不同产地及不同部位野生与栽培柴胡中黄酮类物质比较分析

王 斌 张腾霄 李新晶 任清云 宋相周 唐志国（.绥化学院食品与制药工程学院；.绥化市食品药品检验检测所 黑龙江绥化 506）

不同产地及不同部位野生与栽培柴胡中黄酮类物质比较分析

王 斌1张腾霄1李新晶1任清云1宋相周2唐志国2
（1.绥化学院食品与制药工程学院；2.绥化市食品药品检验检测所 黑龙江绥化 152061）

为建立柴胡多指标的质量评价体系，比较分析了不同产地及不同部位野生与栽培柴胡中黄酮类成分含量。以芦丁为标准品，采用亚硝酸钠－硝酸铝比色法，在520nm处测定吸光度。结果显示：不同产地野生与栽培柴胡中，含量最高的是黑龙江栽培，依次是山西野生、吉林野生、河北栽培。不同部位野生与栽培柴胡中黄酮含量最高的是柴胡花，依次是柴胡叶、柴胡茎、柴胡根。得出结论：不同产地的野生与栽培柴胡中黄酮类物质含量差别不是很大。不同部位柴胡中黄酮类物质含量差别很大，柴胡花中黄酮含量最高，为柴胡的扩大药源提供了理论依据。柴胡的质量评价还应结合其他主要有效成分进行综合评价。

柴胡；黄酮；不同产地；不同部位

柴胡是我国常用中药，2010版《药典》收录的柴胡正品为柴胡（Bupleurum chinenseDC）和狭叶柴胡（B.scorzonerifolium Willd）的干燥根，前者习称为北柴胡，后者称为南柴胡。柴胡性味苦甘，入肝胆经，具有和解退热、疏肝解郁、升举阳气的功能。现代药理表明柴胡具有解热、镇静、镇咳、抗菌、保肝利胆、抗炎、抗病毒、降血脂及抗消化道溃疡等药理活性[1]。随着中药现代化的发展，柴胡需求量不断增加，野生资源的数量已不能满足需求，人工栽培品种已成为商品柴胡的主要来源[2]。近年来发现，黄酮类成分也是柴胡中的重要活性成分，具有利胆、抑菌、杀菌等作用。但有关柴胡中黄酮类化合物的研究报道相对较少。本文通过研究不同产地及不同部位野生与栽培柴胡中黄酮类成分含量，为建立柴胡多指标的质量评价体系提供理论依据。

一、材料与方法

（一）材料。

1.柴胡样品：所有样品经绥化学院制药工程教研室鉴定为狭叶柴胡（Bupleurum scorzonerifolium Willd）的根，样品均采于2013年，样品编号及相应产地见表1、表2：

表1 样品编号及产地

2.仪器：FW100高速万能粉碎机，天津市泰斯特仪器有限公司；分析天平FA2014，上海舜宇恒平科学仪器有限公司；101-2A型数显电热鼓风干燥箱，上海锦屏仪器仪表有限公司；DK-98-IIA电热恒温水浴锅，天津市泰斯特仪器有限公司；KQ-50B型超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司；752紫外可见分光光度计，上海菁华科技仪器有限公司。

表2 样品编号及不同部位

3.试剂。芦丁对照品（购于中国食品药品鉴定研究院）、乙醇、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、蒸馏水，以上试剂均为分析纯。

（二）实验方法。

1.标准曲线的绘制。

（1）标准品溶液的制备。干燥恒重的芦丁标准品20 mg，加60％乙醇20mL于水浴60℃溶解，配制成1.0mg/mL的标准溶液。

（2）线性关系考察。精密吸取0.8mL、1.0mL、1.2mL、1.4mL、1.6mL、1.8mL、2.0mL的标准溶液至25mL容量瓶中，加入0.7mL5％NaNO2，5分钟后再加入0.7mL10％Al（NO3）3，放置10分钟，加入5.0mL 4％的NaOH，混匀后用30％乙醇定容置刻度，于38℃水浴中显色15分钟，以试剂空白对照，在510nm处测定吸光度。以芦丁质量（mg）为横坐标，吸光度（A）为纵坐标，绘制标准曲线。

2.样品的测定。

（1）样品溶液的制备。样品于55℃干燥5h，于粉碎机中粉碎，过40目筛，置干燥器中备用。称取样品粉末2.0g，置于100mL锥形瓶中，加入65％乙醇30mL，用封口膜密封，浸泡24h，超声提取，提取温度50℃，提取时间10分钟，超声功率60％，提取完毕，过滤，取上清液。第二次提取加入65％乙醇15mL，提取条件不变，合并两次上清液，65％乙醇定容至35mL，备用。

（2）样品的测定与结果。精密吸取1-4号样品溶液5mL，按（二）中1项条件下测定，平行3次，取平均值代入公式计算总黄酮的含量。计算公式如公式一：百分含量/％＝｛[（X× 7）÷1000]÷M｝×100％，精密吸取5-8号样品溶液2.5mL，按（二）中1项条件下测定，平行3次测定，取平均值代入公式计算总黄酮的含量。计算公式如公式二：百分含量/％＝｛[ （X×14）÷1000]÷M｝×100％，公式中，X为根据标准曲线计算换算为芦丁的mg数；M为制备样品测定液时称取的柴胡干燥粉末的重量，单位为g。

