香茯颗粒质量控制研究

俞　娟，王国凯

(安徽中医药大学，安徽 合肥　230012)



香茯颗粒质量控制研究

俞娟，王国凯

(安徽中医药大学，安徽 合肥230012)

[摘要]目的建立香茯颗粒质量控制的方法。方法采用薄层色谱法对香茯颗粒中茯苓、山楂、广藿香、木香进行鉴别，采用高效液相色谱法对香茯颗粒石榴皮中没食子酸含量进行测定。色谱条件：十八烷基键合硅胶为填充剂；乙腈-0.2%磷酸溶液(4∶96)为流动相；流速1.0 mL/min；检测波长为270 nm。结果薄层色谱法能定性检出茯苓、山楂、广藿香、木香，斑点清晰，分离度好，且阴性对照无干扰。没食子酸浓度在5.349～213.962 μg/mL范围内，与峰面积的线性关系良好(r=0.999 8)，平均加样回收率为98.48%(RSD=0.80%)。结论本研究所建立的定性、定量检测方法操作简便,结果准确可靠,重现性好。

[关键词]香茯颗粒；薄层色谱法；没食子酸；高效液相色谱法

香茯颗粒处方来源于临床经验方，有近30年的临床实践经验，其处方由广藿香、苍术、车前子、泽泻、茯苓、薏苡仁、石榴皮、山楂、木香、马齿苋共10味中药组成。临床实践表明，本方具有健脾和胃、化湿止泻的功效，用于治疗小儿脾胃失调、水湿不运所致的胸腹胀满、大便泄泻、小便不利、腹痛下坠、呕逆恶心。石榴皮中主要有效成分没食子酸是可水解鞣质的组成部分，具有较强的抗病毒、抗菌、抗癌、抗氧化等作用[1]。为了更好地控制香茯颗粒的质量，本研究采用薄层色谱法(thin-layer chromatography, TLC)对香茯颗粒中茯苓、山楂、广藿香、木香进行鉴别研究，并将石榴皮中没食子酸作为含量测定的指标性成分，建立了没食子酸的高效液相色谱测定方法。

1仪器和试药

1.1仪器岛津LC-10ADvp高效液相色谱仪，岛津SPD-M10Avp检测器，SIL-10A自动进样器，岛津LCsolution色谱工作站；METTLER TOLEDO (AB135-S)电子天平(十万分之一)。

1.2试药实验药材均购于涡阳县天润康药业有限公司，经鉴定均符合2010年版《中华人民共和国药典》的规定。香茯颗粒样品(自制，批号分别为130121、130122、130123)、没食子酸对照品(批号 110831-201204)、百秋李醇对照品(批号 110772-200404)、山楂对照药材(批号 121138-200905)、木香对照药材(批号 120921-200607)、茯苓对照药材(批号 121117-200504)均购于中国食品药品检定研究院。

2方法与结果

2.1香茯颗粒制剂工艺流程取广藿香、苍术、木香3味药，加8倍量水浸渍2 h，蒸馏4 h提取挥发油，备用，蒸馏后的水溶液另器收集。药渣与车前子、茯苓、薏苡仁、石榴皮、山楂、马齿苋、泽泻7味药合并，加水煎煮2次，每次10倍量，分别煎煮2 h，滤过，合并，浓缩(60 ℃)至相对密度为1.20，加乙醇使含醇量达到70%，充分搅拌，静置12 h，取上清液回收乙醇，并浓缩(60 ℃)至相对密度为1.20的稠膏，加入相当药材总量10%的糊精，混合均匀后，减压干燥，粉碎成细粉；再加入剩余量的糊精及蔗糖，混匀，加乙醇制粒，鼓风干燥2 h(70～80 ℃)，整粒，将挥发油用无水乙醇(1∶3)溶解并均匀喷入干燥颗粒中密闭2 h，制成1 000 g，即得。

2.2薄层鉴别

2.2.1茯苓薄层鉴别取本品颗粒30 g，研细，加乙醚100 mL回流40 min，滤过，滤液蒸干，加甲醇2 mL溶解，作为供试品溶液。取茯苓对照药材4 g，用供试品制备方法同法制成对照品溶液。按TLC(《中华人民共和国药典》2010年版一部附录ⅥB)试验，吸取上述两种溶液各10 μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，乙醚-石油醚(1∶1)(60～90 ℃)为展开剂[2-3]，展开，紫外灯365 nm波长下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性对照无干扰，结果见图1。

