骨外伤病人耐甲氧西林金黄色葡萄球菌定植与感染的危险因素分析

王　翠，汪永强，陈敬忠，李长英，余华伟

Analysis of risk factors of colonization and infection of

Staphylococcus aureus in patients with bone injury

Wang Cui,Wang Yongqiang,Chen Jingzhong,et al

(Neijiang Second People’s Hospital of Sichuan Province,Sichuan 641001 China)



骨外伤病人耐甲氧西林金黄色葡萄球菌定植与感染的危险因素分析

王翠，汪永强，陈敬忠，李长英，余华伟

Analysis of risk factors of colonization and infection of

Staphylococcus aureus in patients with bone injury

Wang Cui,Wang Yongqiang,Chen Jingzhong,et al

(Neijiang Second People’s Hospital of Sichuan Province,Sichuan 641001 China)

摘要：[目的]探讨骨外伤病人住院期间获得耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)定植及感染情况，筛选危险因素。[方法]对我院骨外科病房住院病人通过直接采集病人鼻拭子等标本，运用双靶点基因扩增技术进行耐热核酸酶(NUC)基因与耐甲氧西林编码(MecA)基因检测，采用病例-对照研究方法对院内确诊MRSA定植与感染的病例，以1∶1配对予以对照，对可能影响因素先进行单因素分析，然后对单因素分析有统计学意义的变量进行逐步Logistic回归分析。[结果]从2012年1月—2014年11月共调查325例病人，其中入院前存在MRSA定植病人18例，伤口部位MRSA感染1例，共19例(5.8%)；306例病人未检测出MRSA定植与感染，入院后获得MRSA定植与感染62例(20.3%)，与入院前定植与感染比较，差异有统计学意义(χ2=29.3，P=0.000)；手术治疗、使用多种抗生素治疗、年龄大与合并慢性疾病是影响MRSA定植和感染的危险因素。[结论]骨外伤病人MRSA感染与定植的影响因素多，其中手术治疗、使用多种抗生素、年龄大与合并慢性疾病是MRSA感染与定植的独立影响因素。

关键词：骨外伤；MRSA;感染；定植；危险因素

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)是医院内最常见的多药耐药细菌，是引发医院内感染的主要病原菌之一，近年来MRSA感染率逐年上升并有局部暴发流行的趋势，病人尤其是外伤病人感染MRSA导致伤口久治不愈、住院时间延长、并发症增多等。为了解骨外伤病区MRSA感染与定植的危险因素，控制MRSA在病区间蔓延，本研究采用病例-对照研究方法，用双靶点基因探针扩增技术准确地检测MRSA，并对MRSA感染与定植的危险因素进行分析。现报道如下。

1对象与方法

1.1研究对象2012年1月—2014年11月在我院骨外科住院的骨外伤病人325例，于病人入院48 h内采集鼻拭子与伤口部位标本，经双靶点探针基因扩增技术检测耐热核酸酶(NUC)基因与耐甲氧西林编码(MecA)基因，两种基因均阳性者确定为MRSA，最后有306例MRSA阴性，确定为研究对象，其中男212例，女94例，按1∶1选择无MRSA定植与感染的骨外伤病人作为对照组(用NUC与MecA双靶点基因检测排除后确认)，按设计的调查表对纳入研究病人的临床资料进行收集与整理，包括基本信息、住院期间侵入性操作、抗菌药物的使用等有可能涉及的危险因素。

1.2标本采集于病人入院当日采集鼻拭子与伤口部位标本，用生理盐水浸湿无菌棉签对病人鼻前庭与伤口部位采样，对纳入研究的病人隔两天再采集鼻拭子、伤口分泌物标本，有呼吸道与尿路感染症状病人采集痰液与尿液。

