淮安市布鲁氏菌病血清学调查分析

孙 浩，陈树霞，江浩军，王光明

（1.淮安市动物疫病预防控制中心江苏淮安223001；2.淮安市淮阴区动物疫病预防控制中心江苏淮安223300）

淮安市布鲁氏菌病血清学调查分析

孙 浩1，陈树霞1，江浩军1，王光明2

（1.淮安市动物疫病预防控制中心江苏淮安223001；2.淮安市淮阴区动物疫病预防控制中心江苏淮安223300）

为了解淮安市奶牛布鲁氏菌病发病和流行情况，笔者于2010-2014年对淮安市奶牛布鲁氏菌病进行血清学检测，2010年2 852份样品检出45份阳性，阳性率1.58%；2011年1 919份样品检出85份阳性，阳性率4.43%；2012年1 875份样品检出39份阳性，阳性率2.08%；2013年1 333份样品检出18份阳性，阳性率1.35%；2014年2 156份样品检出17份阳阳性率0.79%。数据表明淮安市奶牛布鲁氏菌病阳性率呈逐年下降趋势。

布鲁氏菌病；血清学检测；防控措施。

布鲁氏菌病（Bruellosis）是由布鲁氏杆菌引起的急、慢性人畜共患病，简称“布病”。该病主要侵害生殖器官，引起胎膜发炎、流产、不育、睾丸炎等，给畜牧业生产和人类健康带来严重危害，被列为二类动物疫病[1]。在家畜中，牛、羊、猪最常发生。母畜比公畜、成年畜比幼年畜发病多。目前，包括美国等国家在内的170多个国家和地区有人畜布鲁氏菌病的存在和流行，我国受布鲁氏菌病威胁的人口约有3.5亿[2]。但也有国家成功根除了奶牛布病，如澳大利亚，其成功经验是：定期检测、淘汰阳性牛、对畜群的流动实行严格的限制措施以确保健康牛群远离布病[3]。

淮安市为奶牛养殖大市，每天向光明、卫岗、伊利等大中型乳品生产加工企业提供生鲜乳，把好乳品质量源头关尤为重要。为全面掌握全市奶牛布鲁氏菌病发病和流行情况，2010-2014年笔者使用虎红平板凝集试验（RBPT）和试管凝集试验(SAT)对全市奶牛进行布鲁氏菌病血清学调查。

1 材料与方法

1.1 被检血清

2010-2014年，共采集4个县（区）的83个规模养殖场、75个散养户奶牛血清样品10 135份，其中2010年为2 852份、2011年为1 919份、2012年为1 875份、2013年为1 333份、2014年为2 156份。所有被采样的奶牛均未注射布鲁氏菌病疫苗。

1.2 诊断试剂

布氏杆菌病虎红平板凝集试验抗原、布氏杆菌病试管凝集试验抗原、阴性、阳性血清。诊断试剂均由青岛易邦生物工程有限公司生产。

1.3 检测方法

1.3.1 RBPT用移液器吸取30 μL抗原加在洁净的玻璃板上，然后加入30 μL待检血清，用移液器吸头混匀抗原和被检血清，在室温条件下，4 min内观察结果，同时作阴、阳性血清对照[4]。

1.3.2 SAT抗原稀释SAT抗原作1∶20稀释使用。比浊对照管配制1∶20稀释抗原，用等量稀释液稀释(1∶40稀释)后，再用稀释液配制成含1∶40抗原0%、25%、50%、75%、100%的悬液。血清稀释：被检血清及阴、阳性对照血清都作25、50、100、200倍稀释。抗原和血清各加0.5 mL混合，置37±l℃温箱反应24 h，取出与比浊对照管比较读取结果[4]。

被检血清先用RBPT进行初筛，对筛选出可疑或阳性样品进行SAT确诊。

1.4 结果判断

1.4.1 RBPT在阴性对照不出现凝集且阳性对照出现凝集时，试验成立。被检血清在试4 min内出现凝集现象判为阳性，如没有凝集现象则判为阴性。1.4.2 SAT阴性血清对照和抗原对照不出现凝集（－），阳性血清的凝集价达到其标准效价±1个滴度，则试验成立。在1∶100血清稀释度出现“++”以上（含“++”）的凝集现象时，被检血清判定为阳性，否则，判定为阴性。

2 结果

2010年2 852份样品检出45份阳性，阳性率1.58%；2011年1 919份样品检出85份阳性，阳性率4.43%；2012年1 875份样品检出39份阳性，阳性率2.08%；2013年1 333份样品检出18份阳性，阳性率1.35%；2014年2 156份样品检出17份阳性，阳性率0.79%（详见表1、表2）。

