龙葵正丁醇提取物对Lewis肺癌移植瘤生长的影响

金 旺，高聚伟，潘 磊，陈培丰

（1.浙江中医药大学第一临床医学院，浙江杭州310053； 2.浙江省中山医院，浙江杭州310005；3.浙江中医药大学附属第一医院，浙江杭州310006）

龙葵正丁醇提取物对Lewis肺癌移植瘤生长的影响

金 旺1，高聚伟2，潘 磊3，陈培丰3

（1.浙江中医药大学第一临床医学院，浙江杭州310053； 2.浙江省中山医院，浙江杭州310005；3.浙江中医药大学附属第一医院，浙江杭州310006）

目的：观察龙葵正丁醇提取物对Lewis肺癌移植瘤生长的抑制作用。方法：建立Lewis肺癌模型，将40只C57BL/ 6J荷瘤小鼠随机分成荷瘤空白对照组、环磷酰胺组、龙葵正丁醇提取物高、中、低剂量组5组，每组8只。给药15 d后处死小鼠，剥离肿瘤组织，称重，计算肿瘤生长抑制率；解剖其胸腺、脾脏组织，称重，计算胸腺和脾脏指数。结果：龙葵正丁醇提取物高、中、低剂量对Lewis肺癌移植瘤的抑瘤率分别为32.14%、13.93%和15.36%。龙葵正丁醇提取物高剂量组胸腺指数增长率为134.31%，龙葵正丁醇提取物中剂量组脾指数增长率为128.73%。结论：龙葵正丁醇提取物对Lewis肺癌移植瘤生长具有一定程度的抑制作用，并能提高荷瘤小鼠胸腺和脾脏指数。

龙葵；正丁醇；抑瘤率；胸腺指数；脾脏指数

龙葵是茄科茄属植物龙葵的全草，为一年至多年生草本植物。龙葵性寒、微甘，有小毒，有清热解毒、活血利水、止咳祛痰等功效［1］。现代药理学研究证明其具有抗肿瘤、解热镇痛、免疫调节等作用［2-3］。本实验建立在Lewis肺癌移植瘤模型的基础上，观察龙葵正丁醇提取物对荷瘤小鼠的一般状态、体重、肿瘤生长、胸腺和脾脏指数的影响，为其抗癌作用机制的研究提供依据。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 实验动物及瘤株 近交系C57BL/6J纯系小鼠，上海斯莱克动物有限责任公司提供，许可证号：SCXK（沪）2013-0003，在浙江中医药大学实验动物中心SPF级动物房适应性饲养7 d。Lewis肺癌细胞株，购自中国科学院上海细胞生物学研究所。

1.1.2 实验药物 龙葵购自浙江中医药大学附属第一医院中药房，产地为浙江临安，经该院徐锡山主任药师鉴定为茄科茄属植物龙葵（Solanum nigrum L.）的干燥全草。参考文献［4-5］方法称取干燥的龙葵饮片5 kg，用8倍量的正丁醇80℃提取2 h，提取液除菌，100℃水浴箱浓缩得浸膏，即为龙葵正丁醇提取物，置4℃冰箱保存备用。注射用环磷酰胺（CTX）：江苏恒瑞医药股份有限公司，产品批号：1033021。生理盐水（NS）：杭州民生药业有限公司，产品批号：312020910。

1.2 实验方法

将接种Lewis肺癌14 d的C57BL/6J荷瘤小鼠，脱颈椎处死，无菌冰浴条件下剥离瘤组织，选取生长良好的肿块，去除坏死组织，按肿瘤（g）∶生理盐水（mL）为1∶3比例用组织匀浆器制备瘤细胞悬液，200目网筛过滤，1 500 r/min，5 min，用PBS调节细胞浓度约4×106/mL，作为制备小鼠Lewis肺癌模型的细胞悬液。建模前小鼠禁食不禁水12 h，75%酒精消毒小鼠右腋下皮肤3次，用l mL无菌注射器取细胞悬液0.2 mL（含8×105个活细胞），无菌条件下接种于小鼠左腋窝皮下，拔出针头，用酒精棉球轻压针眼处片刻，防止细胞悬液流出。接种瘤细胞后，送同动物饲养室继续饲养。接种24 h后，荷瘤小鼠用随机化数字表法随机分为荷瘤空白对照组、环磷酰胺组、龙葵正丁醇提取物高、中、低剂量组5组，每组8只。给药剂量参照人鼠给药剂量换算方法［6］计算。

