多指标综合评分法优选补正续骨颗粒最佳提取工艺

2016-01-09田原,樊晖,关雪峰等

长春中医药大学学报 2015年6期

田原，樊晖，关雪峰*，张锡玮，孙科峰

(辽宁中医药大学附属医院，沈阳 110032)

摘要：目的优选补正续骨颗粒的提取工艺。方法采用L9(34)正交试验法，以出膏率为考察指标，优选最佳水提取工艺，以川续断皂苷Ⅵ与柚皮苷总含量及出膏率综合评分为评价指标，优选最佳乙醇提取工艺。结果最佳水提取工艺为加6倍量水，提取2次，每次提取1 h。最佳乙醇提取工艺为加6倍量60%乙醇，提取3次，每次2 h。结论优选的提工艺稳定可行，适用于补正续骨颗粒的工业化生产。

关键词：补正续骨颗粒；川续断皂苷Ⅵ；柚皮苷；正交试验

DOI:10.13463/j.cnki.cczyy.2015.06.014

中图分类号：R284.2文献标志码：A

文章编号：2095-6258(2015)06-1134-03

基金项目：辽宁省科学技术计划项目(2013226012)；辽宁中医药大学“杏林学者青蓝工程”。

作者简介：田原( 1969-) ，女，副主任药师，主要从事中药质量分析与新药开发。

收稿日期:(2015-02-13)

*通信作者：关雪峰, 电话-(024)31961111，电子信箱-lnzygxf@163.com

Optimization of extraction technology for Buzheng Xugu granules by multi-index comprehensive evaluation method

TIAN Yuan，FAN Hui，GUAN Xuefeng*，ZHANG Xiwei, SUN Kefeng

(Affiliated Hospital of Liaoning University of Traditional Chinese Medicine,Shenyang 110032,China)

Abstract：ObjectiveTo optimize extraction technology of Buzheng Xugu granules. MethodsOrthogonal experimental design was adopted, dry extract rate as evaluation index, to optimize water extraction technology, contents of asperosaponin；naringin and dry extract as evaluation index，to optimize ethanol extraction technology. ResultsOptimal water extraction technology was extracted 2 times with 6 times the amount of water for 1 h per time; optimal ethanol extraction technology was extracted 3 times with 6 times the amount of 60% ethanol for 2 h per time. ConclusionThis optimized extraction technology was stable, feasible, suitable for Buzheng Xugu Granules production.

Keywords：Buzheng Xugu granules; asperosaponin; naringin; orthogonal experimental design

补正续骨丸为辽宁中医药大学附属医院院内制剂，由制何首乌、菟丝子、鹿茸、续断、合欢花、骨碎补等8味药组成，具有壮腰补肾、强壮筋骨等功效，主要用于治疗慢性挫伤，腰肌劳损等疗效显著。本课题拟将补正续骨丸开发成更加便于携带和服用的补正续骨颗粒。根据方中药味所含有效成分的理化性质，方中枸杞子采用水煎煮法进行提取；鹿茸采用粉碎后原粉加入的方法，制何首乌等其他药味采用乙醇提取的方法，本文采用L9(34)正交试验法，以出膏率及有效成分含量相结合为考察指标，优选最佳水提取工艺和醇提取工艺。

1材料

1100型高效液相色谱仪(安捷伦科技有限公司)，数显恒温水浴锅(上海跃进医疗器械有限公司)，AE-240型电子分析天平(梅特勒-托利多公司)，HN101-3A型电热鼓风干燥箱(南通沪南科学仪器有限公司)。鹿茸等药材购自河北安国市神禾中药饮片有限责任公司，经辽宁中医药大学翟延君教授鉴定，均符合2010年版《中国药典》相关项下要求；川续断皂苷Ⅵ对照品(上海源叶生物科技有限公司，批号20130126，纯度HPLC≥98%)，柚皮苷(中国药品生物制品检定所，批号110722-200309)，乙腈为色谱纯，水为娃哈哈纯净水，其他试剂均为分析纯。

2方法与结果

2．1枸杞子水提取工艺考察[1]2．1．1正交试验设计以出膏率为考察指标，考察加水量，煎煮时间，煎煮次数对提取结果的影响，采用四因素三水平L9(34) 正交试验法优选最佳水提取工艺，因素与水平见表1。

表1　水提取正交试验因素水平表

2．1．2干膏率的测定称取枸杞子药材共9分，每分40 g，分别按各因素水平煎煮，滤过，合并提取液，浓缩，置干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，于105 ℃干燥至恒重，精密称定质量，计算干膏率。

2．1．3试验结果正交试验结果见表2，表3。

表2　正交设计表及试验结果

表3　方差分析表

由表2、表3结果可知，各因素均不是显著性因素，由直观分析，C因素即提取次数对结果影响最大，提取1次与提取2次差别较大，但提取2次与提取3次差别很小，而A、B因素各水平差别均较小，因此，结合大生产实际，为节约成本，以A1B1C2作为最佳提取工艺，即加水6倍量，提取2次，每次提取1 h。

2．1．4验证实验取药材40 g，共3分，按以上工艺操作，测定出膏率。结果平均出膏率分别为26．29%，RSD 1．8%。表明水提取工艺稳定，重现性好。

2．2制何首乌等醇提取工艺考察[2-3]

