胃腺癌中Kruppel样因子4、5和增殖细胞核抗原表达

胃腺癌中Kruppel样因子4、5和增殖细胞核抗原表达

韩笑魏琳琳1

(辽宁医学院附属第一医院肿瘤科，辽宁锦州121001)

摘要〔〕目的应用免疫组化方法检测胃腺癌术后组织中Kruppel样因子(KLF)4、5和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达特征。方法51例经病理医师确诊的胃腺癌术后组织作为观察组，40例距肿物边缘>5 cm的非肿瘤性胃黏膜组织作为对照组。两组KLF4、KLF5和PCNA蛋白表达应用免疫组化检测。结果两组KLF4、KLF5和PCNA表达差别有显著性。观察组中KLF4、KLF5和PCNA的阳性率均与浸润深度相关，KLF4的阳性率与脉管内瘤栓相关，KLF5的阳性率与肿瘤的最大径、脉管瘤栓相关，PCNA的阳性率与肿瘤的最大径相关。线性相关分析显示观察组中KLF5和PCNA具有正相关性，其他指标间未见明显相关性。结论胃腺癌术后组织中KLF4、KLF5和PCNA异常表达，三者异常表达对肿瘤性的进展过程起一定的作用。KLF5可能对细胞增殖有影响。

关键词〔〕胃腺癌；Kruppel样因子4；Kruppel样因子5；增殖细胞核抗原；免疫组化

中图分类号〔〕R735〔文献标识码〕A〔

1辽宁医学院附属第一医院妇产科

第一作者：韩笑(1982-)，女，主治医师，主要从事肿瘤学研究。

胃腺癌的发生因素较多，不仅与饮食、幽门螺杆菌相关，还与调节肿瘤分化和增殖的基因相关〔1〕。Kruppel样因子(KLF)4、5是KLF家族中重要的蛋白，其不仅对调节细胞转录有重要作用，还对细胞增殖有重要影响〔2，3〕。增殖细胞核抗原(PCNA)是临床和病理标记增殖中应用的重要蛋白，表达于细胞核，可以反映细胞增殖的活性〔4，5〕。本研究关注胃腺癌中KLF4和KLF5的表达特征及二者对PCNA增殖指数的作用。

1资料与方法

1.1一般资料胃腺癌手术后留取的临床资料和蜡块组织作为观察组，共51例，均重新制备切片并由病理医生复审，纳入符合WHO肿瘤病理学和遗传学中的诊断标准。男30例，女21例；年龄51～84岁，平均(66.5±6.5)岁。高分化10例，中分化19例，低分化22例。40例距肿物边缘>5 cm的非肿瘤性胃黏膜组织作为对照组。男20例，女20例；年龄53～80岁，平均(67.6±5.8)岁，两组一般资料无明显差异。

1.2KLF4、KLF5和PCNA表达的检测KLF4、KLF5和PCNA抗体均为浓缩液，由病理技师按不同比例稀释后进行预实验，选择最理想的浓度用在正式实验中。免疫组化方法应用SP法，操作严格按说明书进行，做好质量控制。

1.3KLF4、KLF5和PCNA结果的判读标准KLF4、KLF5和PCNA均以细胞核中染色棕黄色颗粒的细胞为阳性细胞。选择肿瘤细胞或上皮细胞密集的区域10个(400倍)，计数阳性细胞的百分率，取平均值。按通用标准计算，即<10%为阴性，以≥10%为阳性。

1.4统计学方法采用SAS6.12软件进行χ2检验或线性相关分析。

2结果

2.1两组中KLF4、KLF5和PCNA阳性率比较观察组与对照组KLF4〔10例(19.61%) vs 34例(85.00%)〕、KLF5〔36例(70.59%)vs1例(2.50%)〕和PCNA〔40例(78.43%)vs1例(2.5%)〕阳性率差别有统计学意义(均P<0.000 1)。

2.2KLF4、KLF5和PCNA在观察组不同分组中的比较观察组中KLF4、KLF5和PCNA阳性率均与浸润深度相关，KLF4阳性率与脉管瘤栓相关，KLF5阳性率与肿瘤最大径、脉管内瘤栓相关，PCNA阳性率与肿瘤最大径相关。见表1。