2.2.2山楂薄层鉴别取本品颗粒10 g，研细，甲醇100 mL回流40 min，滤过，滤液蒸干，残渣加20 mL使溶解，乙酸乙酯振摇提取2次，每次20 mL，合并提取液，蒸干，加甲醇1 mL溶解，作为供试品溶液。另取山楂对照药材2 g，加水100 mL煎煮40 min，滤过，浓缩至约20 mL，加稀盐酸溶液调节pH为1～2，乙酸乙酯振摇提取2次，每次20 mL，合并，蒸干，加甲醇1 mL溶解，作为对照品溶液。按TLC(《中华人民共和国药典》2010年版一部附录ⅥB)试验，吸取供试品溶液及对照品溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，环己烷-乙酸乙酯-甲酸(20∶20∶1)为展开剂，展开，10%硫酸乙醇显色，105 ℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰，结果见图2。

2.2.3广藿香薄层鉴别取本品颗粒30 g，研细，乙醚100 mL回流40 min，滤过，蒸干，加甲醇2 mL溶解，作为供试品溶液。另取百秋李醇对照品适量，加甲醇制成约1 mg/mL的对照品溶液。按TLC(《中华人民共和国药典》2010年版一部附录ⅥB)试验，吸取供试品溶液5 μL、对照品溶液1 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，石油醚(30～60 ℃)-乙酸乙酯-冰醋酸(95∶5∶0.2)为展开剂[4]，展开，1%香草醛硫酸溶液显色，105 ℃加热至斑点清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰，结果见图3。

2.2.4木香薄层鉴别取本品颗粒30 g，研细，乙醚100 mL回流40 min，滤过，蒸干，加甲醇2 mL溶解，作为供试品溶液。另取木香对照药材2 g，同法制成对照药材溶液。按TLC(《中华人民共和国药典》2010年版一部附录ⅥB)试验，吸取供试品溶液10 μL、对照药材溶液1 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，环己烷-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)的上层溶液为展开剂，展开，1%香草醛硫酸溶液显色，105 ℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰，结果见图4。

2.3含量测定

2.3.1色谱条件采用汉邦C18色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；以乙腈-0.2 %磷酸溶液(4∶96)为流动相[5]；检测波长：270 nm，柱温：25 ℃；流速：1 mL/min，进样量：20 μL。按没食子酸峰计理论板数应不低于3 000。

2.3.2对照品溶液的制备精密称取没食子酸对照品11.90 mg，置10 mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液；精密量取1 mL,置50 mL量瓶中，用50%甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，即得。

2.3.3供试品溶液的制备取本品颗粒研细，称取2.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50 mL，称定质量，加热回流1 h，放冷，再称定质量，用50%甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.3.4阴性样品制备按“2.1”和“2.3.3”项下方法，同法制成不含石榴皮的阴性样品溶液，按“2.3.1”项下色谱条件进行分析。在对照品相应的位置上，无明显其他峰出现，结果证明阴性样品对没食子酸测定无干扰。结果见图5。

图5香茯颗粒对照品(A)、样品(B)、阴性对照品(C)的高效液相色谱图

2.3.5标准曲线绘制分别精密量取对照品贮备液1 mL，加甲醇分别稀释至200、100、50、25、10、5 mL，摇匀。分别吸取20 μL进样，记录峰面积，以没食子酸对照品的峰面积(y)对没食子酸对照品浓度(x)进行回归，得回归方程y=62 395x-37 197，相关系数r=0.999 8(n=6)。试验结果表明，没食子酸对照品浓度在5.95～238.00 μg/mL范围内与峰面积的线性关系良好。

2.3.6精密度试验分别吸取同一份供试品溶液，测定6次，结果RSD=0.80%。试验结果表明精密度良好。

2.3.7稳定性试验取供试品溶液分别于0、2、4、8、12 h进样，记录峰面积，考察样品溶液的稳定性，结果RSD=1.43%。试验结果表明样品溶液在12 h内稳定。

