革兰氏阴性细菌感染患者血清内毒素检测临床探讨*

袁平宗，汤雪彪，王小龙，李传达(内江市第二人民医院检验科，四川内江 641100)

革兰氏阴性细菌(G-)是临床上常见的致病菌，每年的院内感染80%以上属G-感染，国内外文献报道[1]，细菌内毒素(endotoxin ET)是导致患者死亡的重要原因。ET是G-菌细胞壁的主要成分，其化学成分为脂多糖(1ipopolysaccharide，LPS)，由类脂A、核心寡聚糖O及多肽侧链组成[2]。ET能够直接作用于人体，激活组织内的炎性细胞和炎症因子，导致机体发热并产生全身性炎症反应综合征(SIRS)，继而引起弥散性血管内凝血(DIC)、休克、多脏器功能衰竭等严重的病理生理症状，危及生命[3]，病原菌培养检测耗时长，且操作繁琐，灵敏度也较低，无法用于易感患者的筛查[4]，为此笔者根据革兰氏阴性菌的特点，采用内毒素动态定量比浊检测的方法对患者进行G-菌感染的筛查，探讨内毒素检测在G-菌感染诊断中的应用价值，现将结果报道如下。

1 材料与方法

1.1 研究对象 2014年1月～6月，内江市第二人民医院200例住院发热患者，其中男性131例，女性69例，年龄35～89岁，平均年龄61.5±15.3岁，分别进行内毒素检测和细菌培养。

1.2 仪器与试剂

1.2.1 仪器：细菌内毒素分析仪(珠海迪耳生物工程有限公司提供)，BD血培养仪，37℃细菌培养箱。

1.2.2 试剂：血液细菌内毒素检测试剂(珠海迪耳生物工程有限公司提供)；血培养瓶(BD公司提供)；细菌培养皿(安图公司提供)；细菌鉴定板条(法国梅里埃提供)。

1.2.3 质控品：内毒素质控标准参考值0.500 EU/ml，质控结果为0.468 EU/ml。

1.3 方法

1.3.1 内毒素检测：采集早晨空腹静脉血2 ml，按内毒素检测试剂盒说明书的要求处理标本后采用内毒素检测仪进行内毒素水平检测，操作严格按照仪器说明书进行。

1.3.2 血培养：实验室收到血标本后，将血培养瓶置全自动血培养仪中。当标本有细菌生长时，仪器发出阳性报警，抽取瓶内培养液转种血琼脂平板及麦康凯平板，置35℃二氧化碳培养箱18～24 h，同时作直接涂片革兰染色、镜检，之后挑取1～3个菌落至2.0 ml无菌生理盐水中，校正浊度至0.5麦氏比浊度，然后接种至鉴定药敏板，上机进行细菌鉴定。

1.3.3 平板培养：细菌培养标本采用无菌容器收集，将送检标本接种血平板，37℃培养18～24 h，将可疑菌落接种至血平板进行纯培养，同时做直接涂片革兰染色、镜检，之后挑取1～3个菌落至2.0 ml无菌生理盐水中，校正浊度至0.5麦氏比浊度，然后接种至鉴定药敏板，上机进行细菌鉴定。

1.4 ET结果判读 0～0.030 EU/ml，无明显内毒素血症；0.030～0.100 EU/ml，临床观察期；0.100～1.000 EU/ml，内毒素血症；>1.000 EU/ml，重度内毒素血症。

2 结果

2.1 200例标本内毒素和细菌培养结果比较 送检的200份标本中，ET≥0.030 0 EU/ml共140例(占70.0%)，细菌培养阳性42例(占18.7%)，其中G-菌24例(占10.7%)，G+菌15例(占6.7%)；在24例G-菌感染患者内毒素检测结果均>0.115 EU/ml，ET水平明显升高，15例G+菌感染患者内毒素检测结果0.008～0.068 0 EU/ml，只有2例>0.030 EU/ml，结果见表1。

表1 200例内毒素和细菌培养结果比较(EU/ml)

注：*革兰阴性菌组与革兰阳性菌组比较，差异有统计学意义t=28.23，P<0.05。

2．2 患者随访结果分析 培养确诊革兰阴性菌感染患者24例，经抗菌药物治疗1周后，内毒素定量检测结果显示，21例患者内毒素水平：0.023～0.068 EU/ml，与治疗前检测结果比较差异有统计学意义(t=8.13，P<0.05)。

3 讨论

临床上革兰氏阴性菌引起的败血症常常并发内毒素血症、休克肺、DIC、心脏抑制及口腔疾病等，死亡率为20%～30%[4]。有研究[5]表明内毒素是一系列连锁反应及全身炎症反应的重要触发剂、介导革兰氏阴性菌脓毒症的重要启动因子。通过调节蛋白或结合受体诱导宿主细胞因子的合成和释放，从而激发机体一系列病理、生理改变，危害相当大[6]。内毒素是临床医生诊断和监测病人革兰氏阴性菌感染的重要参考指标[7，8]。

本研究对200份细菌培养检测结果与内毒素水平检测结果进行了比较，结果显示：G-菌感染患者血液内毒素水平显著高于革兰氏阳性菌、真菌感染患者；内毒素定量检测结果与培养检测结果的一致性较好。24例G-感染患者经过1周抗生素治疗后，21例G-菌感染患者的ET水平较治疗前显著下降，且下降幅度与患者的临床症状缓解程度相一致。因此，ET水平检测用于G-菌感染患者的疗效评价有一定的价值[9]。研究还发现，200份标本中，115份标本培养结果为阴性，而内毒素为阳性，一方面是培养为假阴性：感染的细菌难以培养；感染的细菌量不够；未能正确掌握采样时机和频率；培养基质量和培养环境不符合要求；由于患者在抽血培养前已使用大量广谱抗生素，血液中细菌已经变异或者死亡；内毒素血症≠细菌感染(肝病或肠源性内毒素也可引起内毒素增高)[10]；另一方面内毒素为假阳性：操作环境及操作过程中污染；人血红蛋白、球蛋白、抗凝血酶Ⅲ；某些抗生素如β-酰胺内酯类、氨基糖苷类和喹诺酮类等患者均可导致内毒素假阳性结果，在实际工作中应注意鉴别。

测定内毒素可以作为细菌培养的重要补充，弥补血培养(G-菌)阳性率低的缺陷；内毒素水平检测具有检测速度更快、操作更简便的优势，一般标本送检数小时后即可获得检测结果，指导临床对细菌感染病人尽快合理使用抗生素提供理论依据。

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