急性缺血性脑卒中严重程度与血清Adropin、神经元特异性烯醇化酶、胱抑素C和血清淀粉酶样蛋白A水平的相关性分析

论著

急性缺血性脑卒中严重程度与血清Adropin、神经元特异性烯醇化酶、胱抑素C和血清淀粉酶样蛋白A水平的相关性分析

急性缺血性脑卒中严重程度与血清Adropin、神经元特异性烯醇化酶、胱抑素C和血清淀粉酶样蛋白A水平的相关性分析

曹妍刘运平王慧娟霍会永李军涛

项目来源：邯郸市科学技术研究与发展计划项目(编号：1323108087-8)

作者单位： 056008河北省邯郸市中心医院神经内科

E-mail:504422425@qq.com

【摘要】目的探讨急性缺血性脑卒中严重程度与血清Adropin、神经元特异性烯醇化酶(NES)、胱抑素C(CysC)和血清淀粉酶样蛋白A(SAA)水平的相关性。方法182例急性缺血性脑卒中患者作为研究对象，患者入院后进行美国国立卫生院神经功能缺损评分(NIHSS评分)进行病情严重程度评定，患者根据NIHSS评分分为3组，≤4分为轻度组(n=68)，5～15分为中度组(n=63)，≥16分为重度组(n=51)。选取同期健康体检者35例作为对照组。检测受检者血清Adropin、NES、CysC和SAA水平，并探讨其相关性。结果缺血性脑卒中组Adropin、NES、CysC和SAA水平与对照组比较，差异有统计学意义(P<0.01)。急性缺血性脑卒中患者中、重度组NIHSS评分、Adropin、NES、CysC和SAA水平与轻度组比较，差异有统计学意义(P<0.01)，重度组NIHSS评分、Adropin、NES、CysC和SAA水平与中度组比较，差异有统计学意义(P<0.01)。NES、CysC和SAA水平与NIHSS评分呈正相关(r值分别为0.953、0.972、0.984，P<0.05)，Adropin水平与NIHSS评分呈负相关(r=-0.953，P<0.05)。结论血清Adropin、NES、CysC和SAA与急性缺血性脑卒中患者有明显相关性，可以作为预测患者病情严重程度的试验室检测指标。

【关键词】卒中，急性；Adropin；神经元特异性烯醇化酶；胱抑素C；血清淀粉样蛋白A

doi:10.3969/j.issn.1002-7386.2015.20.035

通讯作者：李军涛，056008河北省邯郸市中心医院神经内科；

【中图分类号】R 743.3

收稿日期：(2015-04-20)

脑卒中是由于脑动脉堵塞或狭窄导致血流量减少，从而引发供血部位脑组织缺血、缺氧、组织病变的脑功能障碍性疾病，其中缺血性脑卒中较为常见。缺血性脑卒中发病与遗传、年龄、职业、季节、气候、生活方式、饮食等有密切关系，发病率为77.54/10万～142.5/10万，且男性发病率高于女性[1，2]。患者发病后易产生心理压力，多伴发抑郁、焦虑、认知障碍、活动能力受限等，给患者家庭造成了影响。对缺血性脑卒中患者病情进行恰当的评估和预测，可以对临床诊治提供有益的帮助。血清Adropin是一种与代谢性疾病、冠心病等密切相关的蛋白质[3]。神经元特异性烯醇化酶广泛存在于神经组织中，参与了糖酵解，其对中毒性脑病和病毒性脑炎患者具有良好的评估作用[4，5]。胱抑素C存在于有核细胞和体液中，是一种半胱氨酸蛋白酶抑制剂。淀粉样蛋白A是一种急性相蛋白与血浆高密度脂蛋白结合的产物，其可以反映急性炎症的程度。本研究对缺血性脑卒中患者血清Adropin、神经元特异性烯醇化酶(NES)、胱抑素C和(CysC)血清淀粉酶样蛋白A(SAA)水平进行研究，并分析其评价病情严重程度的临床意义，报告如下。