其中dA、dB是A、B两种动物的每kg体质量剂量（mg/kg）；RA、RB是动物体型系数，人为100，小鼠为59；WA、WB是动物的体质量（kg）值。

分组后开始给药，每日1次，连续15 d。除环磷酰胺组外其余各组均按0.2 mL/10 g灌胃给药，用药剂量分别为：荷瘤空白对照组给予生理盐水0.2 mL/ 10 g；龙葵正丁醇提取物高、中、低剂量组分别为160 mg/kg、80 mg/kg、40 mg/kg。环磷酰胺组予环磷酰胺注射液，按20 mg/kg剂量每次0.2 mL腹腔注射，接种第3天起给药，每隔2 d给药1次，共5次。停药后24 h，称体重，脱颈椎处死小鼠，放入超净台内，固定于蜡版上。然后剖开皮肤，完整剥离瘤块，称重。解剖其胸腺、脾脏组织，称重。

1.3 指标观察

1.3.1 荷瘤小鼠生活状况 每天记录各组小鼠体重，观察小鼠存活情况、精神状态、皮毛色泽，并记录。

1.3.2 抑瘤率 按瘤重计算肿瘤抑制率。

其中，y代表肿瘤抑制率，a代表空白对照组平均瘤质量（g），代表给药组平均瘤质量（g）。

1.3.3 胸（脾）腺指数 依据下列公式计算小鼠胸腺、

脾指数。

其中，y代表胸腺（脾）指数，a代表胸腺（脾）质量（mg），b代表小鼠体质量（g）。

1.4 统计学方法

采用SPSS 17.0统计软件分析，计量资料均以均数±标准差（x±s）描述，两组间比较采用配对t检验，P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 对荷瘤小鼠生活状况的影响

接种后1 d～7 d，各组荷瘤小鼠身形匀称，皮毛光滑，反应灵活，进食进水正常，组间差异不明显。自第8天起，荷瘤空白对照组小鼠体形开始消瘦，皮毛蓬松枯槁，活动迟缓甚至蜷缩不动。环磷酰胺组小鼠皮毛失去光泽，稀疏脱落，反应迟钝，行动迟缓。龙葵正丁醇提取物各剂量组小鼠的反应性也较迟钝，体毛缺少光泽，少量脱落，但较荷瘤空白对照组和环磷酰胺组情况为好。在实验第13天，在实验条件均一，无人为操作失误的情况下，荷瘤空白对照组有1只小鼠死亡，结合此小鼠肿瘤较大、形体消瘦、皮毛蓬松枯槁，考虑为肿瘤负荷过大致衰竭死亡，其余各组无死亡小鼠。

2.2 对荷瘤小鼠体质量的影响

实验过程中，各组小鼠体质量均有增加。15 d时，荷瘤空白对照组体质量增加（1.36±0.3）g；龙葵正丁醇提取物中剂量组增加最多，为（2.75±0.39）g；环磷酰胺组增加不明显，仅为（0.18±0.29）g。龙葵正丁醇提取物中剂量组、环磷酰胺组与荷瘤空白对照组体质量增加值比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。龙葵正丁醇提取物各治疗组小鼠平均体重与环磷酰胺组比较，差异均有统计学差异（P＜0.01，P＜0.05）。结果见表1。

表1 龙葵正丁醇提取物对荷瘤小鼠体质量的影响（x±s）

2.3 对荷瘤小鼠肿瘤质量及抑瘤率的影响

与荷瘤空白对照组比较，龙葵正丁醇提取物各组小鼠的平均瘤重均有不同程度的降低（P＜0.05，P＜0.01）。结果见表2。

2.4 对荷瘤小鼠胸腺和脾指数的影响

与荷瘤空白对照组比较，龙葵正丁醇提取物高、低剂量组胸腺指数均有提高，其中高剂量组与荷瘤空白对照组比较，差异有统计学意义（P＜0.05），胸腺指数增长率为134.31%。龙葵正丁醇提取物各剂量组脾指数均有提高，其中葵正丁醇提取物中剂量组与荷瘤空白对照组比较，差异有统计学意义（P＜0.01），脾指数增长率为128.73%。结果见表3。

