张家口地区鸡白痢沙门氏菌的分离鉴定及药敏试验
2016-01-08郑志新
张家口地区鸡白痢沙门氏菌的分离鉴定及药敏试验
郑 志 新
(张家口市动物卫生监督所，河北 张家口 075000)
摘要：目的筛选对张家口地区鸡白痢沙门氏菌的敏感药物，更好地防治鸡白痢。方法对张家口地区8个养殖场35只疑似为鸡白痢沙门氏菌性腹泻病鸡的60份病料进行病原菌分离鉴定及药物敏感性试验。结果分离的18株鸡白痢沙门氏菌对庆大霉素、阿米卡星、氟苯尼考敏感，对阿莫西林、链霉素、环丙沙星、复方新诺明不敏感，对头孢曲松、恩诺沙星、痢特灵中度敏感。结论在鸡白痢的防治中，可以选用庆大霉素、阿米卡星、氟苯尼考等药物。
关键词：张家口地区；鸡白痢沙门氏菌；分离鉴定；药敏试验
中图分类号：S 852.61
DOI：10.3969/j.issn.1673-1492.2015.03.008
基金项目：河北省科技厅指令性项目阶段成果(14227411D)
作者简介：王剑和(1961-),女，河北张北人，河北北方学院图书馆高级农艺师，主要研究方向为果树栽培与管理。
Separation Identification ofPullorosisSalmonellaand Drug Susceptibility Test in Zhangjiakou Region
ZHENG Zhi-xin
(Animal Health Supervision Instiute of Zhangjiakou,Zhangjiakou,Hebei 075000,China)
Abstract:ObjectiveTo screen sensitive drug against the Zhangjiakou region Pullorosis salmonella for better prevention and treatment of pullorosis in chickens.Methods60 samples of pullorosis salmonella form 35 suspected chicken in 8 farms of Zhangjiakou region were conducted separation identification and drug sensitivity test.ResultsThe 18 separated strains of salmonella pullorosis were sensitive to gentamycin,amikacin and fluorine benzene nicol;not sensitive to amoxicillin,streptomycin,ciprofloxacin,and compound new Ming;moderately sensitive to ceftriaxone,uhand furazolidone.ConclusionIn the prevention and treatment of pullorosis,gentamicin,amikacin and,fluorine benzene nicol can be effective.
Key words:Zhangjiakou region;Pullorosissalmonella;separation identification;drug sensitive test
鸡白痢是由鸡白痢沙门氏菌引起的一种常见的多发性传染病[1],该病一年四季均可发生，环境污秽、潮湿、圈舍拥挤、粪便堆积、饲料和饮水供应不良、长期运输中气候恶劣、疲劳和过饱、内寄生虫和病毒感染等均可诱发本病[2-3]，各种年龄鸡只都可发生。雏鸡发病表现急性败血经过，以发热、拉灰白色或粘性液状粪便为特征；成年鸡白痢沙门氏菌发病以损害生殖系统为主的慢性或隐性感染为特征[4]。
随着中国养禽业的发展，鸡白痢成为危害养禽业的严重传染病之一。对于该病主要是通过加强饲养管理并使用抗菌药物来预防和控制，但兽医临床大剂量盲目使用抗菌药，不但助长了耐药菌的产生，给兽医临床治疗带来困难，而且还会造成肉食品中药物残留，影响人们的健康[5]。
为了更好地控制鸡白痢，本研究对2014年2月至5月张家口地区鸡场分离的菌株进行分离鉴定及药物敏感性试验，旨在了解张家口地区鸡白痢沙门氏菌分布情况及药物敏感性，为兽医临床合理用药提供科学依据，为防控鸡白痢沙门氏菌提供有效方法。
1材料与方法
1.1 材料