1资料与方法

1.1一般资料选取我院2012年9月至2014年8月住院治疗的急性缺血性脑卒中患者182例作为研究对象，入选患者均符合“短暂性脑缺血发作的中国专家共识2011年更新版”[6]相关标准，其中男114例，女68例；年龄55～76岁，平均年龄(65±6)岁；体重49～82 kg，平均体重(68±6)kg；病程1～3 d，平均病程(2.1±0.9)d；合并高血压72例，2型糖尿病43例，高脂血症48例；吸烟31例，饮酒25例。患者入院后进行美国国立卫生院神经功能缺损评分(NIHSS评分)进行病情严重程度评定。患者根据NIHSS评分分为3组，≤4分为轻度组(n=68)，5～15分为中度组(n=63)，≥16分为重度组(n=51)。轻度组中，男43例，女25例；年龄56～74岁，平均年龄(64±5)岁；体重49～81 kg，平均体重(67±5)kg；病程1～3 d，平均病程(2.0±0.7)d；合并高血压29例，2型糖尿病16例，高脂血症20例；吸烟12例，饮酒10例。中度组中，男42例，女21例；年龄55～75岁，平均年龄(65±5)岁；体重49～80 kg，平均体重(67±6)kg；病程1～3 d，平均病程(2.2±0.9)d；合并高血压26例，2型糖尿病15例，高脂血症18例；吸烟11例，饮酒8例。重度组中，男29例，女22例；年龄55～76岁，平均年龄(66±6)岁；体重50～82 kg，平均体重(68±6)kg；病程1～3 d，平均病程(2.1±0.8)d；合并高血压17例，2型糖尿病12例，高脂血症10例；吸烟8例，饮酒7例。选取同期健康体检者35例作为对照组，其中男24例，女11例；年龄54～77岁，平均年龄(66±6)岁。3组一般资料有可比性。本试验通过我院临床试验伦理委员会批准，受检者及其家属均知情同意，并签订协议。

1.2入选与排除标准

1.2.1入选标准:①患者经影像学检查(CT、MRI)证实为缺血性脑卒中；②发病时间在24 h内；③年龄50～80岁；④符合“短暂性脑缺血发作的中国专家共识2011年更新版”的相关标准。

1.2.2排除标准：①有家族遗传史；②脑出血、脑炎、脑部肿瘤等其他可导致非短暂性脑缺血发作的疾病；③脑血管及周围血管疾病史；④严重心、肝、肾功能不全；⑤血液、风湿性等自身免疫性疾病；⑥其他：手术或创伤史，或其他急性炎性反应。

1.3检测方法患者入院后采集空腹肘静脉血10 ml，对照组在健康体检当天采集清晨空腹肘静脉血10 ml，血液样本置于真空采血管内，静置后进行离心，2 500 r/min，离心15 min，分离上清液置于-30℃冰箱待测。

1.3.1Adropin检测：采用人Adropin蛋白(AD)Elisa试剂盒(美国USCN生产)，准备试剂，样品和标准品，加入准备好的样品和标准品，37℃反应90 min，洗板2次，加入生物素化人ANG抗体工作液，37℃反应60 min，洗板3次，加入ABC工作液，37℃反应30 min，洗板5次，加入TMB显色液，37℃反应，加入TMB终止液，30 min用酶标仪在450 nm之内读OD值，根据样品的吸光值在坐标上找出对应的浓度。

1.3.2NES检测：采用NES elisa检测试剂盒(上海盈工生物技术有限公司生产)，使用前将所有试剂充分混匀。加入稀释好后的标准品、加入待测样品50 μl于反应孔内，立即加入50 μl的生物素标记的抗体。盖上膜板，振荡混匀，37℃温育1 h，洗板3次。加入亲和链酶素-HRP 37℃温育30 min，洗板3次。每孔加入底物A、B各50 μl，轻轻振荡混匀，37℃温育10 min。加入终止液后应立即测定结果。在450 nm波长处测定各孔的OD值，根据样品的吸光值在坐标上找出对应的浓度。

1.3.3CysC检测：采用CysC ELISA试剂盒(上海努卡生物科技有限公司)，操作如下：标准品的稀释与加样；温育：用封板膜封板后置37℃温育30 min；配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用；洗涤：重复5次。加酶：每孔加入酶标试剂50 μl，空白孔除外；温育；洗涤；显色：加入显色剂震荡混匀，37℃避光显色15 min；终止：每孔加终止液50 μl，终止反应(此时蓝色立转黄色)。测定：450 nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15 min以内进行。

1.3.4SAA检测：采用SAA ELISA试剂盒(上海努卡生物科技有限公司)，操作步骤同1.3.3。

2结果

2.12组血清Adropin、NES、CysC和SAA水平比较缺血性脑卒中组Adropin、NES、CysC和SAA水平与对照组比较，差异有统计学意义(P<0.01)。见表1。

表1　2组血清Adropin、NES、CysC和SAA水平比较　 ±s

2.2缺血性脑卒中不同亚组NIHSS评分、Adropin、NES、CysC和SAA水平比较中、重度组NIHSS评分、Adropin、NES、CysC和SAA水平与轻度组比较，差异有统计学意义(P<0.01)，重度组NIHSS评分、Adropin、NES、CysC和SAA水平与中度组比较，差异有统计学意义(P<0.01)。见表2。

