Er：YAG激光根管预备联合Prontosan凝胶根管封药对根管粪肠球菌的杀灭效果

Er：YAG激光根管预备联合Prontosan凝胶根管封药对根管粪肠球菌的杀灭效果

耿涛

(邢台医学高等专科学校第二附属医院,河北邢台054000)

关键词〔〕粪肠球菌；Er：YAG激光；Prontosan凝胶；清除率

中图分类号〔〕R4〔文献标识码〕A〔

第一作者：耿涛(1980-)，女 ，硕士，主治医师，主要从事口腔内科学、口腔修复学方面的研究。

根管治疗是牙髓病和根尖周病国际上最常用的有效治疗方法〔1〕。然而，临床上很多患者完善根管充填后出现再感染，其主要原因与残留在根管内的细菌相关，主要是粪肠球菌〔2〕。Er：YAG激光是一种新近出现的牙体治疗激光，在根管感染控制方面具有很好的临床疗效〔3〕。本课题使用Er：YAG激光照射根管壁后，使用Prontosan凝胶作为根管消毒剂，与传统根管预备方法及目前临床常用根管消毒药物，如甲醛甲酚合剂(FC)、樟脑酚(CP)及氢氧化钙制剂(氢氧化钙丙二醇糊剂)行常规对照，以期对Er：YAG激光和Prontosan凝胶的抗粪肠球菌性能作出初步评价，为临床应用提供参考。

1资料与方法

1.1实验仪器与试剂仪器：Er：YAG激光治疗机、Protaper镍钛根备仪、CO2培养箱、天平、S-3000N型扫描电子显微镜、冷冻干燥机。试剂：0.9%生理盐水、3%双氧水、牛心脑浸液、粪肠球菌(ATCC29212)、FC、CP、氢氧化钙制剂(氢氧化钙丙二醇糊剂)、Prontosan凝胶。

1.2标本来源随机选取该院2012年9月至2014年1月口腔门诊新鲜拔除的单根管前磨牙120颗，均满足根管与根尖孔发育完全、无充填体或近髓龋坏、牙根无裂痕、就诊前未做过牙髓相关治疗〔4〕。随后去除牙根周围的牙结石和软组织附着、截除牙冠与拔除牙髓，使用K锉(ISO10到15号)精确测量工作长度(WL，本试验定义距根尖孔1mm的距离)，按照厂家的指导使用Protaper预备所有根管到F2，用0.9%生理盐水和3%双氧水交替冲洗根管。离体牙根样本置于牛心脑浸液(BMI肉汤)的试管中121℃高温高压灭菌20min静置5%CO2培养箱(37℃)内，24 h后观察体重指数(BMI)肉汤无混浊，以确定灭菌完全。

1.3实验方法

1.3.1粪肠球菌感染模型建立〔5〕复苏粪肠球菌并接种于BMI肉汤中，制备为0.5mol/L的标准粪肠球菌液，将已灭菌牙根置于粪肠球菌液5%CO2培养箱(37℃)内培养24 h，每3 d换1次新鲜菌液，4 w后随机抽取6个样本进行扫描电镜观察，确认粪肠球菌感染模型是否成功建立。

1.3.2实验分组及处理方案按照随机数字法将成功建立粪肠球菌感染模型的120粒牙根分为A组(Er：YAG激光+FC)、B组(Er：YAG激光+CP)、C组〔Er：YAG激光+氢氧化钙制剂(氢氧化钙丙二醇糊剂)〕、D(Er：YAG激光+Prontosan凝胶)、E组(生理盐水)五组，每组牙根24粒，从五组中随机选取12粒作为相应的阴性对照，剩余的12粒分别采取对应组的相应处理。最后将所有牙根的培养皿置于5%CO2培养箱(37℃)内培养1w。

1.3.3细菌检测25#H型锉去除根管内消毒剂，无菌生理盐水冲洗，无菌吸潮纸尖干燥后，用G钻均匀磨取不同深度(0～100、100～200、200～300μm)根管内层牙本质粉末约4mg，用灭菌笔帽状物接住，用分析天平称重4mg置于含有5mlBMI肉汤的灭菌蓝盖小瓶内，5%CO2培养箱(37℃)内培养72 h，分别观察所有灭菌蓝盖小瓶内菌落的形成情况并用S-3000N型扫描电子显微镜进行细菌计数，计算各段根管部位的粪肠球菌清除率，清除率=1-N/M×100%(N为处理后粪肠球菌数，M为基线粪肠球菌数)〔6〕。

