三种复方中药制剂对鸭大肠杆菌的体外抑菌效果研究

2015-12-31刘哲通

四川畜牧兽医 2015年1期

刘哲通

（四川省荣县动物疫病预防控制中心，四川荣县 643100）

养禽业中禽大肠杆菌引起的疾病往往非常严重，临床上多数采用抗菌药物治疗，而用抗菌药物治疗容易产生耐药性，在治疗过程中需要加大药量或变换药物品种，这样既增加了治疗成本，又使得药物残留的问题更加突出。因此，使用抗菌谱广、残留小、毒性低且对病原菌不易产生耐药性的中药来治疗大肠杆菌病已是大势所趋。本试验经过临床用药筛选出了三种中药复方制剂，并应用于鸭致病性大肠杆菌的体外抑菌试验中，观察其抑菌效果，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试验药物。加味三黄汤：黄连30g、黄芩30g、大黄 20 g、穿心莲 30 g、苦参 20 g、夏枯草 20 g、龙胆20 g、连翘 20 g、二花 15 g、白头翁 15 g、车前子 15 g、甘草15g；白头苦参汤：白头翁10g、苦参10 g、金银花 10g、忍冬藤 5g、泽泻 3g、车前草 3g、川黄连 2g、槟榔2g。郁金散：郁金6g、黄连10g、黄柏10g、枝子10g、赤芍 8g、大黄 5g、诃子（另包）10g、黄芩 10g。

以上三种方剂均购于荣县泰康大药房，经鉴定符合药典标准。

1.1.2 菌种。从确诊了患大肠杆菌病的病死鸭组织中分离培养而得。

1.1.3 试剂。麦康凯琼脂，中国药品生物制品检定所，批号：980301；营养琼脂，上海市医学化验所试剂厂，批号：980905；氯化钠，重庆东方试剂厂，批号：980320；牛肉浸膏，成都市牛奶供应管理部，批号：7802144；蛋白胨，成都华西制品厂，批号：921203。

1.1.4 试验器材。托盘天平，蒸汽消毒器，电热鼓风干燥箱，离心机，培养箱，无霜型冰箱，洁净工作台，游标卡尺，电炉，布氏漏斗，牛津杯，试管。

1.2 试验前准备

1.2.1 药物制备。将复方制剂置于电磁锅中，加适量蒸馏水浸泡30min，后煎煮，沸后用文火煮30min，滤出煎液，共煎3次，合并滤液，浓缩至生药含量为1g/mL；1000r/min离心10min，取上清液调pH值为7.5；高压灭菌后置4℃冰箱中保存备用，一周内用完。

1.2.2 肉汤培养基制法。牛肉膏3.0g、蛋白胨10.0g、氯化钠5.0g、蒸馏水1 000 mL，调节pH值为7.5，煮沸10min，冷却过滤，15磅压力下灭菌15min备用。

1.2.3 肉汤琼脂培养基制法。肉汤培养基100mL，琼脂2.0g，在肉汤培养基高压灭菌前，加入琼脂煮沸，再高压消毒。

1.2.4 菌液制备。将分离的鸭大肠杆菌菌种接种到肉汤培养基上，培养18～24h备用。

1.3 体外抑菌试验方法

1.3.1 双碟的制备。培养基底层：将灭菌肉汤琼脂培养基溶化后取15mL倒入灭菌平皿内。培养基菌层：将15mL菌液与100mL冷却至45℃的肉汤琼脂培养基混匀，然后分别在每一平皿内加入10 mL，均匀摊在具有底层培养基的平皿内。

1.3.2 待培养基凝固后，在每碟中均匀立放4个牛津杯，用陶瓦盖覆盖。

图1 体外抑菌测定（管碟法）

1.3.3 用移液器分别取200μL中药药液于4个牛津杯中（如图1所示），置 37℃培养箱中培养24h。然后用游标卡尺测量抑菌环直径，判断抗菌药物抑菌作用的强弱。为了使试验结果一目了然，结果判定参照《中药制用经验录》[1]中收载的“中草药的抑菌作用实验”一文提供的方法，即将所测得的抑菌环直径毫米数变成用“-、+、++、+++”号表示。抑菌环直径在8.0 mm或以下，记“-”号，为不敏感；抑菌环直径在8.0～13.0 mm，记“+”号，为低度敏感；抑菌环直径在13.1～19.0mm，记“++”号，为中度敏感；抑菌环直径在19.1～25.0mm，记“+++”号，为高度敏感。