1.1.1病料选取张家口地区8个养殖户症状比较明显的疑似鸡白痢沙门氏菌病死鸡45只进行剖检，无菌采取病鸡心、肝脏、脾脏、十二指肠等60份，用一次性塑料自封袋包装，贴上标签，标明该病料的来源及时间，及时送检，并对该病死鸡所在的养殖场进行详细检查和记录。
1.1.2培养基、染色液等营养肉汤培养基(批号：130206)、伊红美兰琼脂培养基(批号：120915)均由杭州天和生物试剂有限公司生产。SS琼脂培养基(批号：130104)、麦康凯琼脂培养基(批号：20130216)、营养琼脂培养基(批号：20120302)均由北京博奥生物技术有限责任公司生产。葡萄糖(批号：20130128)由天津市科密欧化学试剂有限公司生产。西蒙氏枸橼酸盐琼脂(批号：130429)、三糖铁琼脂(TSI)(批号：130511)、细菌微量生化管(葡萄糖、乳糖、麦芽糖、蔗糖、甘露糖、尿素)(批号：20130726)均由杭州天和微生物试剂有限公司生产。革兰氏染色液由河北北方学院微生物实验室提供。沙门氏菌A-F多价血清购自兰州生物制品研究所有限责任公司。
1.1.3药敏纸片阿莫西林(10 μg/片)、头孢曲松(30 μg/片)、庆大霉素(10 μg/片)、阿米卡星(30 μg/片)、链霉素(10 μg/片)、恩诺沙星(5 μg/片)、环丙沙星(5 μg/片)、复方新诺明(23.75 μg/片)、氟苯尼考(30 μg/片)、痢特灵(300 μg/片)均由杭州天和生物试剂有限公司生产。
1.2 方法
1.2.1细菌分离培养将病料样品划线接种于营养琼脂、麦康凯琼脂、SS琼脂平板、伊红美兰琼脂平板，37 ℃培养24 h。
1.2.2染色镜检用细菌培养物进行涂片，经革兰氏染色镜检，观察细菌的形态及染色特征。
1.2.3生化试验从分离纯化的细菌中钓菌，分别接种于葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露糖、蔗糖、尿素、甘露醇等生化管中，置于37 ℃培养箱培养2～5 d，每24 h观察一次结果并记录，并取纯化菌分别做MR试验、吲哚试验、V-P试验、枸橼酸盐利用试验、H2S试验等，置37 ℃培养箱培养2～5 d观察其反应并详细记录。
1.2.4血清型鉴定取疑似鸡白痢沙门氏菌抗原1滴滴在干净的玻璃板上，然后再加入等量标准阳性A-E型多价血清进行玻板凝集反应，同时做生理盐水和阳性抗原对照。
1.2.5药敏试验将细菌纯培养物接种于普通培养基平皿，用无菌镊子将药敏纸片(阿莫西林、头孢曲松、恩诺沙星、痢特灵、环丙沙星、阿米卡星、庆大霉素、复方新诺明、氟苯尼考、链霉素试纸)贴于平皿上，纸片与纸片中心距离不小于24 mm，纸片与平皿边缘的距离不少于15 mm。贴好纸片的平皿倒放在37 ℃恒温箱中，培养24 h后观察结果，按照购买药敏片附赠的说明书进行高敏、中敏、耐药的标准判定。
2结果
2.1 分离培养结果
从张家口部分地区采集的病料中，分离出126株细菌。其中分离出的细菌经37 ℃培养24 h，分别选择在：①营养琼脂平板上生长贫瘠的菌落；②在SS琼脂平板上无色半透明、中等大小、表面光滑的菌落的菌株；③在麦康凯琼脂平板上为无色菌落的菌株进行染色镜检。
2.2 细菌形态及染色特性
鸡白痢沙门氏菌为革兰氏阴性短杆菌，两端钝圆，多散在，少数成对或短链状排列。经分离鉴定及染色镜检，33株初步确定为鸡白痢沙门氏菌。
2.3 生化实验结果
对33株疑似鸡白痢沙门氏菌进行12种生化试验鉴定，根据其生化特性(表1)，其中有18株为鸡白痢沙门氏菌。
表1 鸡白痢沙门氏菌的生化特性
2.4 血清型鉴定结果
通过玻板凝集试验，确定该地区18株鸡白痢沙门氏菌的血清型为D型。
2.5 药敏试验结果
用纸片扩散法检测了18株鸡白痢沙门氏菌分离株对10种抗菌药物的敏感性，结果见表2。
表2 18株鸡白痢沙门氏菌对10种药物的敏感性(%)
3讨论与结论
本实验对所采病料进行病原菌的分离培养、染色镜检、生化试验[6-9]，鉴定结果表明：该地区病鸡是由鸡白痢沙门氏菌所引起的，且该地区鸡白痢沙门氏菌的血清型为D型。
药敏试验结果显示：该菌株对庆大霉素、阿米卡星和氟苯尼考敏感，可为临床治疗该病的选择用药；此外对阿莫西林、链霉素、复方新诺明不敏感，由此可见，该菌株对上述药物已产生严重耐药性。查阅有关文献[10]，分离病原菌由于不同地方、不同时间、不同鸡群，故细菌对各种药物产生的耐药性不同，原因是长期使用这些抗生素而导致耐药性的产生。建议在使用药物治疗时，应先做药敏试验，制定有效用药方案。
参考文献：
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[责任编辑：刘守义英文编辑：刘彦哲]