1.3双靶点探针检测MRSA采用聚合酶链式反应(PCR)及荧光标记探针技术快速检测样本中金黄色葡萄球菌特有的NUC基因(确定是否为金黄色葡萄球菌)和MecA基因(与NUC基因同时阳性才可以确定为MRSA)。检测方法:严格按说明书进行(泰普生物科学中国有限公司)，待测样本加入核酸提取固形物，高速涡旋震荡5 min，瞬时离心加入内参，即可冰浴离心后95 ℃干浴2 min，上清液用于核酸扩增模板；PCR扩增程序：37 ℃ 2 min，94 ℃ 2 min(94 ℃ 15 s,55 ℃45 s,40循环)，反应体积50 μL；NUC检测荧光素：FAM；MecA检测荧光素：HEX,内参荧光：Texas Red,PCR仪为ABI 7500五通道核酸扩增仪。

1.4定植与感染的诊断标准MRSA定植是指病人鼻前庭检测出MRSA。MRSA感染指病人临床标本检测出MRSA并有相应的临床症状，诊断标准依据2001年卫生部《医院感染诊断标准(试行)》。入院前MRSA定植与感染的判断：指病人入院≤48 h鼻前庭检出MRSA或临床诊断MRSA感染；入院后获得MRSA定植与感染的判断:指入院>48 h鼻前庭检出MRSA或临床诊断MRSA感染。

1.5统计学处理采用SPSS17.0统计软件，先进行单因素χ2检验与t检验，然后对单因素分析有统计学意义的变量进行逐步Logistic回归分析。

2结果

2.1NUC与MecA双靶点探针基因检测MRSA结果传统检测MRSA为显色培养基法，于36 ℃培养24 h观察结果，在固体培养基表面观察到粉红色菌落后，用胶乳凝集实验，最后做MecA基因扩增，此方法导致非金黄色葡萄球菌MecA基因阳性，造成MRSA感染诊断的误诊(结果待发表)，而本研究采用的双靶点探针加上内参探针，可以准确地检出是否存在MRSA感染或定植，达到早诊断、早治疗。图1、图2所示：只有NUC与MecA基因同时阳性才可以确定为MRSA。

图1　MecA基因(耐药基因)检测扩增图

图2　NUC基因(金黄色葡萄球菌)检测增图

2.2入院前MRSA定植/感染与入院后MRSA定植/感染的比较从2012年1月—2014年11月共调查325例病人，其中入院前MRSA定植病人18例，伤口部位MRSA感染1例，共占5.8%(19/325)；306例病人在入院时未检测出MRSA定植与感染，入院后获得MRSA感染与定植62例，占20.3%(62/306)，与入院前定植与感染比较，差异有统计学意义(χ2=29.3，P=0.000)。

2.3影响MRSA定植与感染的危险因素入院时未检测出MRSA的306例病人，入院后定植与感染者62例(研究组)，未定植或感染者244例(对照组)，单因素分析显示8个变量是影响MRSA定植与感染的危险因素(P<0.05)，见表1。 对有统计学意义的8个变量进行非条件Logistic回归分析，筛选出独立危险因素，按照OR值的大小，分别为手术治疗、使用多种抗生素治疗、年龄大、合并慢性疾病。见表2。

表1　骨外伤病人MRSA定植与感染的单因素分析结果

表2　骨外伤病人MRSA定植与感染的Logistic回归分析结果

3讨论

自1961年英国首先报道MRSA后，随着抗生素滥用与不正确治疗方法的应用，临床上检出了不同克隆型别的菌株，而且在全球快速蔓延，MRSA的治疗难度大、病死率高，已经成为医院感染中的严重问题，与乙型病毒性肝炎、艾滋病并列为世界三大感染性疾病[1]。MRSA的流行特点以及人体部位感染情况也发生了变化，成为医院感染与社区获得性感染的重要病原菌。据报道，西方发达国家如美国医院感染的8%由MRSA引起，英国在20世纪90年代初2%的葡萄球菌菌血症是由MRSA引起，现已达45%，形势非常严峻[2-3]。最新文献报道：社区获得性MRSA在儿童颈部感染检出率达80%[4]，我国目前MRSA的临床分离率也呈上升趋势，高达84%[5]。本研究采用双靶点核酸荧光扩增技术，与目前临床上检测MRSA主要依据显色平板的方法比较，准确性和特异性均较高，入院前MRSA定植或感染者为5.8%，入院后在医院获得MRSA感染与定植者为20.3%。虽然此文献报道的感染率低[2-3]，但MRSA引起的医院感染不容忽视。