2结果

2.1实验总体情况120粒离体牙根样本经高温高压灭菌后，所有BMI肉汤均无混浊，达到灭菌完全；接种粪肠球菌4w后，所有牙根样本的根管壁表面均可看到粪肠球菌在根管壁表面呈生物膜样结构附着，有些样本还可看到部分粪肠球菌侵入至小管深层，以上现象均提示粪肠球菌感染根管模型建立成功；将根管内层牙本质粉末置于含有5mlBMI肉汤的灭菌蓝盖小瓶内培养72h后，所有灭菌蓝盖小瓶内可见边缘整齐、表面光滑湿润的灰白色菌落，菌落量各异。

2.2各组粪肠球菌清除效果分析见表1。各组粪肠球菌清除率随牙本质深度的增加而逐渐下降，A～D组不同牙本质深度的粪肠球菌清除率均高于E组；对同一深度而言，牙本质深度0～100μm，A～D组的粪肠球菌清除率差异无显著意义(P>0.05)；牙本质深度100～200μm与200～300μm中，D组的粪肠球菌清除率显著高于其他组(P<0.05)。

表1　各组粪肠球菌清除率比较 ±s)

3讨论

根管治疗术是目前治疗根尖周病和牙髓病的首选方法，在临床上受到广泛应用。治疗成功的首要条件就是根管内感染源的控制，根管内细菌有效地清除可显著提高治疗的成功率〔7，8〕。研究发现，粪肠球菌是根管内感染和再发感染的主要致病菌，根管治疗失败的患牙内粪肠球菌的检出率高达47%～77%〔9，10〕。粪肠球菌是革兰阳性兼性厌氧菌，为肠球菌属的代表种菌，菌体呈圆形或椭圆形，直径0.5～1.01μm，大多数成双或短链状排列，能在10℃或45℃pH9.6或含6.5%NaCl肉汤培养基中生长，并能耐65℃ 30min，是健康人体的上呼吸道、口腔或肠道的常驻菌，也是重要的条件致病菌。粪肠球菌引起根管感染的机制有：(1)粪肠球菌具有强渗透能力，可侵入牙本质小管内部；(2)粪肠球菌可单独或与其他细菌混合形成生物膜，有效抵抗宿主免疫反应和外界因素的渗入；(3)粪肠球菌可通过表面蛋白质如Esp、Ace、聚集物质等黏附于牙本质或其他细菌，同时还可释放透明质酸、酶明胶酶等毒力因子，引起白细胞的聚集及释放炎症因子，造成根尖周围组织及牙髓组织的破坏和炎症反应〔11〕。鉴于粪肠球菌的特性以及药物的细胞毒性、免疫原性等副作用，目前的机械和化学治疗已不能完全彻底清除根管内的粪肠球菌〔12〕。

激光医学在近年来牙髓病治疗中的应用广泛，已被广泛应用于治疗的各个方面。Er：YAG(波长2.94μm)激光是一种新近出现的牙体治疗激光，其原理为通过水吸收其能量致使细菌细胞内的水分蒸发，细胞壁破裂而达到杀灭细菌的作用。另外在其冲洗根管过程中产生的大量气泡可推动液体的流动而加快反应，提高冲洗药物的渗透性而达到良好的杀菌效果〔13〕。Er：YAG激光照射根管壁可以熔化根管内玷污层，封闭牙本质根管口，同时可以去除部分有机基质，导致牙本质渗透性降低，杀灭根尖部位的细菌，增加牙根的抗吸收能力。国内外的研究表明，Er：YAG激光兼有CO2激光和Nd：YAG激光的优点，其切除效率高于CO2激光，而损伤程度大大小于后两种激光，并有一定的抑菌作用〔8，13〕。Prontosan凝胶是浸润伤口覆盖层以湿润和清洁伤口，防止生物膜的形成以抑制细菌滋生，具有很强的收敛、抑菌作用〔14〕。采用Er：YAG激光根管预备联合Prontosan凝胶根管封药具有更强的抑菌作用。

本研究说明牙本质深度是药物灭菌效果的一个重要影响因素，这和之前的研究结果相似〔15〕。

综上所述，Er：YAG激光根管预备联合Prontosan凝胶根管封药能有效清除根管各深度的粪肠球菌，相比FC、CP及氢氧化钙制剂(氢氧化钙丙二醇糊剂)效果更优。

4参考文献

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〔2013-12-03修回〕

(编辑袁左鸣)