穴位埋线对酒精性肝病大鼠的治疗作用

2016-01-22李瑞雪洒玉萍祁培宏曹志东

中国高原医学与生物学杂志 2015年4期

关键词：内毒素灌胃酒精性

李瑞雪，洒玉萍，祁培宏，袁　明，曹志东

(1.青海大学医学院；2.青海省中医院肝病科)

穴位埋线对酒精性肝病大鼠的治疗作用

李瑞雪1，洒玉萍1，祁培宏2，袁明1，曹志东1

(1.青海大学医学院；2.青海省中医院肝病科)

摘要目的研究穴位埋线对大鼠肝功及血清相关指标的影响，探讨丰隆(双)、三阴交(双)穴位埋线治疗酒精性肝病的作用机制及其疗效。方法应用分子生物学方法检测穴位埋线对酒精性肝病大鼠的治疗作用。穴位埋线组采用丰隆(双)、三阴交(双)穴位埋线，空白组、模型组予蒸馏水灌胃，硫普罗宁组予硫普罗宁混悬液灌胃，埋线加硫普罗宁组埋线治疗同时辅以硫普罗宁混悬液灌胃，治疗4周后检测大鼠血清天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、IL-1β，内毒素(LPS)的含量。结果与空白组比较，模型组血清ALT、AST、TNF-α、IL-1β，LPS水平显著升高(P<0.01)；治疗组上述指标与模型组比较下降显著(P<0.05)。结论穴位埋线对大鼠肝功及血清相关指标存在影响，丰隆(双)、三阴交(双)穴位埋线能通过降低血清AST、ALT、TNF-α、IL-1β及内毒素水平对酒精性肝病发挥治疗作用。

关键词穴位埋线酒精性肝病大鼠

THERAPEUTIC EFFECT OF POINT EMBEDDING THERAPY

ON ALCOHOLIC LIVER DISEASE IN RATS

Li Ruixue1，Sa Yuping1，Qi Peihong2，Yuan Ming1，Cao Zhidong1

(1.Qinghai University Medical College；

2.Qinghai Province Hospital of traditional Chinese Medicine，Division of Liver Diseases，

Qinghai Xining 810001，China)

Abstract ObjectiveTo observe the effect of acupoint catgut embedding therapy on hepatic function and serum related indicators in rats，and investigate the function mechanism of acupoint catgut embedding therapy of “fenglong”and“sanyinjiao”in treating alcoholic liver disease(ALD).Methods The therapeutic effects of acupoint catgut embedding therapy in rats with alcoholic liver disease were detected by molecular biology methods.Acupoint catgut embedding therapy at “fenglong”and“sanyinjiao” was applied in the point embedding therapy group.Rats in the blank and model group were administrated distilled water.The tiopronin group was administration with gastric perfusion of tiopronin suspention.The point embedding therapy combined with tiopronin group was treated with acupoint catgut embedding therapy，at the same time supplemented by tiopronin suspention.After treatment of 4 weeks，some indices were detected in the serum such as ALT，AST，TNF-α，IL-1β，LPS in each group.Results Compared with the blank group，the serum ALT，AST，TNF-α，IL-1β，LPS in model group were markedly higher(P<0.01)；The ALT，AST，TNF-α，IL-1β，LPS in serum was significantly lower in therapy group than that in model group(P<0.05)．Conclusion Acupoint catgut embedding therapy has a definite effect on hepatic function and serum related indicators in rats.Acupoint catgut embedding therapy of“fenglong”and“sanyinjiao” exert the therapeutic effect by reducing ALT，AST，TNF-α，IL-1β，LPS levels in serum on alcoholic liver disease .

KeywordsAcupoint catgut embedding therapyAlcoholic liver diseaseRats

穴位埋线已广泛用于非酒精性脂肪肝的治疗，疗效独特。刘旭东、王甍[1-2]研究发现穴位埋线通过对肝脏组织胰岛素JNK1信号通路的调控发生作用。然而，关于穴位埋线治疗酒精性肝病的作用机制不明。本研究旨在观察丰隆(双)、三阴交(双)穴位埋线对酒精性肝病大鼠血清天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、IL-1β，内毒素(LPS)含量的影响，进一步探讨穴位埋线对酒精性肝病的作用机制。

1材料与方法

1.1动物及饲料

清洁级SD雄性大鼠75只，重量170~190 g，由甘肃中医学院科研实验中心提供(许可证号：SCXK甘2011-0001)。普通饲料由甘肃中医学院科研实验中心配制。

1.2主要药物及仪器

红星牌56°二锅头白酒(北京红星股份有限公司)；硫普罗宁肠溶胶囊(海南惠普森医药生物技术有限公司，产品批号：140901)混悬液；埋线一次性器具(镇江高冠医疗器械有限公司)，3-0号羊肠线(上海浦东金环医疗用品股份有限公司)。DNM-9602酶标分析仪(北京普朗新技术有限公司)；RT-3000全自动洗板机(深圳雷杜生命科学股份有限公司)。ALT、AST、TNF-α、IL-1β、LPS试剂盒(北京瑞格博科技发展有限公司)。