表1KLF4、KLF5和PCNA阳性表达在观察组不同分组中的比较〔n(%)〕

临床特征nKLF4KLF5PCNA最大径<5cm227(31.82)11(50.00)14(63.64)≥5cm293(10.34)25(86.21)26(89.66)χ2值3.65947.89915.0063P值0.05580.00490.0253浸润深度未及浆膜248(33.33)12(50.00)15(62.50)浆膜及以外272(7.41)24(88.89)25(92.59)χ2值5.41799.25566.8016P值0.01990.00230.0091脉管内瘤栓无3810(26.32)24(63.16)28(73.68)有130(0)12(92.31)12(92.31)χ2值4.25553.96441.9859P值0.03910.04650.1588分化程度高+中298(27.59)21(72.41)22(75.86)低222(9.09)15(68.18)18(81.82)χ2值2.71470.10790.2623P值0.09940.74250.6085

2.3观察组中KLF4、KLF5和PCNA的相关性显示KLF5和PCNA具有正相关性(r=0.47，P=0.046 0)，其他指标间未见明显相关性(P>0.05)。

3讨论

胃腺癌最多见的肉眼形态是溃疡型，也可形成实性结节或隆起型，切面常灰白色。病变进展时浸润性生长明显，可以在浆膜面周围形成结节。肿瘤细胞体积大，核染色深，呈明显的浸润性生长〔6〕。KLF家族是存在于真核生物中的基因，可以对肿瘤细胞增生和恶性转化起一定作用〔7，8〕。KLF4和KLF5是家族中主要被学者关注的蛋白，尤其是肿瘤形成的研究中〔9，10〕。张志平等〔11〕认为KLF4可以通过激活或抑制目的基因来调节转录，KLF4在人结肠腺癌中表达下调，在癌变组织中的表达也下降，但是KLF4在口腔上皮肿瘤和乳腺肿瘤中常表达过度，且弥漫分布，因此KLF4可能具有较强的组织特异性〔12〕。KLF5的作用可能与KLF4的表达不完全一致〔13〕，KLF5被学者认为是促进肿瘤进展的基因，其主要表现为对肿瘤细胞增殖调节的过程中〔14，15〕。王文韬等〔16〕通过对结肠癌中KLF5的表达进行免疫组化的检测，认为肿瘤中KLF5表达升高，其具有原癌基因的作用，KLF5高表达可以有效促进肿瘤进展。同时作者也发现KLF5与CyclinD1、P53存在正相关性，认为KLF5在发挥作用过程中，可以通过上调CyclinD1、P53的表达而有效促进肿瘤细胞增殖。

本实验结果显示胃腺癌术后组织中KLF4低表达、KLF5和PCNA高表达，提示三者异常表达是肿瘤性改变中的重要因素。Yoon等〔17〕研究显示KLF4可以通过与细胞周期蛋白B1启动子中的相关元件结合发挥抑制肿瘤的转录功能，进而对维持细胞周期的检查点有一定影响。本文结果显示KLF4、KLF5和PCNA三种蛋白可以参与肿瘤性的侵袭过程，使肿瘤细胞向周围组织生长的能力增强，对周围组织的破坏能力增强。KLF4可能参与肿瘤的脉管形成及侵袭脉管的过程中。KLF5是促进肿瘤生长的重要蛋白，具有原癌基因的作用，即KLF5高表达时肿瘤生长速度增加，肿瘤细胞的增生活跃，肿瘤进展加速。PCNA是直接影响肿瘤生长的重要蛋白。PCNA是标记增殖指数的特异性蛋白。肿瘤失控性增生和分化障碍是形成肿瘤异型增殖的基础，而PCNA可能参与上述过程中。本实验未发现KLF4、KLF5和PCNA蛋白与分化程度的关系，但是KLF4可能与胃腺癌的分化程度可能会有关联，后续研究可以增大样本来观察KLF4与分化的关系。本文提示KLF5和PCNA具有明显的协同作用，也提示KLF5高表达时对PCNA阳性的细胞具有明确的促进作用，共同促进肿瘤的形成和进展进程〔18，19〕。

4参考文献

1金星林，许东哲，金文昊，等.胃癌临床病理特征与预后多因素回归分析〔J〕.中国实用外科杂志，2005；25(7)：407-8.