对不同病种与病房进行MRSA感染危险因素分析，可指导临床采取有效防止措施从而减少MRSA感染的机会。据报道：神经内科病人住院期间MRSA获得与多项因素相关,入院前30 d内或住院期间进行手术及住院期间转床是住院期间MRSA获得的独立危险因素[6];采用病例对照研究方案，单因素分析和Logistic多因素回归分析均表明,在神经外科病人住院天数≥30 d、抗菌药物使用时间≥30 d、抗菌药物种类≥5种、气管切开、格拉斯哥昏迷(GCS)评分≤5分与MRSA引起的医院肺炎呈线性正相关[7]。脊柱融合术后MRSA感染的独立危险因素是长时间持续性吸引致引流管闭合，术后尽早开启有利于减少MRSA感染的风险[8]。骨外科病人以创伤或车祸伤居多，伤口感染几率增高，目前尚未见国内骨外伤病人MRSA定植与感染危险因素分析，本研究采用病例对照研究方法，先进行单因素分析，筛选出有统计学意义的危险指标，再对单因素分析有统计学意义的变量进行逐步Logistic回归分析，结果显示：MRSA定植与感染的危险因素分别为手术治疗、使用多种抗生素治疗、年龄大、合并慢性疾病。

以上4种危险因素中手术治疗、年龄大、合并慢性疾病是客观存在的，医务人员应该加强消毒与隔离措施，对筛查出MRSA定植或感染的病人应采取隔离措施，病房应有提醒标志，提示所有工作人员严格执行洗手与隔离制度，病人所使用的检查设备应及时消毒处理，但使用多种抗生素治疗这一危险因素是医生可以控制的，尤其是预防性使用多种抗生素应严格控制，因此合理使用抗生素的落实还有待进一步加强。

参考文献：

[1]方晓霞,陈维媚,王文天,等.2004年至2005年MRSA调查分析[J].中国微生态学杂志,2007,19(5)：457-459．

[2]Gmndmann H,Airesde Sousa M,Boyce J,etal.Emergence and resurgence of methicillin-resistant staphylococcus aureus as a public health threat[J].Lancet,2006,368(9538)：874-885．

[3]Sholl AF.Epidemiology of staphylocococcal resistance[J].Clin Infect Dis,2007,45(suppl 3)：171-176．

[4]Brook I.The increased risk of community-acquired methicillin-resistant staphylococcus aureus in neck infections in young children[J].Curr Infect Dis Rep,2012,14(2)：119-120.

[5]陈坚,王彩虹,王金国,等.不同来源的金黄色葡萄球菌耐药率比较分析[J].中华医院感染学杂志,2009,19(3)：571-573．

[6]尹丽霞，赵薇，刘帅,等.神经内科病房耐甲氧西林金黄色葡萄球菌定植现状及危险因素分析[J].中国消毒学杂志,2009,26(5):507-509.

[7]庄锦屏,陈默蕊,吴灿霞,等.神经外科耐甲氧西林金黄色葡萄球菌肺炎病人的危险因素分析及护理[J].护理研究,2010,24(5C):1368-1369.

[8]Rao SB,Vasquez G,Harrop J,etal.Risk factors for surgical site infections following spinal fusion procedures:a case-control study[J].Clin Infect Dis,2011,53(7):686-692.

(本文编辑李亚琴)

收稿日期：(2015-04-26；修回日期：2015-12-14)

作者简介王翠，主管护师，本科，单位：641001，四川省内江市第二人民医院；汪永强、陈敬忠、李长英、余华伟单位：641001，四川省内江市第二人民医院。

基金项目国际医学研究基金(亚洲区)临床微生物学专项 ，编号：CNSC-J2011-A330-ZB016；四川省卫生厅科研课题，编号：120296。

中图分类号：R471

文献标识码：A

doi:10.3969/j.issn.1009-6493.2016.01.018

文章编号：1009-6493(2016)01A-0063-03