1.3动物造模方法

大鼠适应性饲养3天后，随机分为两组，即空白组(15只)和ALD模型组(60只)。空白组大鼠每天中午蒸馏水灌胃，喂以普通饲料，自由饮水；ALD模型组大鼠采用梯度酒精灌胃法建立大鼠酒精性肝病动物模型[3]，即自实验第l周起按8 mL/kg予白酒灌胃；第2周按10 mL/kg灌胃；第3周按12 mL/kg灌胃；第4周按12 mL/kg灌胃；第5周按13 mL/kg灌胃；第6周按12 mL/kg灌胃；第7、8周按12 mL/kg灌胃，每日中午1次，喂以普通饲料，自由饮水。空白组灌胃剂量与模型组一致。ALD模型组连续酒精灌胃8周后，随机抽检动物，检测血清ALT，AST水平判断造模是否成功。

1.4分组及治疗方法

将ALD模型大鼠再随机分为模型组、硫普罗宁组、穴位埋线组、埋线加硫普罗宁组。空白组、模型组每天中午用蒸馏水灌胃1次(10mL/kg)，喂以普通饲料，自由饮水，持续4周；硫普罗宁组每天中午灌服硫普罗宁混悬液(10mL/kg)；穴位埋线组选用丰隆，三阴交[4]穴位埋线，用一次性埋线器具将0.5 cm羊肠线快速刺入上述穴位皮下，每周1次，两侧穴位交替进行；埋线加硫普罗宁组每天中午用硫普罗宁混悬液灌胃的同时辅以每周穴位埋线1次，连续治疗4周。

1.5观察指标及检测方法

1.5.1观察大鼠的一般状态，包括精神状态、皮毛色泽度、行为、大便、体重、死亡情况；每周称重1次，根据体重变化调整药物剂量。

1.5.2检测血清生化指标，治疗4周末大鼠禁食12小时(不禁水)，次日空腹剖杀，腹主动脉取血并分离血清，测定血清ALT、AST、TNF-α、IL-1β、LPS含量(严格按照试剂盒说明书操作)。

1.5.3检测肝指数，采血后，迅速摘取大鼠肝脏，称重，计算肝指数[肝指数 = 肝脏湿质量(g)/动物体质量(g)×100%]。

1.6统计学方法

采用SPSS19.0统计软件。计量资料用均数±标准差表示，组间比较采用单因素方差分析，以P<0.05为差异有统计学意义。

2实验结果

2.1一般状态

在造模过程中，初期灌胃时大鼠安静，无剧烈抵抗，后期灌胃大鼠抵抗剧烈。空白组大鼠，皮毛紧实光滑，食量大，动作敏捷，精神状态好，睡眠佳，大便呈颗粒状，未出现死亡。ALD模型组大鼠，皮色暗淡，脱毛严重，精神萎靡，暴躁易激惹，食欲不佳，大便粘滞不成形，夜间打斗撕咬，死亡情况严重。造模期间60只ALD模型组大鼠死亡28只。大鼠死亡原因：(1)极少数灌胃不当，食管捅破。(2)反复灌胃后，大鼠反抗剧烈，酒精吸入肺部所致。(3)酒精灌胃后，大鼠夜间相互撕咬所致。(4)急性酒精中毒死亡。

2.2穴位埋线大鼠肝指数(表1)

表1　各组大鼠肝脏指数比较±s)

表1显示，模型组大鼠的肝指数最高，埋线加硫普罗宁组大鼠肝指数最低，但各组间无统计学差异。

2.3穴位埋线大鼠血清ACT和AST值(表2)

表2　各组大鼠血清AST、ALT水平比较

注：△与空白组比较P<0.01；#与模型组比较P<0.05，##P<0.01.

表2显示，模型组大鼠血清AST、ALT水平显著升高，与空白组比较有显著性差异(P<0.01)，说明造模成功。与模型组比较，各治疗组血清AST、ALT水平显著降低，差异有显著统计学意义(P<0.05)，埋线加硫普罗宁组血清ALT水平表现更明显，差异具有极显著统计学意义(P<0.01)。

2.4穴位埋线大鼠血清TNF-α、IL-1β、LPS水平(表3)

表3　各组大鼠血清TNF-α、IL-1β、LPS水平比较

注：△与空白组比较P<0.01；#与模型组比较P<0.05，##P<0.01；*与硫普罗宁组比较P<0.05，**P<0.01.

