慢性乙型肝炎患者外周血T细胞亚群的表达及意义

慢性乙型肝炎患者外周血T细胞亚群的表达及意义

覃羽华岑光旅1王俊利许桂丹唐任光

(右江民族医学院附属医院，广西百色533000)

关键词〔〕慢性乙型肝炎；T细胞亚群；细胞免疫功能

中图分类号〔〕R512.6+2〔

基金项目：百色市科学研究与技术开发计划项目(No.1005004)

通讯作者：唐任光(1966-)，男，教授，硕士生导师，主要从事临床医学检验和临床输血检验研究。

1百色市人民医院

第一作者：覃羽华(1985-)，女，副主任技师，主要从事细胞免疫学研究。

慢性乙型肝炎(CHB)可发展为肝硬化，肝衰竭以及肝细胞癌等。机体在感染乙型肝炎病毒(HBV)后，通过诱发机体的免疫反应间接损伤肝细胞，病毒的控制和清除有赖于机体的免疫系统，因此疾病发生、发展与宿主的细胞免疫功能状态密切相关〔1〕。桂西地区是乙型肝炎的高发地区，对其进行相应的研究具有重要的意义。为此，本文检测该地区105例CHB患者T细胞亚群的表达规律，以了解患者机体的细胞免疫功能变化及与临床的关系。

1对象与方法

1.1对象①CHB组：选取2010年1月至2011年3月间桂西地区临床诊断为CHB的住院及门诊患者105例(轻度26例，中度34例，重度32例,肝炎后肝硬化13例)，其中男63例，女42例，年龄26～68岁，平均(47.2±19.8)岁。诊断标准符合2000年中华医学会传染病与寄生虫病学会和肝病学分会学术会议制定的标准〔2〕，所选病例均不合并其他病毒感染，如甲、丙、戊、庚型肝炎病毒和HIV病毒感染等。②对照组：20例，男12例，女8例，年龄24～58岁，平均(41.2±17.6)岁，均为医院健康查体和医务工作者。

1.2试剂和仪器实验中使用三标记单克隆抗体CD3-PC5/CD4-FITC/CD8-PE，双标记单克隆抗体CD3/CD16+CD56-PE，CD28-FITC，均购自BECKMAN COULTER公司产品。流式细胞仪为美国BD FACSCalibur型。

1.3方法分别在两个试管中先加入拟标记抗体10 μl，再加入EDTA抗凝的外周静脉血50 μl(另设一管阴性对照)，轻微振荡混匀，室温避光放置15 min,每管加入溶血剂300 μl充分混匀，室温避光放置15 min，待完全溶血后1 200 r/min离心5 min，弃去上清，加入1 000 μl鞘液，混匀1 200 r/min离心5 min，弃上清，加鞘液500 μl，充分混匀使细胞悬浮，流式细胞仪检测，每管获取细胞10 000个。T细胞亚群及NK细胞的测定结果用CellQuest 软件分析。

2结果

与对照组相比较，CHB组CD3+CD4+CD8-和CD8+CD28+的百分率及CD4+/CD8+比值均有所降低，差异有统计学意义(P<0.05)，尤其是重度CHB和肝炎后硬化组下降更为显著，差异有统计学意义(P<0.01)，下降幅度与疾病的严重程度有关；肝炎后硬化组CD3+CD4-CD8+和CD8+CD28-的百分率比对照组偏高，差异有统计学意义(P<0.05)；重度CHB和肝炎后肝硬化组CD3-/CD16+56+的百分率则比对照组偏低，差异有统计学意义(P<0.05和P<0.01)，其余组与对照组相比均无明显改变(P>0.05)；各组CD3+T细胞的百分率无明显改变(P>0.05)。见表1。

