子宫内膜癌与PTEN、NDRG1的相关研究

步翠霞 王言奎

·论著·

子宫内膜癌与PTEN、NDRG1的相关研究

步翠霞 王言奎

目的研究子宫内膜癌中磷酸酯酶与张力蛋白同源物(PTEN)和分化相关基因1(NDRG1)的表达与临床病理因素的关系。方法运用免疫组化SP方法检测77例观察组病例(均为子宫内膜癌患者)、55例对照组病例［正常子宫内膜40例(增殖期23例、分泌期17例)、子宫内膜不典型增生15例］中PTEN和NDRG1的表达情况,分析子宫内膜癌中二者与各临床病理因素的关系。结果PTEN在正常子宫内膜中阳性表达率最高,为87.5%(35/40),在不典型增生内膜和子宫内膜癌中明显降低,分别为60.0%(9/15)、14.3%(11/77)。而NDRG1在子宫内膜癌中阳性表达率为87.0%(67/77),明显高于正常子宫内膜27.5%(11/40)和不典型增生内膜40.0%(6/15)(P＜0.01)。二者表达均与子宫内膜癌患者的年龄、临床分期无相关性,而与细胞分化程度、肌层浸润深度、有无淋巴结转移有关。结论PTEN和NDRG1与子宫内膜癌的发生、发展、转移有关。

子宫内膜癌；磷酸酯酶与张力蛋白同源物；分化相关基因1；免疫组化

子宫内膜癌是女性生殖道三大恶性肿瘤之一,近年来发病率在世界范围呈上升趋势,其病因至今不十分清楚。恶性肿瘤的发生、发展是一个多步骤、多基因的演变过程,抑癌基因失活和癌基因异常激活在此过程中可能起重要作用。进一步研究抑癌基因和癌基因在子宫内膜癌中的表达及相互作用,了解其与子宫内膜癌的发生、发展和预后的关系,有助于为子宫内膜癌患者预防、治疗提供新的科学依据。本次研究采用免疫组化方法检测子宫内膜癌中PTEN、NDRG1的表达,并探讨其临床意义,现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择本院妇产科2012年1月～2015年6月住院子宫内膜癌行手术的病例作为观察组,共77例,患者年龄42～71岁。选择对照组病例55例,其中正常子宫内膜40例(增殖期23例、分泌期17例)、子宫内膜不典型增生15例,患者年龄39～73岁。以上病例均经术后病理确诊,临床资料完整,均为生育后妇女,术前均未接受过化疗、放疗和激素等治疗。

1.2 主要试剂 即用型鼠抗人单克隆PTEN抗体购自福建迈新公司；兔抗人NDRG1多克隆抗体购自上海雅吉公司的浓缩型试剂,稀释倍数1：100；二抗、PBS冲洗液、DAB显色试剂购自北京中杉生物技术有限公司。

1.3 实验方法 PTEN和NFRG1均采用SP两步免疫组化染色法：标本经10%甲醛固定,石蜡包埋,采用4 μm厚度连续切片,按照试剂盒说明书进行操作。常规石蜡切片脱蜡水化,高压锅抗原修复1min,PBS冲洗加入一抗,4℃冰箱过夜,次日PBS冲洗,加二抗室温孵育30min,PBS冲洗后加DAB显色,苏木素复染5min,蒸馏水冲洗,中性树胶封片。每批切片均用已知阳性切片作为阳性对照,PBS缓冲液代替一抗作为阴性对照。

1.4 结果判定标准 PTEN阳性染色主要位于细胞核或细胞浆,呈黄色或棕黄色颗粒。NDRG1免疫组织化学阳性信号主要位于细胞质,部分位于细胞膜,呈浅黄色至棕黄色。请两位病理科医师采用双盲法观察切片,随机选取5个高倍镜视野(×400),每个视野计数100个细胞,观察阳性细胞所占的百分比并进行判断：阳性细胞率≤10%定义为阴性,阳性细胞率＞10%定义为阳性。

1.5 统计学方法 应用SPPS13.0统计学软件对研究数据进行统计分析。计数资料以率(%)表示,采用χ2检验。P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 PTEN和NDRG1在子宫内膜组织中的表达情况 PTEN在正常子宫内膜中阳性表达率最高,为87.5%(35/40),在不典型增生内膜和子宫内膜癌中明显降低,分别为60.0%(9/15)、14.3%(11/77)。而NDRG1在子宫内膜癌中阳性表达率为87.0%(67/77),明显高于正常子宫内膜27.5%(11/40)和不典型增生内膜40.0%(6/15)(P＜0.01)。见表1。

