中成药天智颗粒对血管性痴呆大鼠脑内神经细胞增殖的影响

黎秀平 詹琳 李海燕 刘广倩

·实验研究·

中成药天智颗粒对血管性痴呆大鼠脑内神经细胞增殖的影响

黎秀平 詹琳 李海燕 刘广倩

目的研究中成药天智颗粒对血管性痴呆大鼠脑内神经细胞增殖的影响。方法80只健康雄性SD大鼠,将其随机分为空白对照组、假手术组、模型对照组、治疗组,各20只。模型对照组和治疗组大鼠均建立血管性痴呆模型,治疗组在造模后的60 d给予中成药天智颗粒灌胃处理,分别通过尿嘧啶脱氧核苷染色法和胶质纤维酸性蛋白染色法对大鼠神经细胞增殖情况进行测定和比较。分别对四组大鼠的学习记忆能力测试结果、免疫组织化学检测结果进行比较。结果空白对照组和假手术组大鼠的行为学习次数、尿嘧啶脱氧核苷(BrdU)阳性细胞计数、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)阳性细胞计数比较差异均无统计学意义(P＞0.05),且均显著优于天智颗粒治疗组和模型对照组,比较差异具有统计学意义(P＜0.05)；治疗组优于模型对照组(P＜0.05)。结论中成药天智颗粒可以抑制大鼠星形胶质细胞的增殖,但会促进神经前体细胞的增殖,并发挥改善大鼠的学习记忆能力的作用,效果良好。

天智颗粒；血管性痴呆；神经细胞增殖

血管性痴呆指的脑血管病变引起脑损害并致痴呆的情况,会对患者的学习记忆能力造成较为严重的损伤,特别是在我国老龄化程度加深,脑血管疾病发病率不断增加的情况下,血管性痴呆会严重影响老年患者的生存质量［1］。本文选择健康的SD大鼠建模并通过中成药天智颗粒干预血管痴呆模型后,对大鼠神经细胞的增值情况进行分析,了解大鼠的学习记忆能力改善情况,并探讨其临床应用价值。具体报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取老年健康SD大鼠80只作为研究对象,大鼠月龄14～18个月,平均月龄(16.1±0.4)个月,体重500～550 g,平均体重(522.4±20.5)g。将大鼠随机分为空白对照组、假手术组、模型对照组、治疗组,每组20只。实验前,四组大鼠一般资料比较差异均无统计学意义(P＞0.05),具有可比性。

1.2 方法 所有大鼠均在适宜条件下行1周的适应性喂养后,开始进行实验研究。

1.2.1 动物模型建立 除空白对照组外的三组大鼠均在建模前禁食12 h,禁水4 h,经腹腔注射3ml/kg水合氯醛实施麻醉。常规备皮消毒后,选择在大鼠的颈正中线做纵切口,切口长度约1.5cm。其中,假手术组的大鼠切开之后,仅做双侧颈总动脉钝性分离,但不结扎；模型对照组和治疗组大鼠则实施双重颈总动脉结扎处理,对慢性脑灌注不足的情况进行模拟,建立血管性痴呆模型。术后再次送入饲养室中进行饲养,并以造模后大鼠出现形体消瘦、精神萎靡、皮毛光泽下降、反应迟钝甚至是共济失调等的情况为血管性痴呆模型造模成功。

1.2.2 实验方法 四组大鼠均常规置于条件适宜的动物房中饲养,60 d后空白对照组不给予任何处理,假手术组和模型对照组的大鼠均给予生理盐水灌胃处理,治疗组大鼠给予中成药天智颗粒(河南省宛西制药股份有限公司,国药准字Z20040041)灌胃,给药剂量为5 g/(kg·d)。

采用三等分Y型迷宫箱测定大鼠的学习记忆能力,大鼠受到电击后的正常反应为：足底通电10 s内可一次性跑向安全区域。每只大鼠进行连续10次检测,以反应正确次数≥9次为学会,并通过大鼠达到“学会”标准所需电击次数来对其认知功能障碍程度进行判断。

迷宫实验结束之后,分别对大鼠进行BrdU染色和GFAP染色。经24 h禁食,将其送至实验室处死,经后颈部断头、颅骨去除等处理,将大鼠脑部皮质进行分离,获得左侧海马,同时切取海马齿状回前后组织各5mm,按照固定、脱水、透明、浸蜡、石蜡包埋、切片等的顺序对其进行处理,制作苏木精-伊红染色法(HE)切片备用。

