山楂消脂胶囊中大黄蒽醌类成分一测多评法的建立

李影雄 李子鸿 刘东文 陈淑映 王汝上

摘要：目的 建立山楂消脂胶囊中大黄蒽醌类成分一测多评法的分析方法，并进行方法学考察。方法 以大黄素为内参照物，建立芦荟大黄素、大黄酸和大黄酚与大黄素间的相对校正因子。分别采用外标法和一测多评法测定山楂消脂胶囊中4种蒽醌类成分的含量，以验证一测多评法的合理性、可行性和可重复性。结果 一测多评法的计算结果与外标法的实测值之间无显著差异。结论 一测多评法可作为一种质量评价模式用于山楂消脂胶囊中蒽醌类成分的质量评价。

关键词：一测多评法；高效液相色谱法；山楂消脂胶囊；蒽醌；相对校正因子

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2016.01.021

中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2016）01-0089-04

Determination of Four Anthraquinones in Shanzha Xiaozhi Capsules by QAMS LI Ying-xiong1， LI Zi-hong1， LIU Dong-wen1， CHEN Shu-ying1， WANG Ru-shang2 （1. Foshan Hospital of TCM， Foshan 528000， China； 2. Guangzhou Consun Drug Research Ltd.， Guangzhou 510663， China）

Abstract： Objective To establish a method for the quantitative analysis of multi-component with a single-marker （QAMS） to determine the contents of four rhubarb anthraquinones in Shanzha Xiaozhi capsules； To conduct methodology investigation. Methods Emodin was set as the internal reference substance， and the relative correlation factors of aloe emodin， rhein， chrysophanol to emodin were calculated and evaluated. The contents of these four anthraquinones were determined by the external standard method and QAMS， respectively. Rationality， feasibility and repeatability of the QAMS method were verified by comparing the results obtained from the two different methods. Results The QAMS method and HPLC method did not show significant difference in results. Conclusion QAMS method can be used as a quality assessment model for quantity evaluation of anthraquinones in Shanzha Xiaozhi Capsules.

Key words： QAMS； HPLC； Shanzha Xiaozhi Capsules； anthraquinone； relative correlation factor

山楂消脂胶囊是佛山市中医院院内制剂（批准文号：粤药制字Z20060045），由山楂和大黄2味中药组成，具有行气化痰、消积除滞、清热凉血作用，临床主要用于高脂血症、肥胖症等患者[1]。山楂消脂胶囊可通过抗炎症反应，降低同型半胱氨酸水平，稳定冠状动脉粥样硬化斑块，从而减少非急性期冠心病痰瘀证患者急性心血管事件的发生[2-3]。大黄是该药的主要成分之一，主要含大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚、芦荟大黄素等蒽醌类成分[4]。原质量标准仅采用薄层法进行定性鉴别，为更好地有效控制山楂消脂胶囊的质量，本研究采用一测多评法[5-7]同时测定方中芦荟大黄素、大黄酸、大黄酚和大黄素4个成分的含量，为该制剂提供快速、准确、可靠的检测方法。

1 仪器与试药

Agilent1260和Agilent1200型高效液相色谱仪，DAD检测器，Agilent ChemStations数据处理软件（安捷伦科技有限公司）；Agilent Eclipse XDB-C18（250 mm×4.5 mm，5 μm）、Alltima C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）和Synergi Hydro-Rp（250 mm×4.6 mm，5 μm）色谱柱；KQ3200DB型数控超声仪（巩义市予华仪器有限责任公司）；BS224S分析天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）。

山楂消脂胶囊10批（佛山市中医院，批号分别为0431304、0431305、0431306、0431307、0431308、0431309、0431310、0431311、0431312、0431313）；对照品芦荟大黄素（批号110795-201007）、大黄酸（批号0757-200206）、大黄酚（批号110796-201319）、大黄素（批号110756-200110）均购于中国食品药品检定研究院；甲醇（色谱纯，默克公司）；超纯水（本实验室制备）；其他溶剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

