蒙医五味甘露浴对佐剂性关节炎大鼠5-HT、DA、NE的影响

通信作者：陈英松(1979-)，E-mail：cys1979@126.com.

蒙医五味甘露浴对佐剂性关节炎大鼠5-HT、DA、NE的影响

张丽霞水玲陈英松*

内蒙古医科大学,内蒙古呼和浩特010110

【摘要】目的：观察蒙医五味甘露浴对佐剂性关节炎大鼠下丘脑中五-羟色胺(5-HT)、多巴胺(DA)、去甲肾上腺素(NE)含量的影响。方法：将40只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、来氟米特组和五味甘露浴组，每组10只。除正常对照组外，其余各组大鼠进行造模，在无菌条件下将大鼠右后足趾部注射0.1ml的CFA(完全弗氏佐剂)致炎，正常对照组注射同剂量的生理盐水。造模后第3d，对药浴组进行1次/d，30min/次的治疗，连续药浴治疗15d[温度为(40±2)℃]。同样的方法，对正常对照组和模型组做温水浴治疗作为对照。来氟米特组以0.17g/kg剂量灌胃进行治疗15d。采用ELISA法检测大鼠5-HT、DA、NE的含量。结果：与正常对照组相比，模型组5-HT、DA、NE的含量明显升高(P<0.05)，五味甘露浴组、来氟米特组与模型组比5-HT、DA、NE的含量明显降低(P<0.05)，差异有统计学意义，蒙医五味甘露浴组与来氟米特组比，5-HT、DA、NE的含量明显降低，但差异无统计学意义(P>0.05)。结论：蒙医五味甘露浴可能通过调节AA大鼠5-HT、DA、NE的含量，对AA起到抗炎、镇痛作用。

【关键词】蒙医五味甘露浴;AA大鼠;神经递质

基金项目：“青年科技英才支持计划”项目(编号NJYT-12-B22)。

作者简介：张丽霞(1988-)，女，研究生在读，E-mail：410318032@qq.com.

【中图分类号】R291.2

【文献标志码】A

【文章编号】1007-8517(2015)22-0009-02

Abstract:Objective To observe the effect of Five Herbs Medicated Bathing therapy in mongolian medicine on 5-HT, DA, NE in adjuvant arthritis rats.Methods 40 male SD rats were randomly divided into normal control group, model group, leflunomide group and five herbs medicated bathing group, 10 rats in each group. Except the normal control group, the rest groups were modeling under sterile conditions. The right plantar of the rats were injected 0.1 ml of the CFA (complete Freund's adjuvant, CFA) to be inflammatory and normal control group were injected with the same dose of saline. After 3 days, the treatment groups were given 1times/d of bath, 30min/ times for 15d [temperature is (40±2)℃]. The same method, the normal control group and the model group were treated with warm water bath as a control. The leflunomide group lavage with 0.17 g/kg dose for 15d. The contents of 5-HT, DA and NE were detected by ELISA assay. Results compared with normal control group, the content of 5-HT, DA and NE in model group was significantly higher (P<0.05), the content of 5-HT, DA and NE in the leflunomide group and five herbs medicated bathing group was significantly lower than model group(P<0.05), the difference was statistically significant. The content of 5-HT, DA and NE in the five herbs medicated bathing group was significantly lower than that in leflunomide group, but there was no statistically significant difference(P>0.05).Conclusion five herbs medicated bathing may regulate the content of DA, NE and 5-HT to anti-inflammatory, analgesic effect on rats of AA.

Keywords:Mongolian Medicine Five Herbs Medicated Bathing; AA rats; Neurotransmitter

收稿日期：(2015.09.16)

Effect of Five Herbs Medicated Bathing Therapy in Mongolian Medicine on 5-HT,

DA, NE in Rats Model of Adjuvant Arthritis

ZHANG LixiaSHUI LingCHEN Yingsong*

Inner Mongolia Medical University, Hohhot 010110，China

蒙医五味甘露药浴由小白蒿，水柏枝、麻黄各，杜鹃叶、刺柏五种药物组成，是蒙医临床外治法中的重要疗法之一，目前广泛运用于临床。其不仅具有悠久的历史和独特的理论，同时具有毒副作用小、疗效明显、简便易行、临床应用广范等特点。蒙医五味甘露浴在临床上治疗类风湿关节炎(rheumatoid arthritis，RA)方面具有非常显著的疗效，未发现毒副作用。本研究采用CFA诱导的佐剂性关节炎(adjuvant arthritis，AA)模型大鼠，检测治疗前后5-HT、DA、NE含量的变化，探讨蒙医五味甘露浴的抗炎及镇痛机制。

1材料

1.1实验动物、药物与试剂取4~6周龄清洁级雄性SD大鼠[SCXK(军)2012-0004] 40只，体重180~200g，由北京实验动物科技有限公司提供，进行3d适应性饲养，自由饮水和摄食。

完全弗氏佐剂(CFA, Sigma公司产品)，五-羟色胺(5-HT)、多巴胺(DA)、去甲肾上腺素(NE)，ELISA检测试剂盒，北京新亚太生物科技有限公司提供，批号分别为：DZE30326、DZE30237、DZE30587；蒙医五味甘露浴剂，国家蒙药制剂中心内蒙古自治区中蒙医医院中心制剂室提供(批号：720121110)。来氟米特，由苏州长征-欣凯制药有限公司提供(国药准字号：H20000550)。

1.2仪器80-2式离心机由金坛市化城敏科实验仪器厂提供；特制浴疗器等。

2方法

2.1动物分组与造模将正常雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、来氟米特组和五味甘露浴组，每组10只。对模型组、来氟米特组、五味甘露浴组大鼠进行造模。在无菌条件下给予大鼠右后足趾注射0.1ml的CFA(内含0.1℅灭活结核杆菌)致炎[1]，正常对照组注射同剂量的0.9%的生理盐水，之后针眼处涂抹紫药水。

