恶性卵巢上皮性肿瘤组织中Gab2蛋白的表达变化及意义

恶性卵巢上皮性肿瘤组织中Gab2蛋白的表达变化及意义

王哲1，刘欣2

(1潍坊医学院，山东潍坊261000；2潍坊市人民医院)

摘要：目的观察恶性卵巢上皮性肿瘤组织中Grb2协同结合蛋白2(Gab2)蛋白的表达变化，并探讨其意义。方法采用免疫组化法对恶性卵巢上皮性肿瘤组织(75例份)、良性卵巢上皮性肿瘤组织(20例份)、正常卵巢组织(20例份)中的Gab2蛋白进行检测。结果恶性卵巢上皮性肿瘤组织、良性卵巢上皮性肿瘤组织Gab2蛋白的阳性表达率分别为61%(46/75)、15%(3/20)，正常卵巢组织中3例呈弱阳性(阳性表达率为0)；组间Gab2阳性表达率相比，P<0.05；恶性卵巢上皮性肿瘤组织Gab2蛋白阳性表达率与良性卵巢上皮性肿瘤组织及正常卵巢组织相比，P均<0.05；良性卵巢上皮性肿瘤组织Gab2阳性表达率与正常卵巢组织相比，P>0.05。Gab2蛋白阳性表达与恶性卵巢上皮性肿瘤组织学分级、FIGO分期及淋巴结转移相关(P均<0.05)。结论 Gab2蛋白在恶性卵巢上皮性肿瘤组织中高表达，其高表达可能预示着该肿瘤侵袭性高、预后差、易复发。

关键词：卵巢肿瘤；恶性卵巢上皮性肿瘤；卵巢癌；Grb2协同结合蛋白2蛋白

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2015.43.023

中图分类号：R737.31文献标志码：B

收稿日期：(2015-07-11)

通信作者：刘欣

恶性卵巢上皮性肿瘤发病隐匿，发病机制尚不清楚，诊断及治疗效果不理想。在人类恶性肿瘤中，DNA的扩增是导致癌基因活化的一种普遍机制。Grb2协同结合蛋白2(Gab2)基因定位于染色体长臂11q14.1，而11q13～11q14.1段的扩增则常发生于人类的恶性肿瘤中[1]。研究[2]发现，约15%的恶性卵巢上皮性肿瘤患者存在Gab2基因组的扩增，其中浆液性囊腺癌细胞的Gab2 mRNA和多种卵巢癌细胞系的Gab2蛋白呈过度表达。本研究采用免疫组织化学PV-9000二步法对恶性卵巢上皮性肿瘤组织中的Gab2蛋白进行了检测，观察其表达变化，并探讨其意义。

1材料与方法

1.1标本来源2012～2015年潍坊市人民医院病理科保存的经病理检查确诊的恶性卵巢上皮性肿瘤组织75例份(浆液性卵巢上皮性癌30例份，黏液性卵巢上皮性癌24例份，子宫内膜样癌12例份，透明细胞癌9例份)，良性卵巢上皮性肿瘤组织20例份，正常卵巢组织20例份。75例份恶性卵巢上皮性肿瘤组织的组织学分级为G1级27例份、G2级23例份、G2级25例份，FIGO分期为Ⅰ期18例份、Ⅱ期21例份、Ⅲ期24例份、Ⅳ期12例份。

1.2受检标本Gab2蛋白检测方法采用免疫组化PV-9000二步法。兔抗人Gab2多克隆抗体购自北京博奥森生物技术有限公司，免疫组化检测试剂盒PV-9000、DAB显色试剂盒、PBS购自北京中杉金桥生物技术有限公司。具体操作参照说明书进行，用PBS液代替一抗作为阴性对照。Gab2蛋白定位于细胞质。根据阳性细胞所占百分比及着色强度分别计分。先在低倍镜下寻找细胞着色最强区域，然后选5个高倍视野(200×)，各计数100个细胞，阳性细胞<10%计0分、10%～25%计1分、26%～50%计2分、>50%计3分；细胞着色弱计1分，着色中等计2分，着色强计3分；上述两分值相加得0分为阴性(-)、1～2分为弱阳性(+)、3～4分为阳性(++)、5～6分为强阳性(+++)，++、+++判为阳性。

