子大小及其所带电荷数不同，因此在一定电场条件下具有不同的迁移率。血清中脂蛋白根据迁移速率不同可分为HDL、VLDL和LDL。HDL的分子量较小，具有较高的阳极迁移率，可与其他脂蛋白分开。HDL用choI基质试剂孵育后10%乙酸固定，然后在570 nm波长下扫描确定HDL-C含量。此法可用于高TG标本检测，多用于临床研究。

1.3 化学沉淀法：沉淀剂（如硫酸葡聚糖、聚乙二醇等）可以选择性与含有apoB脂蛋白（除HDL-C）聚合，HDL-C则溶解在上清液中，可用酶法测定其含量。中华医学会检验分会建议磷钨酸镁沉淀法为HDL-C检测推荐方法[1]，但由于其检测样本用量大，检测过程无法完全自动化，因此该检测法存在使用局限性。化学沉淀检测方法操作简单且价格便宜，NCEP推荐其为HDL-C常规检测方法。但是该检测法也存在着极大缺点，只能适用于实验室研究使用，并不适合大规模或临床大批量样本的检测。

1.4 均相测定法：均相法也称直接检测法，指以化学和免疫学为理论基础，不需要沉淀预处理能够用仪器自动化分析的检测方法。①聚乙二醇修饰酶法（PEGME法）即硫酸α-环糊精、DS、Mg2+与非HDL的脂蛋白形成聚合物沉淀，同时用PEG对酶进行修饰，修饰酶（对HDL选择性最大）与HDL直接作用，从而测定HDL-C含量。②免疫分离法（IS 法）包括PEG/抗体包裹法和抗体免疫分离法，日本国际试剂公司和日本和光制药公司分别研发出可供上述方法自动检测的商品化试剂盒。③选择性抑制法（PPD）是指用聚阴离子和某种表面活性剂能与脂蛋白（包含HDL）聚合，而另一种表面活性剂能够特异性的溶解HDL，然后用酶试剂检测溶液中HDL-C含量。④清除法分为反应促进剂-过氧化物酶清除法和过氧化氢酶清除法。均相法的优点是需要血清样本量较小，能够实现完全自动化，可进行大规模检测，适用于临床HDL-C检测。

2 临床资料

2001年NECP修改了成人体内HDL-C水平划分标准，定义HDL-C＜1.04 mmol/L时为降低，存在冠心病[2]、肝硬化和动脉粥样硬化发病风险。依据NCEP标准化程序规定，HDL-C检测方法总误差在13%以内；其密度＜1.09 mmol/L时标准偏差≤5%；密度≥1.09 mmol/L时变异系数 CV≤4%[3]。

2.1 一般资料：我院选取2014年10月至2015年4月共280例健康体检者血清样本，平均分成四组，每组70例。

2.2 方法和结果：第一组实验：取5 mL血清样品，用超速离心法检测HDL-C含量。专业工作人员用时4 d完成此组样本检测。结果显示，健康体检者中61例HDL-C含量＞1.09 mmol/L，SD=4.6%；而有9例HDL-C含量＜1.09 mmol/L，CV=2.8%。

第二组实验：取1 µL血清样品，用电泳法检测HDL-C含量。工作人员用时1 d完成此组样本检测。结果显示，59例HDL-C含量＞1.09 mmol/L，SD=4.1%；而有11例HDL-C含量＜1.09 mmol/L，CV=4.9%。

第三组实验：用葡聚糖沉淀法检测血清样品中HDL-C含量。工作人员用时1 d完成此组样本检测。结果显示，67例HDL-C含量＞1.09 mmol/L，SD=2.1%；而有3例HDL-C含量＜1.09 mmol/L，CV=2.4%。

第四组实验：用PEGME法检测血清样品中HDL-C含量。工作人员用时8 h完成此组样本检测。结果显示，66例HDL-C含量＞1.09 mmol/L，SD=3.9%；而有4例HDL-C含量＜1.09 mmol/L，CV=4.6%。