丹参对单侧输尿管结扎模型大鼠肾脏的保护作用

钟　丹　邹亦平　延卫东　黄宇清　陈小丽　王　娟

(井冈山大学临床医学院，江西　吉安　343009)



丹参对单侧输尿管结扎模型大鼠肾脏的保护作用

钟丹邹亦平1延卫东黄宇清陈小丽1王娟

(井冈山大学临床医学院，江西吉安343009)

摘要〔〕目的探讨丹参对单侧输尿管结扎(UUO)模型大鼠肾脏保护作用，初步探讨其抗肾间质纤维的机制。方法应用UUO致肾间质纤维化大鼠模型，SD雄性大鼠120只随机分为空白组，模型组，丹参组(高、中、低剂量)，吡格列酮组，每组20只，从模型建立前48 h开始灌胃，分别于造模后第7、14、21天，观察大鼠一般状态，检测各组大鼠体质量，24 h尿蛋白定量，血清肌酐水平，留取梗阻侧肾脏行HE、Masson染色，观察肾组织病理结构变化。结果模型组大鼠在各个时间点均出现一般状态减退，体质量下降，丹参干预后一般状态及体质量均有显著改善；在各个时间点24 h尿蛋白定量结果无明显差异，但UUO模型组大鼠血肌酐值增高，在造模第7天时，其肾组织可见肾小管上皮细胞变性、间质炎性细胞浸润、纤维组织增生等病理变化，丹参各剂量组与UUO模型组大鼠相比较血肌酐值下降明显，肾脏病理改变均有不同程度的改善，其中以丹参高剂量组改善最为明显。结论丹参对肾间质纤维化模型大鼠具有一定的保护作用，其抗肾间质纤维化的作用机制与降低血肌酐，改善大鼠一般状态，减轻肾脏病理损伤有关。

关键词〔〕丹参；肾间质纤维化；肌酐

1井冈山大学附属医院

第一作者：钟丹(1974-)，男，副主任医师，博士，主要从事肾脏疾病的临床教学研究。

血瘀证是肾小球疾病发病过程中的共性，它贯穿于慢性肾脏疾病-肾纤维化的所有阶段。活血化瘀类中药在治疗慢性肾病、防止及延缓肾纤维化中占有重要地位。丹参是活血化瘀的代表中药之一，药理学研究〔1〕表明，丹参对心脑血管系统、泌尿系统、免疫系统及呼吸系统等疾病均有显著作用。本研究拟观察丹参对单侧输尿管结扎(UUO)大鼠模型肾组织病变的影响，探讨其抗肾间质纤维化的机制。

1材料与方法

1.1实验药物及试剂丹参水煎液：采用江西本地产丹参，购自井冈山大学附属医院中药房，自行制备成水煎液。吡格列酮购自杭州中美华东制药有限公司，国药准字H20050500。

1.2实验动物及分组健康SD雄性大鼠，体质量(200±10)g，清洁级，由广州中医药大学实验动物中心提供，合格证号：0003467。适应性喂养1 w后，随机分为：空白组、模型组，吡格列酮组，丹参低、中，高剂量组，每组20只，自由饮水、进食。

1.3造模及给药方法采用UUO造模方法〔2〕，戊巴比妥钠皮下注射麻醉(5 mg/kg)大鼠，打开腹腔后结扎左侧输尿管，缝合腹腔。各组均于模型建立前48 h灌胃，丹参灌胃量分别按3、2、1 g·kg·d-1生药量灌胃给药，1次/d。模型组以等量生理盐水灌胃。吡格列酮组灌胃量为30 mg·kg-1·d-1。

1.4观察指标及检测方法

1.4.1大鼠一般状态死亡率、精神状况、大鼠皮毛、饮食、体重、活动、对外界刺激的反应等。

1.4.224 h尿蛋白定量测定代谢笼收集大鼠24 h尿液，考马斯亮蓝法测定尿蛋白量。

1.4.3血肌酐测定采用日立7170A型全自动生化测定仪测定。

1.4.4病理检测游离梗阻侧肾，扇形切取部分肾脏织，以10%中性甲醛固定后，脱水、浸蜡、石蜡包埋，切成4um厚度石蜡切片，分别行HE 染色及Masson 染色，光镜下观察肾小管间质的结构变化。

1.5统计学方法采用SPSS13.0统计软件进行单因素方差分析及秩和检验。

2结果

2.1一般状态实验过程中模型组及丹参低剂量组各有1只大鼠死亡，考虑麻醉过量所致。与空白组相比，其余各组大鼠在3个时间点均出现消瘦，精神萎靡，反应迟钝，毛发无光泽，动作迟缓等症状。与空白组比较，模型组大鼠体重明显下降，各药物治疗组大鼠体重也有一定程度上下降；与模型组比较，丹参高、中剂量组在造模后7、14、21 d均可显著改善UUO大鼠体重，以丹参高剂量组在造模后第7天时改善最为明显。见表1。

2.2丹参对模型大鼠24 h尿蛋白定量的影响各组大鼠在3个观察时点24 h尿蛋白定量无明显差异(P>0.05)。见表2。

2.3丹参对模型大鼠血肌酐的影响与空白组相比较，模型组血肌酐水平明显升高。与模型组相比较，丹参各剂量组及吡格列酮组血肌酐水平均有不同程度的降低，其中以丹参高剂量组在造模后第7天降低尤为明显。见表3。