Agilent Eclipse XDB-C18色谱柱（250 mm×4.5 mm，5 μm），流动相为甲醇-水（80∶20），流速1.0 mL/min，检测波长254 nm，进样量20 μL。理论板数按大黄素峰面积计算应不低于4000。色谱图见图1。

2.2 供试品溶液的制备

取山楂消脂胶囊内容物粉末约30 mg，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇25 mL，称定质量，回流提取60 min，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，过滤。精密取续滤液5 mL，置圆底烧瓶减压蒸干，加盐酸（8→100）及三氯甲烷各10 mL，加热回流60 min，放冷，置分流漏斗萃取，取有机层，酸液再用三氯甲烷萃取3次，每次10 mL，合并有机层，减压蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至10 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，过滤，取续滤液，即得。

2.3 混合对照品溶液的制备

精密称取芦荟大黄素1.01 mg、大黄酸1.03 mg、大黄素0.97 mg、大黄酚1.02 mg，置50 mL容量瓶中，加入甲醇溶解并稀释至刻度，制成浓度分别为0.020 2、0.020 6、0.019 4、0.020 4 mg/mL的混合对照品溶液作为母液，备用。分别精密吸取上述混合对照品溶液10.0、5.0、2.5、1.0、0.5 mL置50 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为线性关系考察及含量分析用混合对照品溶液。

2.4 阴性对照溶液的制备

按山楂消脂胶囊处方工艺制备缺大黄的阴性样品，按“2.2”项下方法制备，即得。

2.5 线性关系考察

分别精密吸取上述不同浓度的混合对照品溶液10 μL注入高效液相色谱仪，以测得的峰面积和被测物的进样量进行线性回归，得到各成分的回归方程及线性范围。结果表明，各对照品在各自范围内线性关系良好，见表1。

2.6 精密度试验

取同一份山楂消脂胶囊供试品溶液连续进样6次，测定峰面积，计算RSD。结果芦荟大黄素、大黄酸、大黄酚和大黄素峰面积RSD分别为0.078%、0.13%、0.16%、0.20%，表明仪器精密度良好。

2.7 重复性试验

取同一批山楂消脂胶囊内容物，精密称定，按“2.2”项下方法平行制备6份供试品溶液，测定峰面积，计算RSD。结果芦荟大黄素、大黄酸、大黄酚和大黄素峰面积的RSD分别为0.87%、0.81%、0.65%、0.73%，表明该方法的重复性良好。

2.8 稳定性试验

取同一份山楂消脂胶囊供试品溶液，分别于样品制备后的0、1、2、4、8、16、24、48 h进样，测定峰面积，计算RSD。结果芦荟大黄素、大黄酸、大黄酚和大黄素峰面积RSD分别为0.23%、0.31%、0.15%、0.46%，表明供试品溶液在48 h内稳定性良好。

2.9 加样回收率试验

取已知含量的供试品粉末15 mg，精密称定，平行6份，分别按样品含量∶对照品=1∶1的大概比例加入一定量对照品溶液，按“2.2”项下方法制备供试品溶液，测定并计算各成分的回收率及RSD。结果芦荟大黄素、大黄酸、大黄酚和大黄素的回收率分别为101.3%、100.1%、98.8%、101.6%，RSD分别为1.43%、1.67%、1.28%、1.73%，表明该方法的准确度良好，结果见表2。

2.10 校正因子计算

精密吸取“2.3”项下混合对照品溶液2、5、10、15、20、25 μL，进样分析，以大黄素为内标，分别计算芦荟大黄素、大黄酸和大黄酚对大黄素的相对校正因子（f），结果见表3。

2.11 校正因子的系统适应性考察

2.11.1 不同仪器及不同色谱柱考察 精密吸取“2.3”项下混合对照品溶液2、5、10、15、20、25 μL，进样分析，按“2.10”项下方法计算校正因子，结果见表4。结果表明，采用不同仪器和不同色谱柱，所得相对校正因子无明显差异。

