脂联素对结肠癌细胞株HT－29的抑制作用研究

孙 浩 谭志军 孔 营

（1．济宁市第一人民医院 山东济宁 272011；2．天津市第一中心医院普外科 天津 300192）

近几年的研究发现，脂联素（Adiponectin，ADP）与肥胖相关性肿瘤的密切相关。目前国内外学者对脂联素与结肠癌之间的关系进行了研究，大多数学者认为脂联素与结肠癌有明显的相关性。本实验通过人脂联素重组体对结肠癌细胞HT－29生长的体外细胞学研究进一步证实脂联素对结肠癌的抑制作用。

1 材料与方法

1．1 MTT法检测实验：选取对数生长期人结肠癌HT－29细胞常规消化后，调整细胞密度1×105／ml，接种于96孔板，每孔细胞数为2×104，培养过夜。加入不同浓度的人脂联素重组体，终体积为200μl，继续培养72小时。实验分为空白对照组（10%PBS）和4个浓度梯度（2．5、5、10、15μg／ml）脂联素重组体实验组。培养结束前4h，每孔加入20μl浓度为5mg／ml的MTT溶液，继续培养4h。以2000rpm离心10分钟，弃上清，每孔加入100μl的DMSO，震荡10min，酶标仪于492nm测定光密度值（D492）。每次每种条件做3个平行孔，重复3次。计算细胞增殖抑制率（细胞增殖抑制率=（对照组D492一实验组D492）／对照组D492×100%）。

1．2 细胞划痕法实验：将人结肠癌HT－29细胞常规消化后，以106个细胞／孔、10%FBS／DMEM种植于六孔板内过夜培养。次日用100μl微量移液头在六孔板内垂直划痕，培养液冲洗2次后加入含有不同浓度人脂联素重组体的无血清培养基培养48h。设计浓度为5、10、15、20μg／ml。倒置相差显微镜下网格目镜观察，随机选择5个100倍视野下大网格内计算迁移的细胞总数。

2 结 果

2．1 脂联素重组体对HT－29细胞增殖的影响，见表1。

表1 各浓度脂联素对HT－29细胞的抑制率

2．2 脂联素重组体对HT－29细胞迁移的影响，见表2。

表2 各浓度脂联素对HT－29细胞迁移的影响（培养24h后）

3 讨 论

在结肠癌的研究中，大多数病例对照研究认为血清脂联素水平与结肠癌的发生呈负相关［1－2］。

本研究中我们用MTT法检测脂联素重组体对结肠癌细胞增殖活性的影响，观察到随着脂联素浓度的升高D492逐渐下降，即抑制效应随浓度升高而增大；细胞划痕法实验检测到加入脂联素的培养基中HT－29细胞增殖明显受到抑制，且随浓度的增大细胞数逐渐减少。

综上所述，本实验证实了脂联素可抑制结肠癌细胞HT－29的体外增殖和侵袭，其具体机制有待进一步研究。

［1］ Gialamas SP，Petridou ET，Tseleni－Balafouta S，et a1．Serum adiponectin levels and tissue expression of adiponectin receptors are associated with risk，stage，and grade of colorectal cancer［J］．Metabolism．2011；60（11）：1530－8．

［2］ Otake S，Takeda H，Fujishima S，et al．Decreased levels of plasma adiponectin associated with increased risk of colorectal cancer．World J Gastroenterol．2010，14；16（10）：1252－1257．