每只大鼠随机抽取6张非连续性脑组织切片,采用双盲随机方法在200倍光学显微镜下对双侧海马区的BrdU、GFAP标记的阳性细胞进行观察和计数。

1.3 统计学方法 采用SPSS18.0统计学软件对研究数据进行统计分析。计量资料以均数±标准差(±s)表示,采用t检验；计数资料以率(%)表示,采用χ2检验。P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

分别对四组大鼠的学习记忆能力测试结果、免疫组织化学检测结果进行比较,结果可见空白对照组和假手术组大鼠的行为学习次数、BrdU阳性细胞计数、GFAP阳性细胞计数比较差异均无统计学意义(P＞0.05)；且均显著优于治疗组和模型对照组,比较差异均有统计学意义(P＜0.05)；治疗组优于模型对照组,差异有统计学意义(P＜0.05)。见表1。

表1 四组大鼠的学习记忆能力测试结果、免疫组织化学检测结果比较(±s)

注：与空白对照组比较,aP1＜0.05,bP2＜0.05,cP3＞0.05；与模型对照组比较,dP4＜0.05

组别 例数 行为学习次数(次) BrdU阳性细胞计数(n) GFAP阳性细胞计数(n)治疗组 20 10.55±0.56ad 8.69±1.03ad 24.11±3.08ad模型对照组 20 15.78±0.59b 3.57±0.78b 39.08±3.41b假手术组 20 7.56±0.38c 14.12±1.48c 15.98±2.99c空白对照组 20 7.23±0.34 14.59±1.82 14.07±2.89t1P1 23.198 0.000t2P2 12.907 0.000 15.045 0.000 35.827 0.000t3P3 23.109 0.000 29.762 0.000 0.552 0.891 0.691 0.743 0.901 0.553 21.382 0.000t4P4 16.091 0.000 18.620 0.000

3 讨论

目前,血管性痴呆发病率已经成为继阿尔茨海默病后的第二大类痴呆病［2］,在所有痴呆症患者中,所占的比例高达30.6%。患者患病后以认知功能障碍、记忆功能缺损等为主要临床表现,部分患者还伴有肢体运动障碍、语言交流障碍、视觉障碍或者人格障碍等,严重影响患者的生存质量［3］。

天智颗粒的组成成分主要包括：石决明、天麻、益母草、钩藤、藤槐花、首乌、杜仲、栀子等,可以发挥清热活血、平肝潜阳、补肝益肾的功效［4］,并能一定程度改善血管性痴呆患者的认知功能。本文以老年大鼠做动物模型,并对天智颗粒对大鼠脑内神经细胞增殖、学习记忆能力改善的影响进行了分析,发现其可以抑制大鼠星形胶质细胞的增殖,但会促进神经前体细胞的增殖,并发挥改善大鼠的学习记忆能力的作用,效果良好,虽然治疗组与空白对照组、假手术组的比较尚有一定的差距,但是明显优于模型对照组(P＜0.05)。

已有研究证实,患者的脑部发生缺血应激性损伤之后,能够通过促分裂素的释放诱发脑神经前体细胞增殖,进而诱导室管膜下区、海马齿状回等区正常静息休眠的前体细胞亚群增殖分化,促进多种细胞因子的释放,并进一步经自分泌或旁分泌作用促进细胞增殖,神经前体细胞数量的增加有利于患者学习记忆能力的改善。而胶质细胞在整个脑组织系统中发挥反应并反馈神经元活动信号的作用,通过特征性蛋白质胶质纤维酸性蛋白,能够对星形胶质细胞活化情况进行反映。一般情况下,脑缺血发生之后,患者的星形胶质细胞会出现迅速增殖,并可能对神经纤维传导、突触构建等过程造成影响,改变神经元、胶质细胞的比例,并参与老年痴呆的发生发展。

综上所述,中成药天智颗粒发挥抑制大鼠星形胶质细胞增殖的作用,提示其对于改善血管性痴呆也有一定作用。

［1］吴斌,徐清,顾君董,等.天智颗粒治疗轻、中度血管性痴呆疗效观察.中国健康心理学杂志,2013,21(12):1774-1775.

［2］马永明,耿亚.天智颗粒治疗血管性痴呆58例.中国中医药现代远程教育,2013,11(16):20-22.

［3］靳玮.甲酯化脂氧素A4对血管性痴呆大鼠认知功能的影响及对ERK/Nrf2和PI3K/Akt信号转导通路的作用.河北医科大学,2014.

［4］李建波,张殿印,侯玉琴.天智颗粒治疗血管性痴呆59例疗效观察.中国实用神经疾病杂志,2012,15(3):84-86.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2016.07.211

2015-12-11］

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