2.2 子宫内膜癌中PTEN、NDRG1表达与患者临床病理特征的关系 将子宫内膜癌的所有病例按照年龄、细胞分化程度、肌层浸润深度、有无淋巴结转移、临床分期进行分项,比较PTEN和NDRG1在不同项目中的表达情况, PTEN和NDRG1均与子宫内膜癌患者的年龄、临床分期无相关性,而与细胞分化程度、肌层浸润深度、有无淋巴结转移有关。PTEN在子宫内膜癌中高、中分化表达情况高于低分化；深肌层浸润中表达低于浅肌层浸润；有淋巴结转移的表达低于无转移。而NDRG1的表达正好相反,在子宫内膜癌中高、中分化表达高于低分化；深肌层浸润中表达高于浅肌层浸润；有淋巴结转移的表达高于无转移。见表2。

3 讨论

子宫内膜癌病变发展复杂,此过程中伴有多种基因和蛋白表达的失调。PTEN是第一个被发现的具有双特异磷酸酶活性的抑癌基因［1］,不仅能诱导细胞凋亡、抑制细胞分裂,而且作用于细胞生理多方面(包括细胞的转移、分化)。NDRG1作为一种细胞分化相关基因,与肿瘤的发生、发展及转移有密切联系,且能被多种分化调节剂诱导表达［2］,对肿瘤的治疗具有潜在作用。

本实验中作者应用免疫组化的方法研究了PTEN和NDRG1在子宫内膜癌中的表达,结果发现：PTEN的表达缺失和NDRG1的阳性表达,在正常子宫内膜、不典型增生内膜、子宫内膜癌中有明显升高趋势。另外发现：PTEN表达与子宫内膜癌细胞分化程度呈正相关,即子宫内膜细胞恶性程度越高、分化程度越低,PTEN的阳性率越低,即PTEN的表达缺失越明显。而NDRG1随着子宫内膜细胞恶性程度的增加,阳性表达趋势升高,两者表达趋势相反。

Bandyopadhyay等［2］研究了PTEN与NDRG1的表达关系,认为PTEN上调NDRG1基因,NDRG1基因是PTEN作用的靶基因之一,PTEN表达增加可提高NDRG1的表达。今后PTEN和NDRG1可作为肿瘤相关基因的候选基因,有望为肿瘤的临床诊治、预防及个体化治疗等提供新的方法。联合检测NDRG1和PTEN的表达可能对判断肿瘤的生物学行为具有重要价值。与传统的放化疗相比,肿瘤诱导分化治疗避免了杀伤正常细胞的不良反应,治疗肿瘤具有较好的前景［3,4］。随着研究的不断深入,PTEN和NDRG1的功能以及二者在子宫内膜癌中发生、发展、治疗和预后中的作用会进一步明确。

［1］Tortes J,Pulido R.The tumor suppressor PTEN is phosphorylated by the protien kinase CK2 at its C terminus.Implications for PTEN stability to preteasome mediated degration.J Biol Chem,2001,276(2):993-998.

［2］Bandyopadhyay S,Pai SK,Hirota S,et al.PTEN up-regulates the tumor metastisis suppressor gene Drg-1 in prostate and breast cancer.Cancer Res,2004,64(21):7655.

［3］王震,王国英,王芳.分化相关基因NDRG1与肿瘤.中华病理学杂志,2003,32(2):162-164.

［4］王立玮.分化相关基因NDRG1与肿瘤相关性的研究进展.实用肿瘤学杂志,2007,21(5):481-485.

Correlation research of endometrial cancer,PTEN and NDRG1

BU Cui-xia,WANG Yan-kui.Department of Obstetrics and Gynecology,Qingdao University Affiliated Hospital of Medical School,Qingdao 266003,China

ObjectiveTo research relationship between expressions of phosphatase and tensin homolog (PTEN) and N-myc downstream-regulated gene 1 (NDRG1) in endometrial cancer and clinical pathological factors.MethodsExpressions of PTEN and NDRG1 were detected by immunohistochemical SP method in observation group with 77 patients (all the cases with endometrial cancer) and control group with 55 patients ［40 cases with normal endometrium (23 cases at proliferating phase and 17 cases at secretory phase),15 cases with atypical endometrial hyperplasia］.Relationship between PTEN,NDRG1 and clinical pathological factors was analyzed.ResultsPTEN had the highest positive expression rate in normal endometrium as 87.5% (35/40),and its rates in atypical endometrial hyperplasia and endometrial cancer were obviously lower as 60.0% (9/15) and 14.3% (11/77).NDRG1 had much higher positive expression rate in endometrial cancer as 87.0% (67/77) than 27.5% (11/40) in normal endometrium and 40.0% (6/15) in atypical endometrial hyperplasia (P＜0.01).Their expressions were not correlated with age and clinical phase of endometrial cancer patients,while they all had correlation with cell differentiation,myometrial invasion,and lymphatic metastasis.ConclusionPTEN and NDRG1 are correlated with occurrence,development and metastasis of endometrial cancer.

Endometrial cancer; Phosphatase and tensin homolog; N-myc downstream-regulated gene 1; Immunohistochemistry

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2016.07.001

2015-12-24］

266003 青岛大学医学院附属医院妇产科

王言奎