2.3.8重复性试验取同一批样品(批号 130121)，按照含量测定项下的测定方法，测定6次，结果含量的RSD=0.80 %。试验结果表明重复性良好。

2.3.9加样回收率试验取同一批号(批号 130121)样品(每袋含量为4.25 mg)，取6份，每份称取1.25 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别加入没食子酸对照品适量，置相应锥形瓶中，按“2.3.3”项下方法制备供试品溶液。分别吸取20 μL进样，计算回收率，结果见表1。结果表明本法回收率良好。

表1　加样回收率试验结果

2.4样品的含量测定取香茯颗粒样品，按上述确定的色谱条件和测定方法进行含量测定，结果见表2。

表2　样品含量测定结果

3讨论

香茯颗粒中茯苓、山楂、广藿香、木香的TLC鉴别研究，分别以对照品、对照药材为对照，经方法学考察，薄层斑点分离良好，阴性无干扰，方法具有专属性和重现性，可作为质量控制定性指标。

高效液相色谱法测定香茯颗粒含量的研究中，流动性选择上曾采用甲醇-0.5%磷酸(5∶95)、甲醇-0.05%磷酸(5∶95)、乙腈-0.5%冰醋酸(10∶90)、甲醇-0.1%磷酸溶液(4∶96)、乙腈-0.2%磷酸溶液(4∶96)等为流动相分离没食子酸，结果流动相为乙腈-0.2%磷酸溶液(4∶96)时保留时间适宜，分离效果最佳。因此选用乙腈-0.2%磷酸溶液(4∶96)为流动相。供试品溶液提取条件的选择时，分别考察了回流、超声和索氏提取的制备方法、不同溶媒以及提取时间，确定最佳提取工艺为取本品颗粒研细，称取2.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50 mL，称定质量，加热回流1 h，放冷，再称定质量，用50%甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

参考文献：

[1]冯立娟，尹燕雷，招雪晴，等.石榴没食子酸代谢与保健功能研究进展[J].果树学报，2014，31(4):710-716.

[2]寇昆明，张超.藿香正气片中白芷、陈皮、茯苓的薄层色谱鉴别[J].基层中药杂志，2001，15(2):28.

[3]马莹.六味地黄胶囊中3种药材的薄层色谱鉴别[J].药物鉴定，2010，20(19):31-32.

[4]姜静，王彬彬，郑越中.藿香正气片中百秋李醇的薄层鉴别[J].航空航天医药，2003，14(1):44.

[5]张朔生.HPLC测定炮制前后石榴皮中没食子酸的含量[J].药物分析杂志，2010，30(6)：1104-1106.

Study on Quality Control of Xiangfu Granule

YUJuan,WANGGuo-kai

(AnhuiUniversityofChineseMedicine,AnhuiHefei230012,China)

[Abstract]ObjectiveTo develop a quality control method for Xiangfu Granule. MethodsThe qualitative identification of Poria cocos (Schw.) Wolf, Crataegus pinnatifida Bunge, Pogostemon cablin (Blanco) Benth, and Radix Dolomiaeae, all of which are ingredients of Xiangfu Granule, was carried out using thin-layer chromatography (TLC). The content of gallic acid, which is the principal component in Punica granatum L., another ingredient of Xiangfu Granule, was determined by high-performance liquid chroma-tography. For chromatography, octadecyl silane was used as the filler; a mixture of acetonitrile and phosphoric acid (0.2%) was applied as the mobile phase (4∶96); the flow rate was 1.0 mL/min; the detection wavelength was 270 nm. ResultsThe results of TLC showed that the relevant spots were clear and well-defined without interference in the negative controls. The concentration of gallic acid showed a good linear relationship with peak area within 5.349-213.962 μg/mL (r=0.999 8). The average recovery rate was 98.48% (relative standard deviation 0.80%). ConclusionThe qualitative and quantitative methods developed in this study are simple, accurate, reliable, and repeatable.

[Key words]Xiangfu Granule; thin-layer chromatography; gallic acid; high-performance liquid chromatography

收稿日期：(2014-09-22；编辑：曹健)

[中图分类号]R927.2[DOI]10.3969/j.issn.2095-7246.2015.02.025

作者简介：俞娟(1981-)，女，讲师