（三）方法学实验。

1.精密度实验。精密称取1号样品，分别按（二）中1和2项制备供试品溶液，按样品测定项操作连续测吸光度各5次，计算黄酮含量。

2.稳定性实验。精密称取样品分别按（二）中1和2项制备供试品溶液，60min内每隔10min测1次吸光度。

3.重复性实验。精密称取样品，分别按（二）中1和2项制备供试品溶液各5份，并计算含量。

4.加样回收率实验。以重复实验所得的总黄酮平均含量为样品含量，精密称取4号样品5份，加入等量对照品溶液，按样品测定项操作并计算含量。

二、结果与讨论

（一）精密度及加样回收率。精密度结果表明，精密度良好，相对标准偏差（RSD）分为2.43％。加样回收率为99.99％，RSD为1.17％。

表3 黄酮含量的精密度实验

表4 黄酮含量的回收率实验

（二）稳定性及重复性。稳定性结果表明在60min内，吸光度均基本稳定。重复性良好，RSD为1.13％。重复性及稳定性结果说明，该方法重复性好且测定的数据稳定。

（三）不同产地及不同部位柴胡根中黄酮的含量。经回归分析，柴胡黄酮类物质含量的回归方程：y=0.3798x+0.0415，R2=0.9948，表明芦丁在0.8～2.0mg呈良好的线性关系。从图1中可以看出：不同产地野生与栽培柴胡中黄酮类物质含量差别不是很大，其中，黄酮含量最高的是4号样品（黑龙江栽培）含量为0.333％，依次是1号样品（山西野生）含量为0.276％，2号样品（吉林野生）含量为0.248％，3号样品（河北栽培）含量为0.181％。不同部位柴胡中黄酮类物质含量差别很大，含量最高的是8号样品（柴胡花中）含量为1.745％，依次是7号样品（柴胡叶中）含量为1.170％，6号样品（柴胡茎中）含量为0.763％，5号样品（柴胡根中）含量为0.253％。

（四）讨论。野生的柴胡中黄酮含量并不一定比栽培柴胡中黄酮含量高，本研究中黄酮含量最高的是栽培品种，黄酮含量最低的也是栽培品种，因此中药常常强调其道地性。不同部位柴胡中黄酮类物质含量差别很大，黄酮含量最高的是柴胡花，依次是柴胡叶、柴胡茎、柴胡根中。2010版药典中收录柴胡的入药部位是根，实验表明柴胡茎中及花中黄酮含量丰富，为柴胡的临床应用扩大药源提供了理论依据。

图1 不同产地及不同部位柴胡根中黄酮的含量

本研究的不足之处是没有建立同时以柴胡皂苷a、柴胡皂苷d、黄酮、糖类物质及其他有效成分含量的多指标体系来评价柴胡的质量。王斌等[3]对7个不同产地来源的柴胡中糖类物质含量进行分析发现，同种柴胡不同产地或不同的生长环境，其糖类物质含量差别较大；同种产地野生品种和栽培品种总糖和多糖均存在一定的差异。曹海禄等[4]采用ICP-AES/ICP-MS技术分析测定了四种柴胡种质药材中21种常量及微量元素的含量，这些研究为柴胡的质量评价提供了重要依据。

三、结论

本文应用亚硝酸钠-硝酸铝比色法，测定不同产地及不同部位野生与栽培柴胡中黄酮类成分含量，结果不同产地的野生与栽培柴胡中黄酮类物质含量差别不是很大。不同部位柴胡中黄酮类物质含量差别很大，柴胡花中黄酮含量最高，为柴胡扩大药源提供了理论依据。柴胡的质量评价还应结合其他主要有效成分进行综合评价。同时，对该测定方法进行了全面的方法学考察，加样回收率实验和精密度实验表明，该方法排除了干扰因素，精密度良好；重复性及稳定性结果说明，该方法重复性好且测定的数据稳定。

[1]王斌,张腾霄,马松艳,等.柴胡的临床应用及配伍规律研[J].时珍国医国药,2012（1）.

[2]贺献林,王旗,贺振宁,等.野生柴胡生育特性及其对驯化栽培的启示[J].河北农业科学，2014（3）.

[3]王斌,张腾霄,刘利军，等.不同产地狭叶柴胡糖类物质含量的比较分析[J].湖北农业科学，2011（22）.

[4]曹海禄,魏建和,何春娥,等.不同土壤种植下四种柴胡种质药材中常量及微量元素含量的比较研究[J].光谱学与光谱分析,2010（4）.

[责任编辑 郑丽娟]

R284

A

2095-0438（2015）11-0147-03

2015-06-22

王斌（1980－），女，吉林敦化人，绥化学院食品与制药工程学院讲师，硕士，研究方向：天然药物质量评价、药用蕈菌活性成分及药学。

黑龙江省教育厅科学技术研究项目（12543082）；绥化市科技计划项目（KJZD20120081）；绥化学院“天然药物与食药用菌质量评价及功能保健品开发研究团队”阶段性研究成果。