表2缺血性脑卒中不同亚组NIHSS评分、Adropin、NES、CysC和SAA水平比较

组别NIHSS评分(分)Adropin(μg/ml)NES(ng/ml)CysC(mg/ml)SAA(mg/ml)轻度组(n=68)2.7±0.63.21±0.1319.1±2.01.1±0.31.4±0.6中度组(n=63)9.4±2.5*1.90±0.34*27.9±3.2*1.6±0.5*1.8±0.8*重度组(n=51)19.0±3.0*#0.95±0.13*#37.1±2.9*#2.3±0.6*#2.7±1.1*#F值804.641503.84641.8695.0336.20P值<0.01<0.01<0.01<0.01<0.01

注：与轻度组比较，*P<0.01；与中度组比较，#P<0.01

2.3Adropin、NES、CysC和SAA水平与NIHSS评分的相关性分析NES、CysC和SAA水平与NIHSS评分呈正相关(r值分别为0.953、0.972、0.984，P<0.05)，Adropin水平与NIHSS评分呈负相关(r=-0.953，P<0.05)。

3讨论

急性缺血性脑卒中患者的发病率较高，占卒中发病的80%，其致残率、致死率较高，且全死因顺位中呈现明显前移趋势，成为威胁我国中老年人群的主要疾病[7]。目前影像学检查成为判定急性缺血性脑卒中的主要手段，为临床及时诊断提供了及时、有效的证据。脑损伤后各项特异性试验室检测指标也产生改变，可能随着患者病情程度的不同或病情发展呈相应变化。本研究在NIHSS评分分组基础上对Adropin、NES、CysC和SAA水平进行了相关研究。

3.1Adropin是一种分泌性蛋白，主要表达在脑部、冠状动脉内皮细胞、肝脏。研究表明，Adropin在调节血糖水平和脂肪酸代谢中发挥重要作用[8]。国内研究表明，Adropin可能参与了急性冠脉综合征的发展，起到保护心肌的作用，并可以作为预测心功能的指标[9，10]。李燕梅[11]研究发现，Adropin与缺血性脑卒中相关，可以预测患者的病情严重程度，可能与Adropin影响血管内皮功能和脂肪酸代谢有关。本研究发现，急性缺血性脑卒中患者Adropin水平与健康人群比较，下降显著(P<0.01)，并随着患者NIHSS评分升高而下降(P<0.01)，同时研究显示Adropin水平与NIHSS评分呈负相关(r=-0.953，P<0.05)。

3.2NES最初被发现其与神经内分泌肿瘤发生发展有关，在脑组织细胞中活性最高，主要参与糖酵解途径。目前研究发现，NES主要用于非小细胞肺癌、神经母细胞瘤和其他恶性肿瘤的检出。近年逐渐应用于脑组织损伤的检测中，其表达与新生儿缺氧缺血性脑病、患儿脑损伤、中毒性脑病及脑血管病的预后评估，研究发现其表达水平与脑细胞死亡数量成正相关[11-13]。本研究发现，急性缺血性脑卒中患者NES水平明显高于健康人群(P<0.01) ，随着患者NIHSS评分升高而升高(P<0.01)，并与NIHSS评分呈正相关(r=0.953，P<0.05)。

3.3CysC是半胱氨酸蛋白酶抑制剂蛋白质中的一种，既往多用于评价肾小球滤过功能。研究发现CysC是脑梗死、颈动脉粥样硬化、卒中后抑郁的相关因素，且随着病情严重呈上升趋势，这可能与Cysc参与了急性缺血性脑卒中后的炎性反应，抑制内皮细胞凋亡有关[14，15]。本研究中急性缺血性脑卒中患者CysC水平明显高于健康人群(P<0.01)，随着患者NIHSS评分升高而升高(P<0.01)，并与NIHSS评分呈正相关(r=0.972，P<0.05)。

3.4SAA主要表达在炎性疾病的急性阶段，通过抑制T细胞的活性，从而减少炎症急性期时的组织损伤[16]。国内研究发现，SAA在易损斑块形成、急性缺血性脑卒中发病中有明显表达，可以作为患者病情评估和预后判定的依据[17，18]。本研究发现，急性缺血性脑卒中患者SAA水平明显高于健康人群(P<0.01) ，随着患者NIHSS评分升高而升高(P<0.01)，并与NIHSS评分呈正相关(r=0.984，P<0.05)。

综上所述，急性缺血性脑卒中患者发病后脑部发生急性炎性反应，而Adropin、NES、CysC和SAA在参与炎性过程，并出现不同程度的表达水平改变，且与患者病情的严重程度呈现不同的相关性。因此，Adropin、NES、CysC和SAA可以作为预测患者病情严重程度的试验室检测指标。

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