2．2．1正交试验设计以川续断皂苷Ⅵ 、柚皮苷[4]总含量及干膏率综合评分作为考察指标，乙醇浓度，加醇量，提取次数，提取时间为影响因素，采用四因素三水平L9(34) 正交试验法，优选最佳提取工艺。因素水平表见表4。

表4　乙醇提取正交试验因素水平表

2．2．2川续断皂苷Ⅵ含量测定

2．2．2．1色谱条件采用Agilent TC-C18色谱柱(4．6 mm×250 mm，5 μm)，乙腈-水(31∶69)为流动相；检测波长为212 nm；流速1．0 mL/min，柱温25 ℃。

2．2．2．2对照品溶液制备取川续断皂苷Ⅵ对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含有对照品0．5 mg的溶液。

2．2．2．3供试品溶液制备取研细干膏0．5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，超声30 min,滤过,取滤液备用。

2．2．2．4测定法分别精密吸取对照品与供试品溶液各10 μL，注入高效液相色谱仪，测定，计算含量。

2．2．2．5方法学考察经线性范围考察，川续断皂苷Ⅵ进样量在2．078～12．468 μg与峰面积呈良好线性关系，回归方程Y=156．99X-12．09(r=0．999 9)；精密度试验结果RSD 0．9%，表明仪器精密度良好；8 h稳定性试验结果RSD 0．8%，表明供试品溶液在8 h内稳定性较好；重复性试验结果RSD 1．1%，表明本方法重复性较好；平均加样回收率97．82%，RSD 2．8%。

2．2．3柚皮苷含量测定

2．2．3．1色谱条件采用Agilent TC-C18色谱柱(4．6 mm×250 mm，5 μm)，甲醇-水(38∶62)为流动相；检测波长为283 nm；流速1．0 mL/min，柱温25 ℃。

2．2．3．2对照品溶液制备取柚皮苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含有对照品0．05 mg的溶液。

2．2．3．3供试品溶液制备取研细干膏1．0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，超声30 min，滤过，取滤液备用。

2．2．3．4测定法分别精密吸取对照品与供试品溶液各20 μL,注入高效液相色谱仪，测定，计算含量。

2．2．3．5方法学考察柚皮苷进样量在0．27～1．62 μg与峰面积呈良好线性关系，线性回归方程Y=2 325X+60．1(r=0．999 7)；精密度试验结果RSD 1．2%，表明精密度良好；稳定性试验结果RSD 1．0%，表明供试品溶液在8 h内稳定；重复性试验结果RSD 2．1%，表明本方法重复性较好；平均加样回收率98．01%，RSD 2．3%。

2．2．4试验结果按处方比例取药材，每分136 g，共9分，按照因素水平表和L9(34)正交表进行试验。将每分提取液浓缩，70 ℃减压干燥，得干膏。以川续断皂苷Ⅵ及柚皮苷总含量及干膏率作为考察指标，进行综合评价(含量和干膏率的权重系数分别为0．7、0．3)优选最佳提取工艺。综合评分方差分析结果见表5。

注: #P<0．05

由表5中结果可知，A、D因素为显著性因素，各因素主次为D>A>C>B，由直观分析可知，最佳工艺为A2B1C2D3，即加6倍量60%乙醇，提取3次，每次2 h。

2．2．5验证试验按处方比例称取处方量药材，共3分，按最佳提取工艺进行验证试验，结果川续断皂苷Ⅵ及柚皮苷的平均提取量分别为17．66、3．01 mg/g，RSD分别为2．1%、2．8%，平均干膏率27．64%，RSD为1．7%，表明该提取工艺稳定可行。

3结论

川续断皂苷Ⅵ为方中续断指标性成分，柚皮苷为骨碎补指标性成分，二者与补正续骨颗粒功能主治密切相关，因此采用二者总含量为考察指标。曾尝试采用HPLC同时测定川续断皂苷Ⅵ[5-10]和柚皮苷[11-15]，结果分离度不好，阴性液有干扰，故分别测定。

参考文献：

[1]孙琦,书洋,孟令军,等.正交实验优选参杞补气颗粒中枸杞子、香菇及刺五加提取工艺[J].长春中医药大学学报,2014,30(6):1006-1008.

[2]高军,刘富春.正交试验优选积实中柚皮苷的提取工艺[J]. 中国药房,2014,25(35):3291-3293.

[3]谷丹丹,邓洪,覃瑶,等. 正交设计优化川续断中川续断皂苷Ⅵ的提取工艺[J]. 时珍国医国药,2013,24(7):1587-1588.

[4]国家药典委员会.中华人民共和国药典: 1部[M]. 北京: 中国医药科技出版社,2010:239,309.

[5]樊媛洁,翟永松,王满元.不同炮制方法对续断饮片中川续断皂苷Ⅵ,Ⅹ含量的影响[J].中国实验方剂学杂志,2013,19(17):22-24.

[6]章彩霞,金灵华.续断壮骨胶囊中总皂苷和川续断皂苷VI 含量测定[J].中国执业药师,2014,11(2/3):8-11.