表1　CHB患者外周血T细胞亚群检测结果

与对照组比较：1)P<0.05,2)P<0.01

3讨论

人体感染HBV后,体内抗病毒的免疫反应主要是细胞免疫,而T细胞在特异性免疫应答中起关键作用,当细胞免疫功能正常时，T细胞通过有效地溶细胞或非溶细胞机制清除病毒,感染可得到控制，但细胞免疫功能低下时，机体不能有效清除HBV导致病毒长期存在引发肝炎慢性化〔3，4〕。T细胞亚群是目前临床上最常用的反映细胞免疫功能状态的指标，本研究从对照组到肝炎后肝硬化组，CD4+T细胞百分比和CD4+/CD8+比值逐渐下降，与文献〔5〕报道相同。CD4+T细胞主要为辅助性T细胞(Th细胞)，被抗原激活后可促进CD8+T细胞的活化与增殖，同时使B细胞分泌抗体,诱导细胞免疫和体液免疫的产生，对HBV的清除起重要作用。本结果表明在CHB患者中存在细胞免疫功能紊乱、低下，使得HBV复制增强不能被有效清除，与李鸿宾等〔6〕报道一致。本文显示，各CHB组患者CD8+和CD8+CD28-的比例与对照组无明显差异，在肝炎后肝硬化组中的百分率比对照组略高，CD8+CD28+的比例则随着病程的进展而降低。CD8+T细胞具有特异性杀伤靶细胞抗感染的功能，但在清除病毒的同时也引起了肝细胞的破坏、凋亡，肝功能的损害，与肝炎后肝硬化、肝腹水的形成有一定的关系。CD8+CD28+T细胞的降低和CD8+CD28-T细胞的增多是T细胞功能下降的标志〔7〕。CD8+CD28+T细胞的减少使特异性细胞免疫功能降低，CD8+CD28-T细胞相对增多而抑制CD4+T细胞，使机体对病毒反应性减弱，引起清除病毒的能力降低，这两方面与HBV存在持续感染、病情迁延不愈相关〔8，9〕。NK细胞不表达特异性抗原识别受体，属非特异性免疫细胞，无需抗原预先致敏，就可直接杀伤病毒感染的靶细胞，在维持和调节特异性免疫中起重要作用。本研究表明，HBV侵入人体会破坏机体NK细胞的功能,表现为重度CHB和肝炎后肝硬化患者外周血CD16+56+细胞比例显著低于对照组，说明机体细胞免疫功能处于抑制状态，对NK细胞进行动态观察有助于判定免疫增强类药物的疗效。

综上所述，特异性免疫及非特异性免疫在CHB损伤中都发挥了重要的作用，值得深入研究〔10〕。了解CHB患者外周血T细胞亚群的表达，对寻找能够有效抑制或消除HBV，减少和防止不良预后发生的治疗方法或药物有着重要的意义。

4参考文献

1Franzese O,Kennedy PT,Gehring AJ,etal.Modulation of the CD+T cell response by CD4+CD25+regulatory T cells in patients with hepatitis B virus infection〔J〕.J Virol,2005；79:3322-8.

2中华医学会传染病与寄生虫病学分会,肝病学分会.病毒性肝炎防治方案〔J〕.中华肝脏病杂志,2000；8(6):324-9.

3于贤杰,王贵强.慢性HBV感染的免疫治疗〔J〕.世界华人消化杂志,2007；15(16):1835-40.

4Hyodo N，Nakamura I，Imawari M.Hepatitis B core antigen stimulates interleukin-10 secretion by both T cells and monocytes from peripheral blood of patients with chronic hepatitis B virus infection〔J〕.Chin Exp Immunol,2004；135:462-6.

5徐道振.病毒性肝炎临床实践〔M〕.第3版.北京：人民卫生出版社，2006:137-58.

6李鸿宾,江晓萍,叶珺,等.测定慢性乙型肝炎患者外周血T淋巴细胞亚群的临床意义〔J〕.安徽医药,2006；10(8):588-9.

7Godlove J,Chiu WK,Weng NP.Gene expression and generation of CD28-CD8T cells mediated by interleukin 15〔J〕.Exp Gerontol,2007；42(5):412-5.

8张晓帮,刘波,徐岳军,等.慢性乙型肝炎患者外周血CD4+CD25+、CD8+CD28+淋巴细胞的变化及与病毒载量的关系〔J〕.放射免疫学杂志,2010；23(1):77-9.

9何英,张允奇,吴润香,等.慢性乙型肝炎患者外周血T淋巴细胞亚群变化与病毒复制的关系〔J〕.检验医学,2009；24(11):808-11.

10韩莹,孙琳,李鹏,等.外周血及肝组织T细胞亚群、NK细胞在慢性乙型肝炎不同转归中的变化及其意义〔J〕.北京医学,2010；32(9):703-7.

〔2013-03-01修回〕

(编辑曹梦园)