2Chen Z，Couble ML，Mouterfi N，etal.Spatial and temporal expression of KLF4 and KLF5 during murine tooth development〔J〕.Arch Oral Biol，2009；54(5)：403-11.

3Ge F，Chen W，Yang R，etal.WWOX suppresses KLF5 expression and breast cancer cell growth〔J〕.Chin J Cancer Res，2014；26(5)：511-6.

4Wit N，Buoninfante OA，van den Berk PC，etal.Roles of PCNA ubiquitination and TLS polymerases κ and η in the bypass of methyl methanesulfonate-induced DNA damage〔J〕.Nucleic Acids Res，2015；43(1)：282-94.

5Li N，Deng W，Ma J，etal.Prognostic evaluation of Nanog，Oct4，Sox2，PCNA，Ki67 and E-cadherin expression in gastric cancer〔J〕.Med Oncol，2015；32(1)：433-4.

6司岑，杨艳丽，李华，等.1138例胃癌临床病理特征分析〔J〕.宁夏医学杂志，2014；36(11)：982-3.

7Li X，Zhang B，Wu Q，etal.Interruption of KLF5 acetylation converts its function from tumor suppressor to tumor promoter in prostate cancer cells〔J〕.Int J Cancer，2015；136(3)：536-46.

8吕昌新，丁宇，李良，等.乳腺癌组织 KLF5 表达临床意义分析〔J〕.中华肿瘤防治杂志，2013；11(2)：17-8.

9崔乃鹏，闫伟涛，刘彩云，等.KLF4 和 KLF5 在乳腺浸润性导管癌中的表达及意义〔J〕.临床肿瘤学杂志，2013；18(12)：1087-90.

10杨培雄，李琳业，吴占庆，等.直肠癌术后组织中KLF-4、KLF-6和caveolin-1的表达及意义〔J〕.中国老年学杂志，2014；34(24)：7032-4.

11张志平，王洲，刘相燕，等.KLF4和SPARC在非小细胞肺癌中的表达及其相关性研究〔J〕.中国肺癌杂志，2012；15(12)：720-3.

12Rageul J，Mottier S，Jarry A，etal.KLF4-dependent，PPARgamma-induced expression of GPA33 in colon cancer cell lines〔J〕.Int J Cancer，2009；125(12)：2802-9.

13李建国，鲍光琼，杨雪峰，等.Claudin-4和KLF-5在胃癌组织中的表达及其临床意义〔J〕.诊断病理学杂志，2014；21(2)：94-7.

14朱伦锋，刘泰荣，陈华，等.锌指蛋白转录因子 5 在肾癌组织中的表达及其临床意义〔J〕.实用心脑肺血管病杂志，2014；11(4)：18-9.

15Liu N，Li H，Li S，etal.The Fbw7/human CDC4 tumor suppressor targets proproliferative factor KLF5 for ubiquitination and degradation through multiple phosphodegron motifs〔J〕.J Biol Chem，2010；285(24)：18858-67.

16王文韬，高凯军.结肠癌中KLF5表达与CyclinD1和PCNA及P53关系及意义〔J〕.河北医药，2013；35(11)：1620-2.

17Yoon HS，Yang VW.Requirement of Kruppel-like factor 4 in preventing entry into mitosis following DNA damage〔J〕.J Biol Chem，2004；279(6)：5035-41.

18Shi HJ，Wen JK，Miao SB，etal.KLF5 and hhLIM cooperatively promote proliferation of vascular smooth muscle cells〔J〕.Mol Cell Biochem，2012；367(1-2)：185-94.

19Suzuki T，Sawaki D，Aizawa K，etal.Kruppel-like factor 5 shows proliferation-specific roles in vascular remodeling，direct stimulation of cell growth，and inhibition of apoptosis〔J〕.J Biol Chem，2009；284(14)：9549-57.

〔2015-10-10修回〕

(编辑苑云杰)