1.3 统计学方法采用SPSS17.0统计软件。计数资料比较用χ2检验及Fisher确切概率法。P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1恶性卵巢上皮性肿瘤组织、良性卵巢上皮性肿瘤组织、正常卵巢组织Gab2蛋白的表达比较恶性卵巢上皮性肿瘤组织、良性卵巢上皮性肿瘤组织Gab2蛋白的阳性表达率分别为61%(46/75)、15%(3/20)，正常卵巢组织中仅3例呈+(阳性表达率为0)；组间Gab2蛋白阳性表达率相比，P<0.05；恶性卵巢上皮性肿瘤组织Gab2蛋白阳性表达率与良性卵巢上皮性肿瘤组织及正常卵巢组织相比，P均<0.05；良性卵巢上皮性肿瘤组织Gab2蛋白阳性表达率与正常卵巢组织相比，P>0.05。

2.2Gab2蛋白表达与恶性卵巢上皮性肿瘤临床病理参数的关系Gab2蛋白阳性表达与恶性卵巢上皮性肿瘤组织学分级、FIGO分期及淋巴结转移相关(P均<0.05)，与病理类型无关(P>0.05)，详见表1。

表1　 Gab2蛋白表达与恶性卵巢上皮性肿瘤

3讨论

Gab2基因是一个重要的癌症相关基因。在对乳腺癌、卵巢癌、白血病和黑色素瘤的研究中，Gab2基因被鉴定为一个潜在的致癌基因[3，4]。本观察结果表明，Gab2蛋白在61.33%的恶性卵巢上皮性肿瘤组织中高表达，而在正常卵巢组织中不表达或仅呈弱表达，提示Gab2与恶性卵巢上皮性肿瘤的发生密切相关，同时支持Gab2的原癌基因特性。Gab2蛋白是一种支架协调蛋白，这类蛋白含有多个蛋白结合位点，可形成多蛋白复合体，为信号的连接和传导提供一个平台[5]。通过创伤修复和侵袭小室试验测定，Gab2蛋白高表达可以促进细胞的迁移和侵袭、下调E-钙黏蛋白的表达，与之相反，将Gab2沉默后，则抑制细胞的迁移和侵袭、上调E-钙黏蛋白的表达[2]。Gab2蛋白的作用主要通过激活PI3K信号通路来完成。Gab2/PI3K/ZEB1信号通路可以作为治疗由Gab2所诱发恶性卵巢上皮性肿瘤的一个新靶点。

Fleuren等[6]在研究Gab2与乳腺癌的关系中发现，Gab2蛋白高表达于肿瘤发展阶段的后期。本观察发现，Gab2蛋白阳性表达与恶性卵巢上皮性肿瘤组织学分级、FIGO分期及淋巴结转移相关，表明Gab2蛋白高表达可能预示着该肿瘤侵袭性高、预后差、易复发。

参考文献：

[1] Schwab M. Amplification of oncogenes in human cancer cells [J]. Bioessays, 1998,20(6):473- 479.

[2] Wang Y, Sheng Q, Spillman MA, et al. Gab2 regulates the migratory behaviors and E-cadherin expression via activation of the PI3K pathway in ovarian cancer cells[J]. Oncogene, 2012,31(20):2512-2520.

[3] Bocanegra M, Bergamaschi A, Kim YH, et al. Focal amplification and oncogene dependency of Gab2 in breast cancer [J]. Oncogene, 2010,29(5):774-779.

[4] Horst B, Gruvberger-Saal SK, Hopkins BD, et al. Gab2-mediated signaling promotes melanoma metastasis[J]. Am J Pathol, 2009,174(4):1524-1533.

[5] Sarmay G, Angyal A, Kertesz A, et al. The multiple func-tion of Grb2 associated binder (Gab) adaptor/scaffolding protein in immune cell signaling [J]. Immunol Lett, 2006,104(1-2):76-82.

[6] Fleuren ED, O′ Toole S, Millar EK, et al. Overexpression of the oncogenic signal transducer Gab2 occurs early in breast cancer development [J]. Int J Cancer, 2010,127(6):1486-1492．