2.2治疗方法正常对照组：造模后第3天，对该组进行1次/d，30min/次的治疗，连续温水浴治疗15d[温度为(40±2)℃]。治疗方法：在长50cm、宽30cm、高20cm的半透明塑料容器中加入温度为(40±2)℃的清洁饮用水1000ml，将大鼠的四肢和尾部浸泡在温水中，治疗结束后用清洁毛巾擦拭干净后放入鼠笼中。

模型组：治疗方法与正常对照组相同。

来氟米特组：造模后第3天开始来氟米特灌胃，0.17g/kg的给药量1次/d，连续灌胃15d。

药浴组：治疗方法为在长50cm、宽30cm、高20cm的半透明塑料容器中加入浓度为33.4%的蒙医五味甘露浴1000ml，浸泡方法与正常对照组相同。

2.3取材、检测方法末次治疗后24h，用乌拉坦腹部皮下麻醉大鼠，将大鼠断头处死，在冰上剥离大脑，迅速完整取下丘脑，并称重后置于速冻管，用液氮快速冷冻，放入-80 ℃冰箱保存待测。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠5-HT、NE、DA的含量，按试剂盒说明操作。

3结果

与正常对照组相比，模型组5-HT、DA、NE的含量明显升高(P<0.05)，五味甘露浴组、来氟米特组与模型组比5-HT、DA、NE的含量明显降低，差异有统计学意义(P<0.05)，蒙医五味甘露浴组与来氟米特组比，5-HT、DA、NE的含量明显降低，但差异无统计学意义(P>0.05)。

表1　各组大鼠下丘脑5-HT、DA、NE含量的比较

4讨论

类风湿关节炎是一种病因未明的慢性、以炎性滑膜炎为主的系统性、自身免疫性疾病。临床表现为关节红肿热痛和活动障碍，并伴有不同程度的僵硬畸形、骨和骨骼肌的萎缩，是目前造成人类丧失劳动力和致残的主要原因之一。RA是一种主要累及关节滑膜的慢性、炎症性自身免疫性疾病[2]，是世界医学界公认的难治性疾病，其发病机制仍不清楚。据统计，我国患病率为0.3%～0.4%[3-5]。大鼠佐剂性关节模型与类风湿关节炎在病理机制、临床表现、病理学和免疫学改变等方面有许多相似特征，佐剂能较好地模拟免疫紊乱和炎症反应，故佐剂性关节炎是建立免疫性炎症动物模型的最常用的方法。国内外学者[6]认为用CFA诱发的大鼠关节炎模型的疼痛特点具有持续性，可以成为良好的临床痛证研究的动物模型。佐剂性关节炎大鼠致痛的机制为炎症局部血小板被激活，释放出5-HT，超过了MAO的代谢能力而产生疼痛。因游离的5-HT是一种致痛物质，其减少途径可能是使血小板对5-HT吸收增加及再释放减少[7]，并使较多的5-HT贮存于胃壁的APUD细胞内，使5-HT释放入血的量减少[8]。虽然DA、NE不是直接的致痛物质，但疼痛时可能会出现一系列的自主神经反应，特别是在交感神经系统；NE作为交感神经递质，当疼痛发生时，NE的含量会升高。在这次实验中，蒙医五味甘露浴能抑制交感神经的过度兴奋，使DA、NE含量下降；同时，DA、NE含量的降低又有助于改善炎症局部血液循环，促使致痛物质发生转运和清除，从而使疼痛减轻。

关节炎属蒙医“托来”病范畴，其治病因素是“黄水”，黄水增盛，并与血交搏注关节，导致局部气血运行受阻所致。诱发本病之常见因素有关节拐伤，强劳内伤，酗酒，饮食过多，汗出冒风寒，中潮湿之毒等。据蒙医文献及临床实践，蒙医五味甘露药浴之药有各自的功能主治等蒙药特征外，传统理论认为五味配合具有改善全身气血运行、润僵舒筋、疏通经络、调理体素、增强脏腑器官的功能、根除深伏之病毒余邪的作用等功效[9]。临床中主要治疗四肢僵直或抅挛、关节肿痛、肌肉萎缩等“黄水”疾患，治宜以燥黄水，舒筋为原则[10]。

蒙医五味甘露浴是利用水和药物的协同作用使人体的外部浸渍，以达到防治疾病目的的一种疗法，是蒙医临床外治法重要组成部分。药物的有效成分通过皮肤黏膜吸收、转运、扩散，通过对皮肤的刺激，扩张血管、促进血液循环、改善周围组织，发挥抑制和杀死病菌、调节免疫的作用。五味甘露药浴能抑制各种炎症模型所致的炎症，并能起到镇痛作用，是蒙医临床外治法中重要的疗法之一[9]。

本实验结果表明，蒙医五味甘露浴具有较好的抗炎、镇痛作用，能够明显降低CFA诱导的佐剂性关节炎大鼠下丘脑5-HT、DA、NE的含量。提示蒙医五味甘露浴通过调节AA大鼠下丘脑5-HT、DA、NE的含量，抑制炎症模型所致炎症，起到镇痛作用。

参考文献

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[9]陈英松.蒙医学-适宜技术及应用[M].呼和浩特：内蒙古大学出版社，2011，7: 93.

[10]蒙古学百科全书编辑科员会《医学卷》编辑委员会编，蒙古学百科全书-医学卷[M].呼和浩特：内蒙古人民出版社，2002：724-725.

药物研究