姬松茸多糖对糖尿病模型大鼠免疫功能的影响

姬松茸多糖对糖尿病模型大鼠免疫功能的影响

黄清松李红枝郑敏

(广东药学院基础学院，广东广州510006)

摘要〔〕目的观察姬松茸多糖对糖尿病大鼠免疫功能的影响。方法2月龄雌性SD大鼠随机分为，对照组，模型组，姬松茸多糖低、高剂量组，每组10只。采用链脲佐菌素(STZ)诱发大鼠糖尿病模型，观察姬松茸多糖对糖尿病大鼠体重，血糖水平，血CD4+、CD8+T细胞计数，血清肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6水平以及胸腺、脾指数的影响。结果与模型组比较，姬松茸多糖组大鼠体质量，血CD4+、CD8+T细胞计数，胸腺、脾指数明显升高(P<0.05或P<0.01)；血糖，血清TNF-α、IL-6水平明显下降(P<0.05或P<0.01)。结论姬松茸多糖可干预糖尿病大鼠多项免疫指标，发挥辅助治疗作用。

关键词〔〕姬松茸多糖；糖尿病；肿瘤坏死因子；白细胞介素-6；胸腺指数；脾指数

中图分类号〔〕R965.1〔

第一作者：黄清松(1966-)，男，硕士，高级实验师，主要从事细胞生物学研究。

姬松茸为蘑菇科蘑菇属真菌，富含蛋白质和糖类。姬松茸多糖是从姬松茸子实体中提取的有效活性成分，具有降血糖、提高免疫力、抗病毒、抗肿瘤等作用〔1～3〕。有关姬松茸药用价值的研究多集中在抗肿瘤方面，其对糖尿病的相关研究报道较少。本研究通过对大鼠体质量，血糖水平，血CD4+、CD8+T细胞计数，血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平以及胸腺、脾指数的测定，探讨姬松茸多糖对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠免疫功能的影响。

1材料与方法

1.1动物药品及试剂2月龄，SPF级SD雌性大鼠，体重200～250 g，由广东省医学实验动物中心提供，生产许可证号：SCXK(粤)2008-0002。姬松茸多糖由本研究组自制：取姬松茸原菌体1 000 g,加约5倍蒸馏水浸泡12 h,文火煮沸1 h,收集煎液,再加等体积的蒸馏水文火煮沸30 min,收集煎液。合并2次煎液,静置12 h,过滤,浓缩至一定体积后,加入80%乙醇沉淀12 h,离心，收集醇沉物。醇沉物于恒温干燥箱(75℃～80℃)至相对干燥,得姬松茸多糖粗制品,每克浸膏相当于生药3.0 g。链脲佐菌素(STZ)为Sigma公司产品；血糖试剂盒为上海微晶生物技术有限公司产品；TNF-α、IL-6由北京东亚免疫技术研究所提供；红细胞裂解液、小鼠抗大鼠CD4+R-PE、小鼠抗大鼠CD8+R-PE为Caltag公司产品。

1.2方法

1.2.1糖尿病模型制备〔4〕禁食12 h后，按剂量60 mg/kg一次性腹腔注射经微孔滤膜过滤灭菌STZ液(用0.1 mol/L柠檬酸钠缓冲液稀释至浓度1%)。72 h后连续3次随机检测血糖，凡血糖≥16.7 mmol/L即为成功糖尿病模型。

1.2.2分组与给药取正常大鼠10只为对照组，取造模成功大鼠30只，随机分为：模型组，姬松茸多糖低、高剂量组，每组10只。姬松茸多糖低、高剂量组分别灌胃(ig)相应剂量姬松茸多糖溶液，对照组和模型组ig相应容量生理盐水，连续8 w。

1.2.3体重、空腹血糖(FPG)、TNF-α、IL-6的测定在末次给药前12 h动物禁食，给药2 h后，称质量，眼球后静脉丛毛细管取血，血液静置后3 500 r/min离心10 min，取上清备用。按试剂盒说明书检测血糖、TNF-α和IL-6水平。

1.2.4外周血CD4+、CD8+T细胞测定按1.2.3方法取血,肝素抗凝,测定管加荧光标记的抗体50 μl，后加入肝素抗凝全血50 μl,混匀，室温孵育15 min，加入50μL溶血剂，PBS洗涤；0.5～1 ml PBS重悬细胞,上机进行检测。

1.2.5脾脏、胸腺指数测定取血后脱颈椎处死大鼠，无菌条件下剖取胸腺和脾脏，剪去筋膜及脂肪，滤纸吸干后称质量，计算：脾指数=脾质量(mg)/体质量(g)；胸腺指数=胸腺质量(mg)/体质量(g)。

2结果

2.1一般情况对照组大鼠体重明显增加、精神状况良好、反应灵敏、毛发光泽顺滑、生长发育正常。模型组和姬松茸多糖组大鼠全部成模，均出现“三多一少”(即多饮、多尿、多食及消瘦)、弓背蛇体、精神萎磨、反应迟缓、毛竖而晦暗等症状，与对照组比较，差异显著(P<0.05)。

