基质金属蛋白酶-9在宫颈癌血清中表达及临床意义①

吴英杰,李　影

(佳木斯大学附属第一医院妇产科，黑龙江 佳木斯 154003)



基质金属蛋白酶-9在宫颈癌血清中表达及临床意义①

吴英杰,李影

(佳木斯大学附属第一医院妇产科，黑龙江 佳木斯 154003)

摘要：目的:检测宫颈鳞癌患者血清中MMP-9表达水平,探讨MMP-9与宫颈癌患者相关的临床意义,为宫颈癌的临床诊断、监测、治疗及其预后的情况提供一定实验依据。方法：应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测了46例宫颈鳞癌患者、23例宫颈上皮内瘤变患者(CIN)和26例正常健康妇女的血清中MMP-9水平,并进行对照分析。结果：宫颈鳞癌患者的血清当中MMP-9水平明显高于宫颈上皮内瘤变(CIN)患者及健康妇女(P<0.01),MMP-9水平与患者的临床分期(P<0.05)、淋巴结转移有显著相关(P<0.01),术后血清MMP-9表达水平较术前明显下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论：通过检测宫颈癌患者血清MMP-9表达水平，可做为临床判断宫颈癌浸润和转移可靠指标。对宫颈鳞癌疾病诊断、治疗及其预后等提供一定良好的临床实验依据。

关键词：宫颈鳞癌；血清；CIN；MMP-9

宫颈癌是妇科最常见的恶性肿瘤，其发生率占女性生殖系统恶性肿瘤第一位。近年来我国调查、统计宫颈癌发病率有所增高，目前仍在持续上升[1],并呈年轻化趋势，且年轻患者预后差易复发，每年大约3万余名妇女死于宫颈癌[2]，对女性的健康及生命了构成严重威胁。因此，寻找其生物学行为的指标对临床诊断、治疗具有极其重要意义。MMP-9的异常表达和人类恶性肿瘤的浸润转移密切相关[3]。它是降解基底膜和细胞外基质成分的蛋白水解酶，在促进肿瘤血管形成、肿瘤生长及转移过程中起到主导作用。近年来多数研究都注重MMP-9在宫颈癌组织中的表达水平，但在宫颈癌患者血清中表达情况研究仍较少,本实验研究宫颈癌患者血清中的MMP-9表达水平，探讨血清MMP-9在宫颈癌发病机制，诊断、治疗及预后中的关系、分析其临床意义。

1　资料与方法

1.1一般资料

本实验采集95例女性血清。年龄28~62岁，中位年龄为42岁，其中46例宫颈鳞癌患者(来自佳木斯大学附属第一医院妇产科、佳木斯市中心医院2013-11~2014-12期间的住院患者，通过病理诊断确诊宫颈鳞癌)。采用FIGO,2009年的临床分期：Ⅰ期17例(ⅠA 7例、ⅠB、10例)、Ⅱ期18例(ⅡA 13例、ⅡB 5例)、Ⅲ期11例(ⅢA 8例、ⅢB 3例)。淋巴结转移：有淋巴结转移的宫颈癌患者21例、无淋巴结转移的宫颈癌患者25例。所有ⅠA-ⅡA的患者采用全子宫切除术或广泛子宫切除术及盆腔淋巴结切除术，ⅡB-ⅢB采用放疗。 23例为宫颈上皮内瘤变患者(CIN)，并且都排除了身体其他部位的肿瘤。26例为正常无宫颈疾病非妊娠健康妇女为对照组，肝功能、肾功能正常，均无心、肺、肝、胃、肾等重要器官的疾病，并无肿瘤家族史。所有的被检者均取得了研究对象的知情同意。

1.2主要试剂及仪器

(1)人MMP-9酶联免疫试剂盒购于长春广迈医疗器戒有限公司； (2)TGW16离心机，振荡器(美国Beekman公司)； (3)全自动酶标仪(美国ThermoEleetron)； (4)-80℃低温冰箱(佳木斯大学提供)。

1.3试验方法

采集所有宫颈鳞癌患者46例、宫颈上皮内瘤变23例及健康非妊娠无宫颈疾病妇女对照组26例血清标本。入院后术前各组在未经过任何治疗的情况下，清晨空腹采集了外周静脉血5mL,术后组与术后第7天采集了患者外周静脉血5mL，3000r/min离心20min，后取上清分别装于无菌的干燥试管，置于-80℃冰箱储存备用，采用酶联免疫吸附实验 (ELISA) 法检测MMP-9，操作步骤严格按说明书操作。

1.4统计学方法

2　结果

见表1~4。

表1　3组血清中MMP-9表达水平

分 组例数(n)浓度(ng/mL)正常健康对照组2697.98±12.73CIN组23156.92±17.33宫颈癌组46180.27±14.87

注： 宫颈癌-CIN P<0.01; 宫颈癌-正常 P<0.01; CIN-正常 P<0.01; 各组间比较 F=252.556， P<0.01。

临床分期组间比较， 随临床期别增高MMP-9水平增高，各组比较有统计学差异(P<0.05)。

无淋巴转移组与有淋巴转移比较，有明显统计学意义(P<0.01)。

MMP-9在宫颈癌术前和术后及正常健康对照组比较均有显著差异(P<0.01)。

3　讨论

宫颈癌是严重危害妇女健康、生命的最常见妇科恶性肿瘤，恶性肿瘤主要表现在侵袭和转移，它是导致患者死亡的主要原因。现研究从宫颈感染高危型 HPV病毒后经宫颈癌前病变(CIN)、原位癌最终形成浸润型宫颈鳞癌，是一个多因素、多步骤共同参与的复杂过程,在此过程中癌细胞需要穿透细胞外基质屏障、基底膜以及血管壁进入人体的生存微环境等多个复杂过程[4]。MMP -9是一种明胶酶型基质金属蛋白酶，,它能降解Ⅳ、Ⅴ型胶原和Ⅰ、Ⅴ型明胶，侵蚀正常组织表面的细胞外基质和基底膜,促使癌细胞沿着破坏的基底膜向周围组织浸润，并促进癌细胞转移[5，7]。此外，MMP-9还参与肿瘤新血管形成，其机制与降解血管基底膜和周围间质以及VEGF的合成和分泌有密切相关[8]。