2.4丹参对模型大鼠肾脏组织病理形态的影响HE、Masson 染色观察：造模第7天，UUO 模型组出现肾间质炎细胞浸润，纤维组织增生，伴有大部分肾小管上皮细胞颗粒、空泡变性，部分肾小管上皮细胞坏死脱落，可见肾小管灶状萎缩，部分肾小管腔可见脱落坏死组织及细胞形成颗粒管型及细胞管型；吡格列酮组、丹参组病理变化较UUO模型组减轻，其中尤以丹参高剂量组减轻最为明显。与模型组比较，在造模第14天以及第21天时，丹参各剂量组大鼠肾脏病理改变改善不明显。见图1。

时间点空白组(n=20)模型组(n=19)吡格列酮组(n=20)丹参高剂量组(n=20)丹参中剂量组(n=20)丹参低剂量组(n=19)造模后7d398.22±21.60219.50±20.174)222.35±30.324)341.15±22.512)3)263.27±18.771)3)211.33±33.114)造模后14d400.17±33.22246.11±23.674)250.33±21.184)356.37±30.121)3)288.36±25.311)3)244.15±26.174)造模后21d410.33±21.66251.26±18.934)260.16±27.584)368.23±22.111)3)300.26±19.671)3)255.66±33.374)

与模型组比较：1)P<0.05,2)P<0.01；与空白组比较：3)P<0.05,4)P<0.01,下表同

时间点空白组(n=20)模型组(n=19)吡格列酮组(n=20)丹参高剂量组(n=20)丹参中剂量组(n=20)丹参低剂量组(n=19)造模后7d3.26±0.394.18±0.334.48±0.514.55±0.784.80±0.574.33±0.15造模后14d3.56±0.564.58±1.074.90±1.224.78±1.364.79±1.074.31±1.78造模后21d3.66±0.134.66±0.364.91±0.604.80±0.614.83±1.024.30±0.16

时间点空白组(n=20)模型组(n=19)吡格列酮组(n=20)丹参高剂量组(n=20)丹参中剂量组(n=20)丹参低剂量组(n=19)造模后7d46.87±6.8166.88±18.314)47.43±15.011)39.71±16.122)48.38±17.231)48.43±11.071)造模后14d50.21±11.2168.21±10.234)47.43±15.011)42.86±19.021)47.36±11.361)46.23±15.171)造模后21d50.86±22.5371.62±12.664)47.43±15.011)46.23±13.561)47.18±13.331)46.7±10.031)

图1　各组大鼠肾脏组织病理形态(×200)

3讨论

各种肾脏疾病肾功能恶化的主要程度取决于肾间质受损的程度，肾间质纤维化轻重程度是决定肾脏疾病预后的重要因素〔3,4〕。肾间质纤维化是有多种细胞参与的进展性过程，在病变的不同时期，相继发生炎症反应、肌成纤维细胞激活、肾脏固有细胞凋亡以及细胞外基质成分的重塑和堆积〔5〕，在这一复杂的动态过程中，尤其是在出现无细胞性、弥漫性纤维化之前，特异性阻断某些关键环节有可能阻止纤维化的发生和发展，从而达到治疗的目的。肾小球滤过功能是肾小球的主要功能，机体产生的大部分代谢废物以及多余的水分均通过肾小球的滤过功能得以实现。肌酐是肌酸的终末代谢产物，主要经肾小球滤过排出，肌酐清除率可以在一定程度上代表肾小球滤过率的高低，因此，血肌酐值的升高在一定程度上反映了肾脏功能损害的程度。正常情况下，肾小球滤过膜可以阻止血浆中较大分子量的蛋白质滤入尿液，肾小球滤液中仅含有少量蛋白质，尿中肾性蛋白质增多可以在一定程度上代表肾小球滤过屏障或肾小管的损伤，但尿中蛋白含量的高低与肾脏损伤程度之间并不成正比关系。

传统中医理论虽无肾纤维化一词，但沈峥嵘等〔6〕、王刚等〔7〕指出在肾纤维化过程中，由于血流动力学的改变，凝血机制被激活，促成纤维素于肾组织中沉积，并刺激血小板凝集，形成血栓以及肾脏病理学的改变(如细胞外基质的积聚、血管襻、细胞的增殖，纤维蛋白样物的沉积、血栓形成、血管闭塞、局灶或节段性肾小球硬化与间质纤维化等)，都包含在“内结为血瘀”中。丹参始载于《神农本草经》，被列为上品，中医理论认为丹参苦、微寒，入心、心包及肝经，具有活血通络、祛瘀止痛、凉血消痈、清心除烦等功效。古有“一味丹参，功同四物”之说。自20世纪30年代以来，众多的学者对丹参的活性成分和药理作用进行了大量研究，并得到了许多化学成分，其药理学研究〔8～11〕表明，丹参对心脑血管系统、泌尿系统、免疫系统及呼吸系统等疾病均有显著作用。对中药抗肾纤维化用药规律探析结果表明丹参在24味常用的活血化瘀药物中使用频次高居第一位〔12〕，进一步说明丹参在抗纤维化方面疗效肯定。

本研究结果表明，丹参具有良好的抗肾纤维化作用，它在早期可以改善模型大鼠体重等一般状态，降低血肌酐值，减轻肾小管间质的微观病理损害，而且这种作用具有时间及剂量的依赖性，以丹参大剂量在早期效果最为明显。

参考文献4

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12贾秀琴，李雪梅.中药抗肾纤维化用药规律探析〔J〕.中国中西医结合肾病杂志,2006；12(7):739-40.

〔2015-06-19修回〕

(编辑苑云杰/曹梦园)

基金项目：江西省教育厅科学技术研究项目(No.GJJ12479)

中图分类号〔〕R285.5〔

文献标识码〕A〔

文章编号〕1005-9202(2015)23-6696-03；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2015.23.022