血浆hsa-miR-30a与高血压左室肥厚患者预后的关系

潘伟 赵娟 罗韶金 杨泽福 黄景文

临床研究

血浆hsa-miR-30a与高血压左室肥厚患者预后的关系

潘伟 赵娟 罗韶金 杨泽福 黄景文

目的 探讨血浆hsa-miR-30a与高血压左室肥厚（LVH）患者预后的关系。方法 随机入选118例高血压LVH患者，分为预后良好组（n=82）和预后不良组（n=36）。用real-time PCR法检测血浆hsamiR-30a的含量。研究预后不良的高血压LVH患者血浆hsa-miR-30a的变化。用Logistic回归研究血浆hsamiR-30a是否是高血压LVH患者预后不良的独立预测因子。结果 与预后良好组比较，预后不良组高血压LVH患者血浆hsa-miR-30a升高［（20.87±4.36）2-Δct*104比（11.24±2.15）2-Δct*104，P＜0.05］。血浆hsa-miR-30a升高是高血压LVH患者预后不良的独立预测因子（OR=2.57，P＜0.05）。结论 血浆hsa-miR-30a升高对高血压LVH患者预后不良有预测价值。

左心室肥厚； 高血压； miR-30a； 预后

左心室肥厚（left ventricular hypertrophy，LVH）是心血管疾病事件链中的中期阶段，作为一种重要的无症状器官损害指标，可预测高血压患者心血管死亡的发生[1-3]。本研究探讨血浆hsa-miR-30a与高血压左室肥厚患者预后的关系。

1 对象与方法

1.1 研究对象 2014年1月至2015年6月118例高血压LVH住院患者。LVH患者入选标准：超声心动图示室间隔厚度（IVSd）和（或）左室后壁厚度（LVPWd）≥1.2cm，EF＞40%。门诊随访结合电话随访6个月时LVH患者发生心衰、死亡、急性冠脉综合征（ACS）和卒中与否。剔除标准：收缩性心力衰竭、肿瘤、急性期感染、BNP＞400 ng/L、帕金森病、特发性肺纤维化、休克、肝硬化等近期应用过干扰素、苯巴比妥。所有入选患者均经过医院伦理委员会批准并签署知情同意书。

1.2 方法 所有入选患者完善一般临床资料，次日空腹采血，空腹时EDTA抗凝管收集全血，获取血浆，检测hsa-miR-30a。血尿酸、甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、血糖等采用检验科全自动生化分析仪检测，由专人质控。心脏超声检查由富有经验的超声医师完成，并测定IVSd、LVPWd。用EDTA抗凝管收集3 ml全血，室温放置1～2 h。1600 g，4℃，离心15 min，获取上层的血浆。12 000 g，4℃，15 min离心，获取上清放在-80℃保存。取 300μl血浆加入1.2 ml TRIzolRLS Reagent溶液及2μl人工合成的 celmiR-39（1 nM）作为内参，迅速震荡摇匀30 s，再加入200μl氯仿，强烈震荡20 s后静置3 min。室温，14 000 g离心10 min，获取上层水层。加入10μl SiO2吸附液，混匀，14 000 g离心5 min。弃上清，加入75%乙醇400μl，14 000 g离心5 min。弃上清，风干5 min，加入25 μlDEPC水溶解。10mm dNTP、RNase inhibitor、miR-30a逆转录引物、celmiR-39逆转录引物、5x buffer、M-MLV加入上溶液中，混匀后42℃孵育60 min→85℃孵育10 min。采用SYBR Green PCR Master Mix进行qRT-PCR，反应参数：95℃，5 min→95℃，15 s→65℃，15 s→72℃，32 s，40 cycles。引物序列：hsa-miR-30a FP：5′ACACTCCAGCTGGGTGTAAACATCCTCGACTG；cel-miR-39：5′ACACTCCAGCTGGGTCACCGGGTGTAAATCAGCT；miRNA_RP：5′CTCAACTGGTGTCGTGGA。

1.3 统计学方法 使用PASW Statistics 18.0统计软件分析。计量资料以±s表示，是否正态分布用Shapiro-Wilk检验。两组正态分布计量资料组间比较使用Student′s t检验；计数资料统计使用卡方检验。采用Logistic回归研究血浆hsa-miR-30a是否是LVH患者预后不良的独立预测因子。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 一般资料比较 按LVH患者6个月时是否发生心衰、ACS、卒中及死亡分为预后不良组和预后良好组。将不发生心衰、ACS、卒中及死亡定义为预后良好组（n=82），将发生心衰、ACS、卒中及死亡定义为预后不良组（n=36）。预后良好组和预后不良组间年龄、血压、血糖、总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、血肌酐等临床基线资料比较未见统计学差异（P＞0.05）。

2.2 两组患者血浆has-miR-30a水平比较 与预后良好组比较，预后不良组患者血浆has-miR-30a升高［（20.87±4.36）2-Δct×104比（11.24±2.15）2-Δct× 104，P＜0.05］。

2.3 血浆hsa-miR-30a与高血压LVH患者预后的关系 将hsa-miR-30a作为自变量，高血压LVH患者预后为因变量（近期预后不良y=1，预后良好y= 0），Logistic回归显示，hsa-miR-30a是高血压LVH患者预后不良的独立预测因子（OR=2.57，P＜0.05）。

3 讨论

在发达国家，1%～2%的成人患心力衰竭，而在70岁以上人群，该比例高达10%以上[4]。20世纪90年代前，60%～70%的心力衰竭患者在确诊5年内死亡。因心力衰竭住院的患者耗费了大量的医疗资源，患者生活质量严重下降。目前人类对心力衰竭发病机制的认识正不断深入，从20世纪40～60年代的心肾学说到70～80年代血流动力学说，再到90年代以来的心脏重构（cardiac remodeling）学说。