江忠清等[9]、杜晓燕等[10]研究证明：MMP-9在宫颈癌组织中的阳性表达促进肿瘤新血管形成，并与临床分期、盆腔淋巴转移、组织学分化程度存在相关性。MMP -9在宫颈癌发生、发展及癌细胞扩散及转移过程中可能起至关重要作用。本研究显示宫颈癌患者血清中 MMP-9水平较正常健康人和宫颈CIN患者血清中MMP-9水平明显升高,说明宫颈癌组织具有分泌MMP-9的能力,随临床分期增高血清中MMP-9水平升高;有转移的患者血清中MMP-9水平较无转移者明显升高。表明：宫颈癌癌细胞可分泌大量MMP-9进入血环系统,其降解基底膜及细胞外基质,为癌细胞侵袭、转移过程中突破各种屏障奠定了一定基础,为癌细胞的浸润、转移创造有利的环境。综合本研究及上述研究结果，血清MMP-9水平与癌组织MMP-9表达一样可以反映宫颈癌的形成、侵袭和转移。徐希等[11]研究发现胃癌患者血清中MMP-9 水平显著高于健康人，其中有淋巴结转移者显著高于无淋巴结转移者，肿瘤浸润突破浆膜层者显著高于未突破浆膜层者，晚期胃癌(Ⅲ、Ⅳ) 显著高于早期胃癌(Ⅰ、Ⅱ期)，MMP-9是值得重视的胃癌监测指标。以上研究与本研究结果相似。

本实验研究中,在30例行宫颈癌手术的患者中,术后血清中MMP-9表达水平较术前明显下降,考虑手术祛除了MMP-9宫颈癌细胞分泌源，因此术后MMP-9下降，可见宫颈癌细胞及其引起其它分泌MMP-9在血清中占据一定重要比例，所以,检测血清中MMP-9水平对预测癌细胞的浸润、转移和预后判断具有重要价值。因此,我们认血清中MMP-9的表达水平能够反映宫颈癌患者机体肿瘤的负荷状态,检测血清中MMP-9的表达水平,对于宫颈癌的诊断治疗可能是一个较好的参考指标;能够为临床研究提供一定的实验依据。

参考文献：

[1]Missaoui Nabiha, Hmissa Sihem, Trabelsi Amel, et al.Asian Pacific.Cervix cancer in Tunisia: clinical and pathological study[J].Journal of Cancer Prevention, 2010, 11 (1)：235-238

[2]Racey C S,Withrow D R,Gesink D.Self-collected HPV testing improves participation in cervical cancer screening:a systematic review and meta-analysis [J].Can J Public Health,2013,104(2):159-166

[3]Zhang H, Wu J, Meng L, et al. Expression of vascular endo-thelial growth factor and its receptors KDR and Flt-1 in gastriccancer cells[J]. World J Gastro Enterol, 2002, 8 : 994-998

[4]宋继荣,潘月娜,董颖.MMP26、MMP14蛋白在正常宫颈、宫颈上皮内瘤变及浸润性宫颈鳞癌中的表达及意义[J]. 黑龙江医药科学，2011, 34(6):81-82

[5]Li X,WuJF.Recent developments in patent.anti-caner agents targeting the matrix:metalloproteinases .(MMPs)[J].Recent Pat Anticaner Drug Disov,2010,5(2):109-141

[6]Fingleton B,Matrix.metalloproteinases:roles in caner and metastasis [J].Front Bioseci,2006,11:479-491

[7]Libra M,Scalisi A,Vella N,et al .Uterine cervical cavcinoma :role of matrx metalloproteinases [J].Int J Oncol，2009,34:897-903

[8] 胡明，刘振平， 黄世杰，等.MMP-9在胃癌中的表达及与临床病理因素的关[J].黑龙江医药科学，2013，36(5):18-19

[9]江忠清， 朱凤川， 曲军英， 等.宫颈癌MMP-9表达与肿瘤血管生成、癌细胞增殖及侵袭转移的关系[J] .癌症，2003，22(2):178-184

[10]杜晓燕,孔卫平,张景丽,等.宫颈鳞癌组织中MMP-9和VEGF的表达与微血管密度相关性研究[J].现代中西医结合杂志，2013, 22(26):2857-2860

[11]徐希，陈伟昌，朱一凡，等.胃癌患者血清MMP-9、NGAL 水平及其临床意义[J].Chin J Gastroenterol,2014,19(8):468-171

中图分类号：R737.33

文献标识码：B

文章编号：1008-0104(2015)06-0107-02

作者简介：①吴英杰(1964～)女，黑龙江佳木斯人，学士，主任医师，硕士研究生导师。

通讯作者：李影(1974～)女，吉林长春人，在读硕士研究生，E-mail：598872593@qq.com。

(收稿日期：2015-03-09)