表1 2010-2014年布鲁氏菌病检测情况汇总表

表2 虎红平板凝集试验（RBPT）与试管凝集试验（SAT）对比

3 讨论

1）不同年份的RBPT和SAT阳性吻合率差别较大，比顾冬花[5]检测的阳性吻合率平均低14.03%。RBPT主要用于大批量样品的阳性初筛，由于其特异性不高，受试验温度和凝集时间相对较短的影响，不易准确判定结果[6]。SAT特异性和敏感性高，检测较准确，判定上更精确，RBPT初筛阳性的，可以用SAT确诊。

2）2011年检测出的布鲁氏菌病阳性牛数量是其他年份的2～4倍，笔者通过流行病学调查发现，2011年的阳性牛主要集中在淮阴区某奶牛养殖场，该养殖场在2008-2010年间均未检测出布鲁氏菌病阳性牛，2011年出现的阳性牛主要是外源性输入，可能是外来车辆及人员工具进出消毒不严，场内人员外出活动频繁，场区消毒措施不到位，环境卫生差，导致外界病菌传入，使用的冻精也有可能带菌，使得该场检出布病阳性率较高。

3）从检测数据看，布鲁氏菌病阳性牛数量在2011年达到最大，以后逐年呈下降趋势，这与淮安市采取有效的布鲁氏菌病防控措施分不开。

4）在每年常规检测中也遇到一些问题，如有些养殖户疫病防控意识淡薄，拒绝布鲁氏菌病检测，而监督执法部门没有强硬的处置措施，导致奶牛检测工作存在真空。当前物流运输业发达，有些养殖户从外地购买奶牛时不向动物防疫部门申报检疫，私自引进，造成动物疫病的跨区域传播流行。在RBPT初筛后待确诊的一个月时间内，对养殖户的RBPT阳性牛监管存在空白，有些养殖户会擅自将初筛阳性牛转卖给其他养殖户，另外，养殖户没有专门的隔离区域，初检阳性牛与健康牛混养，导致布鲁氏菌病在牛群间相互感染和传播，无法彻底根除。

4 防控措施

1）实行定期检测，净化疫病。每年春秋季各进行1次血清学检测，确诊阳性牛及时扑杀淘汰。对免疫过布鲁氏菌病疫苗的动物，免疫18个月后检测确诊阳性的，要予以扑杀，并进行无害化处理。每年配种前，对种公畜进行检测，经检测合格后允许配种。

2）坚持自繁自养，避免外来病菌入侵。鼓励养殖场（户）自繁自养奶牛，不轻易从外地调入奶牛和犊牛。养殖场（户）新购进奶牛后，需隔离观察1个月，经检疫合格后，方可混群饲养。养殖场内饲养人员、技术人员相对固定，场外人员不得随意进入场区。

3）加强消毒灭源，消除疫情隐患。加强对场区内牛舍、器具、车辆及人员的定期消毒，及时清扫奶牛排泄物，对流产胎儿、胎衣及垫料应深埋或烧毁。定期更换门口消毒液。外来车辆、工具和人员需经过严格消毒后进入。

4）强化动物监督执法力度。严格对初筛阳性牛的管控，杜绝阳性牛被贩卖或私自宰杀。严格按照《布鲁氏菌病防治技术规范》，对确诊阳性牛全部扑杀，并采取焚烧或深埋等无害化处理。规范生鲜奶收购程序，严禁收购未取得奶牛布鲁氏菌病和结核病检测合格证的养殖场（户）的生鲜奶。

5）加大宣传培训，提高防范意识。广泛宣传布鲁氏菌病的防控技术知识，使养殖场（户）了解布鲁氏菌病的危害性，掌握该病的预防和控制具体措施，逐步在养殖场内净化布鲁氏菌病。■（编辑：赵晓松）

[1] 刘耀兴《乡村兽医实用诊疗手册》[M].南京:江苏科学技术出版社,2013:357.

[2] 吐尔洪,努尔,谷文喜,等.布鲁菌病研究进展[J].动物医学进展, 2007,28(7):82-87.

[3] 罗伯特·勒韩著《澳大利亚根除牛布氏菌病和结核病纪实》[M].北京:农业部兽医局/中国动物卫生与流行病学中心,1996:4.

[4] 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局.GB/T 18646— 2002动物布鲁氏菌病诊断技术[S].北京,中国标准出版社,2002.

[5] 顾冬花.牛布鲁氏菌病血清学检测报告[J].山东畜牧兽医,2013, (4):58-59.

[6] 李智红,王芳蕊,韩克元,等.布鲁氏菌病研究进展[J].上海畜牧兽医通讯,2013(5):14-15.