在各种病理刺激下，心脏出现实质和间质的结构改变，如心肌细胞肥厚、心脏间质纤维化等，称为心脏重构[5]。心脏重构是心力衰竭发生发展的基本机制。心肌肥厚是心脏重构的重要环节。高血压所致的心肌肥厚常表现为LVH。对高血压LVH的干预能延缓高血压患者心力衰竭的发生[6]。近年来，经过利尿剂、血管紧张素转换酶抑制剂（ACEI）、β受体阻滞剂、醛固酮受体阻滞剂等药物优化治疗和心脏再同步化治疗（cardiacresynchronizationtherapy，CRT）等器械治疗的综合治疗后，心衰患者预后较前有所改善，住院率减少了30%～50%，但仍不容乐观[7]，故对心力衰竭的早期识别与干预显得尤为重要。

MicroRNAs（miRNA）是一类在生物进化过程中高度保守的非编码微小RNA，通过降解目的mRNA或抑制其翻译，调节目的基因表达，进而影响细胞或生物个体的生理病理状态[8]。检测外周血miRNA作为疾病标志物的研究不断报道[9-11]。2008年Mitchell等[12]首次报道miRNAs在人的血浆中非常稳定，这是因为血浆中的miRNA被包在“exosomes”中。Exosomes是50～90 nm的小微粒，在血浆中非常丰富。临床上，活体心脏标本获得困难。通过研究患者外周血浆miRNA水平可以获取心脏疾病病理生理过程的信息。我们的前期研究[13]显示，LVH患者hsa-miR-30a升高。我们试图探讨血浆hsa-miR-30a与高血压LVH患者预后的关系。

评估LVH的传统检测手段有超声心动图（ultrasonic cardiogram，UCG）测量、心电图（electrocar－diogram，ECG）描记和心脏磁共振成像（MRI）。ECG诊断LVH的敏感性较低，但具有低消耗和实用性强的特点。ECG测量LVH的常用指标有Sokolow-lyon指数（SV1+RV5）、RavL电压和cornell电压-时间乘积。Sokolow-lyon指数＞3.5 mV、改良的Sokolow-lyon指数（最大S波+最大R波）＞3.5 mV、RavL＞1.1 mV、cornell电压-时间乘积＞244 mV×ms检出的LVH是心血管事件的独立预测因子[14]。UCG诊断LVH比ECG更敏感，且可更精确量化评估LVH[15]。但UCG测量LVH时与操作者切面的选择有关，主观性较强。MRI亦可以评估LVH，但费用较高。因而我们试图筛选出一种更优势（方便、检测费用相对低廉、客观性强、更精确）的评价LVH的检测方法。本研究结果显示，预后不良组高血压LVH患者血浆hsamiR-30a升高。那么，血浆hsa-miR-30a在高血压LVH患者预后预测中的价值如何呢，有待进一步临床证实。我们进一步的Logistic回归分析表明，血浆hsa-miR-30a上调（OR=2.57，P<0.05）是高血压LVH患者预后不良的独立预测因子。

研究[16]表明，治疗引发的LVH降低与心血管疾病风险显著降低相关。治疗后UCG、ECG和MRI所获得的反映LVH的临床参数发生改变的时间均在6个月以上，降低了其指导临床治疗的实用性，增加了医疗花费和时间成本[17]。需要寻找一种经干预后发生改变时间较快的指标。既然血浆hsamiR-30a上调是高血压LVH患者预后不良的独立预测因子，那么，治疗引起的血浆hsa-miR-30a改变是否能预测高血压LVH患者的临床预后，能否作为一种更方便、检测费用相对低廉、客观性强、更精确且能对干预早期反应的评价LVH的检测方法，需要进一步的临床研究证实。

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Relation of hsa-miR-30a and prognosis in hypertension patients with left ventricular hypertrophy

PAN Wei＊，ZHAO Juan，LUO Shao-jin，et al.＊Cardiovascular Department，Nanhai Hospital Affiliated to Southern Medical University，Foshan 528200，China

PAN Wei，E-mail：weipan1977@163.com

Objective To investigate the predictive value of prognosis in hypertension patients with left ventricular hypertrophy and hsa-miR-30a.Methods118 hypertension patients with left ventricular hypertrophy, divided into good prognosis group（n=82）and poor prognosis group（n=36），were randomly selected.The patients were detected the plasma hsa-miR-30a by real-time PCR.Whether plasma hsa-miR-30a could be independent predictor of left ventricular hypertrophy patients with poor prognosis or not was analyzed by Logistic regression.ResultsCompared with good prognosis group，plasma hsa-miR-30a increased in poor prognosis group［（11.24± 2.15）2-Δct*104vs（20.87±4.36）2-Δct*104，P＜0.05］.The plasma hsa-miR-30a was independent predictor of left ventricular hypertrophy patients with poor prognosis（OR=2.57，P＜0.05）.ConclusionThe plasma hsa-miR-30a has predictive value for left ventricular hypertrophy patients with poor prognosis.

Left ventricular hypertrophy； Hypertension； MicroRNA-30a； Prognosis

2014年广东省医学科研基金立项（项目编号：A2014712）

528200 广东省佛山市，南方医科大学附属南海医院心内科（潘伟、罗韶金、杨泽福、黄景文），超声科（赵娟）

潘伟，E-mail：weipan1977@163.com

10.3969/j.issn.1672－5301.2016.04.012

R544.1

A

1672-5301（2016）04-0334-03

2015-12-30）