表3显示，与空白组比较，模型组大鼠血清TNF-α、IL-1β、LPS水平显著升高，差异有统计学意义(P<0.01)。各治疗组血清TNF-α、IL-1β、LPS水平与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05)。穴位埋线组TNF-α、IL-1β、LPS水平，埋线加硫普罗宁组TNF-α、LPS水平与模型组比较差异有极显著统计学意义(P<0.01)。与硫普罗宁组比较，穴位埋线组LPS水平有显著统计学意义(P<0.05)，埋线加硫普罗宁组LPS水平有极显著统计学意义(P<0.01)。

3讨论

本研究结果显示，丰隆(双)、三阴交(双)穴位埋线可通过降低大鼠血清AST、ALT、TNF-α、IL-1β及内毒素水平，起到治疗酒精性肝病的目的。

中医虽尚无一个独立的病名与酒精性肝病相对应，但历代中医文献中对酒的特性、长期大量饮酒对机体的危害、尤其是对肝脏的损害已有较全面的认识，根据临床特点、发病过程将其概括在“胁痛”、“伤酒”、“酒风”、“酒劳”、“酒疸”、“酒癖”、“酒臌”、“酒胀”等范畴[5]。《诸病源候论》曰“酒者，水谷之精气也，其气剽悍而有大毒，入胃则酒胀气逆，內熏于肝胆，故气肝浮胆横。”黄坤载《四圣心源》：“酒酿之性，湿热之媒。其濡润之质，入于脏腑则生下湿。辛烈之气，腾于经络则生上热。”指出酒乃辛热有毒之品，过饮酒毒首犯肝胆，湿热蕴结体内，进而损伤脾胃肾，日久气、血、痰、湿、瘀、热相互搏结，结为积块，滞于胁下而成硬化之变。故临床治疗中多采取活血化瘀、清热利湿、健脾益气、理气止痛等治疗方法。本实验选用丰隆(双)、三阴交(双)穴位埋线治疗酒精性肝病。丰隆为足阳明胃经络穴，可宣通脾胃二经之气机，为祛痰之要穴，具有化湿除痰，和胃醒脾之功效。三阴交为足太阴脾经穴位，又为肝脾肾三经交汇穴，具有健脾疏肝补肾作用。两穴合用，起到化痰利湿，活血化瘀，疏肝健脾的功效[6]。

穴位埋线作为针灸的改良和延伸，是一种新兴的穴位刺激疗法，集针刺、埋针、刺血多种疗法于一体，发挥多种刺激效应，具有刺激性强，疗效持久，且无明显不良反应等优点。周晓玲、谢胜、侯秋科[7]研究表明取丰隆、足三里、太冲、三阴交，穴位埋线治疗非酒精性脂肪性肝病大鼠，治疗组大鼠血清ALT、AST水平有下降趋势，与模型组相比较差异有统计学意义(P<0.05)。龚秀杭[8-9]取中脘、气海、天枢(双)、脾俞(双)采用穴位埋线治疗非酒精性脂肪肝，结果显示患者血清ALT、AST、TG、CHOL、TNF-α水平明显降低，认为穴位埋线对非酒精性脂肪肝具有较好的治疗作用。

当慢性肝损伤严重时，肝细胞内的转氨酶释放入血，使得血清中ALT、AST水平升高，故ALT、AST是反映肝功的敏感指标，且其含量与肝损伤程度呈正相关。正常情况下，肠道细菌产生的内毒素(LPS)不会对人体产生损害，但长期过量饮酒所致的肠道菌群失调和肠粘膜屏障功能障碍，使得大量LPS吸收入血液循环。Kupffer细胞(KC)是肝内定居的巨噬细胞，能够清除LPS(吞噬功能)，当LPS超过肝脏的清除能力时，KC又可被LPS激活(分泌功能)，释放大量炎症细胞因子TNF-α、IL-6、IL-8、IL-1β等，诱导肝细胞坏死、凋亡，炎性细胞浸润；TNF-α又可促进其他炎症介质的释放，加重肝细胞的损伤，此时肝脏是LPS损害的主要靶器官[10-12]。TNF-α及内毒素在酒精性肝病的发病中具有重要作用[13]。实验结果显示，穴位埋线治疗后大鼠血清AST、ALT、TNF-α、IL-1β及内毒素水平显著下降，显示穴位埋线在一定程度上可保护肝细胞膜结构，防止脂质过氧化而造成的肝细胞损伤，达到保肝降酶的作用；能通过降低TNF-α、IL-1β的水平，减少肝细胞的凋亡和坏死；埋线加硫普罗宁组降低模型大鼠血浆内毒素水平疗效尤其明显，提示穴位埋线联合硫普罗宁能够通过降低内毒素水平，减弱内毒素对肝细胞的损害。

参考文献

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[7]周晓玲，谢胜，侯秋科.穴位埋线对非酒精性脂肪性肝病大鼠SREBP-1表达的影响[J].中国中医急症，2011，20(6)：902-903.

[8]龚秀杭．穴位埋线治疗非酒精性脂肪肝的临床研究[J].实用医学杂志，2012，28(11)：1902.

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