2.2大鼠体重和FPG水平与对照组比较，模型组大鼠体重显著下降(P<0.01)，FPG水平则显著升高(P<0.01)。给予姬松茸多糖后，与模型组比较，姬松茸多糖高剂量组大鼠体重明显升高(P<0.05)，FPG水平明显下降(P<0.05或P<0.01)。见表1。

表1　各组大鼠体重和

与模型组比较:1)P<0.05，2)P<0.01，下表同

2.3大鼠外周血CD4+、CD8+T细胞计数和CD4+/CD8+值与正常组比较，模型组大鼠血CD4+、CD8+T细胞计数均显著下降(P<0.01)，CD4+/CD8+值明显下降(P<0.05)。给予姬松茸多糖后，与模型组比较，姬松茸多糖低、高剂量组大鼠血CD4+、CD8+T细胞计数均明显提高(P<0.05或P<0.01)，CD4+/CD8+值有升高趋势，但无显著差异(P>0.05)。见表2。

表2　各组大鼠外周血CD4 +、CD8 +T细胞计数和

2.4大鼠血清TNF-α、IL-6水平与对照组比较，模型组大鼠血清TNF-α、IL-6水平均显著升高(P<0.01)。给予姬松茸多糖后，与模型组比较，姬松茸多糖低、高剂量组大鼠血清TNF-α、IL-6水平均明显下降(P<0.05或P<0.01)。见表3。

表3　各组大鼠血清TNF-α、IL-6水平

2.5大鼠胸腺指数和脾指数与正常组比较，模型组大鼠胸腺、脾指数均显著降低(P<0.01)。给予姬松茸多糖后，与模型组比较，姬松茸多糖低、高剂量组大鼠胸腺、脾指数均明显升高(P<0.05或P<0.01)。见表4。

表4　各组大鼠胸腺指数和脾指数比较

3讨论

糖尿病是一组以慢性糖、脂肪和蛋白质的代谢紊乱为特征的内分泌疾病，是由于胰岛素分泌和(或)作用缺陷所引起。大量研究显示,免疫功能紊乱是糖尿病患者病程加速和病情加重的重要原因〔5〕。

T淋巴细胞是机体最重要的免疫细胞群,按功能分为辅助性T细胞、细胞毒性T细胞和抑制性T细胞，根据细胞表面分子CD分为CD4+和CD8+两大亚群。CD4+代表辅助性T细胞，CD8+代表抑制和细胞毒性T细胞，CD4+/CD8+细胞比值处于动态平衡,维持机体正常免疫应答。糖尿病时，机体免疫力下降,细胞免疫功能也明显下降,易致感染。有研究证实,糖尿病合并感染组比较糖尿病未合并感染组，血清中CD4+、CD8+、CD4+/CD8+明显下降〔6〕。

IL-6、TNF-α等是炎症介导及免疫损伤的重要调节因子，对糖尿病的发生起着重要作用。IL-6是一种多功能的生物性细胞因子,可作用于内皮细胞，通过合成黏附分子和化学诱导分子，提高白细胞杀伤吞噬能力。糖尿病时，IL-6过度激活和扩增T细胞、B细胞，促进细胞凋亡而破坏胰岛R细胞。TNF-α主要由单核细胞和内皮细胞产生,正常情况下，低水平的TNF-α可调节炎症反应及促进组织修复，起到生长因子的作用。然而,糖尿病时异常增高的TNF-α可直接作用于胰岛细胞、微血管等，造成组织损伤。

本研究提示姬松茸多糖可干预糖尿病大鼠多项免疫指标，为其辅助治疗糖尿病提供了理论依据。

4参考文献

1Mizuno M，Minato K，Ito H，etal.Antitumor polysaccharide from the mycelium of liquid cultured agaricus blazei murill〔J〕.Biochem Mol Biol Int,1999;47(4)：707-14.

2李师鹏，安利国．真菌多糖免疫活性的研究进展〔J〕.菌物系统，2001;20(4)：581-7.

3刘常金，谷文英.巴西蘑菇胞外多糖的分离及抗肿瘤活性研究〔J〕.食品与发酵工业，2001;27(11)：27-9.

4陈秋，夏永鹏，邱宗荫.2型糖尿病大鼠模型的建立与评价〔J〕.天津医药，2006;6(3):33-5.

5姚旌旗,舒思洁,赵骥,等.脂糖舒对糖尿病大鼠血液T淋巴细胞亚群和免疫器官系数的影响〔J〕.山东医药,2006;46(7)：9-11.

6方荣,李红.2型糖尿病伴感染患者T淋巴细胞亚群和自然杀伤细胞的测定及意义〔J〕.浙江医学,2003;25(5)：263-5.

〔2012-10-10修回〕

(编辑赵慧玲/曹梦园)