2.11.2 色谱峰定位 利用内标峰的保留时间，计算出各待测成分色谱峰的相对保留时间（Rt），结果见表5。结果表明各成分相对保留时间均<3。

2.12 一测多评法与外标法含量测定比较

先采用外标法对10批山楂消脂胶囊中4种蒽醌类成分进行同步测定，再用所建立的一测多评法对其进行含量测定，并对所得结果进行比较，以验证一测多评法的准确性，结果见表6。可见，2种方法测得的结果无显著差异，相对误差均<3%，说明所建立的方法具有较好的可信度。

3 讨论

在中药多指标质量评价中，多采用指纹图谱技术来体现中药的整体性，但难以对每个成分进行定量。一测多评法的研究思路侧重于对主要成分或药效成分间的相互关系及定量关系，校正因子的运用能够实现在对照品短缺情况下多指标成分的含量测定，是中药多组分同步测定的发展方向，也是未来重点推广的技术[8]。

本研究采用二极管阵列检测器在190～490 nm波长下对混合对照品溶液和供试品溶液进行扫描。结果芦荟大黄素、大黄酸和大黄酚对大黄素在254 nm波长处均有明显吸收，因此选择254 nm作为检测波长，与2010年版《中华人民共和国国药典》保持一致。

大黄素为大黄药材中的主要成分之一，也是大黄特征性成分代表，化学性质稳定，含量适中，容易取得且价廉，故选其作为内参照物。试验考察了相对校正因子和相对保留时间在不同仪器和不同品牌色谱柱的重现性，均能很好地测定各组分色谱峰。结果显示，不同品牌的色谱柱对大黄蒽醌类成分的选择性较强，相同色谱条件下，大黄蒽醌类成分在不同色谱柱上的保留行为差异较大；相同色谱条件下，不同型号仪器对大黄蒽醌类成分影响不大。但在本色谱条件下，不同色谱柱和不同仪器均能获得满意的结果。对外标法与一测多评法进行比较，通过测定两者间的相对误差值进行评价一测多评法的准确性，结果显示，相对误差均<3%，无显著差异。

本试验建立的大黄蒽醌类成分的一测多评法可同时测定多个蒽醌类成分。选择大黄素作为内参照物，更体现该方法的简便、易操作、低成本等特点。采用一测多评法同步测定山楂消脂胶囊中芦荟大黄素、大黄酸和大黄酚对大黄素含量，可快速、全面地监控产品质量。

参考文献：

[1] 赵华云，王文会.山楂消脂胶囊对血脂代谢紊乱患者血管内皮功能的影响[J].中药材，2006，29（6）：629-631.

[2] 赵华云，王文会，陈伟强，等.山楂消脂胶囊对非急性期冠心病痰瘀证患者Hcy及Hs-CRP影响的研究[J].新中医，2011，43（10）：9-11.

[3] 王文会，赵华云，陈伟强，等.山楂消脂胶囊对非急性期冠心病痰瘀证56例临床研究[J].中药材，2012，35（1）：164-167.

[4] 许乾丽，茅向军，宋晓宁，等.HPLC法同时测定六味安消胶囊中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚的含量[J].药物分析杂志， 2010，30（10）：1841-1844.

[5] 王钰莹，冯伟红，杨菲，等.“一测多评”法测定三黄片中的大黄蒽醌类成分[J].中国中药杂志，2012，37（2）：212-217.

[6] 蔡海霞，陈君，李萍.一测多评法测定黄芪中4种异黄酮的含量[J].中国中药杂志，2010，35（20）：2712-2717.

[7] 张德培，罗源生，贺凡珍.酒大黄中5种蒽醌类成分一测多评方法的建立[J].中药材，2012，35（4）：588-590.

[8] 王智民，高慧敏，付雪涛，等.“一测多评”法中药质量评价模式方法学研究[J].中国中药杂志，2006，31（23）：1925-1928.

（收稿日期：2015-03-24）

（修回日期：2015-04-09；编辑：陈静）