表2 龙葵正丁醇提取物对荷瘤小鼠肿瘤质量的影响 （x±s）

表3 龙葵正丁醇提取物对荷瘤小鼠胸腺指数及脾指数的影响 （x±s）

3 讨论

龙葵是临床常用抗肿瘤中药之一。吕苑忠等［7］用龙葵补肾合剂治疗中晚期肝癌，显示该合剂具有提高中、晚期肝癌患者生活质量，减少并发症和毒副作用的优势。黄东彬等［8］用龙葵合剂治疗中晚期非小细胞肺癌，认为龙葵合剂在扶正基础上抑制肿瘤生长，达到最小副作用基础上的抗癌治疗，符合“带瘤生存”的理念。吴锯凌等［9］用龙葵葶苈汤联合DDP胸腔内灌注治疗肺癌，可显著提高肺癌大量恶性胸腔积液的临床疗效，降低化疗不良反应发生率，提高患者机体的细胞免疫功能。

在探讨龙葵抗癌机理方面，常乐等［10］研究表明龙葵多糖能显著抑制人胃癌MGC-803细胞的增殖，并具有时间及浓度依赖性，认为龙葵多糖能阻止人胃癌细胞由G1期进入S期，阻止细胞周期进程。李志雄等［11］研究发现龙葵碱可以通过线粒体途径诱导前列腺癌Du145及LNCaP细胞凋亡的发生，能将两种细胞的细胞周期阻滞在S期，产生抑制细胞增殖的作用。陈培丰等［12］观察到龙葵正丁醇萃取物对荷H22肝癌小鼠具有一定的肿瘤抑制作用，其机理可能与改善荷瘤机体细胞因子异常，调节机体免疫功能有关。曲中原等［13］认为龙葵碱抗肿瘤机制可能与其影响肿瘤细胞膜流动性和封闭性以及膜蛋白、影响红细胞免疫功能、抑制肿瘤新生血管生成、诱导肿瘤细胞的凋亡等有关。

在本实验中，我们采用系统溶剂法对中药龙葵进行初步提取分离，观察龙葵正丁醇提取物对lewis肺癌移植瘤生长的抑制作用。结果显示龙葵正丁醇提取物灌胃治疗后，荷瘤小鼠的生活状况有不同程度的改善，体重质量增加程度高于荷瘤空白对照组（P＜0.05）。并对荷瘤小鼠移植瘤的生长有一定抑制作用，龙葵正丁醇提取物低、中、高剂量组抑瘤率分别为15.36%、13.93%、32.14%。

研究表明，T淋巴细胞在宿主对肿瘤组织的免疫反应中起着关键的作用。胸腺和脾脏是T淋巴细胞成熟、增殖和分化的主要部位，其脏器指数是衡量机体免疫功能的初步指标［14］。本实验发现龙葵正丁醇提取物具有一定的提高荷瘤小鼠胸腺和脾脏指数的作用，其作用存在一定剂量效应关系，提示对这两个免疫器官的保护作用也可能是其抗肿瘤的作用机制之一。

由此可知，龙葵正丁醇提取物有改善荷瘤小鼠一般状况、增加体质量、改善生存质量的作用，并可在一定程度上抑制荷瘤小鼠肿瘤的生长和保护胸腺和脾脏，其作用机制值得进一步研究。

［1］赵国平，戴慎，陈仁寿.中药大辞典［M］.2版.上海：上海科学技术出版社，2006：873.

［2］徐东花，于春月，韩成花.龙葵的化学成分及药理作用研究［J］.黑龙江中医药，2007，36（2）：46-47.

［3］李红念，梅全喜，张志群，等.龙葵的化学成分与药理作用研究进展［J］.今日药学，2011，21（11）：713-715.

［4］卢艳花.中药有效成分提取分离技术［M］.2版.北京：化学工业出版社，2008：2-7.

［5］刘建文.药理实验方法学［M］.北京：化学工业出版社，2003：22-23.

［6］孙敬方.动物实验方法学［M］.北京：人民卫生出版社，2001：357.

［7］吕苑忠，孔庆志，熊振芳.龙葵补肾合剂治疗中晚期肝癌临床疗效观察［J］.湖北中医杂志，2009，31（11）：7-8.

［8］黄东彬，管静.龙葵合剂治疗晚期非小细胞肺癌54例临床观察［J］.内蒙古中医药，2013，32（16）：21-22.

［9］吴锯凌，顾亮.龙葵葶苈汤治疗肺癌大量恶性胸腔积液及对患者细胞免疫功能的影响［J］.中国中医急症，2014，23（2）：242-243.

［10］常乐，刘艺.龙葵多糖对人胃癌MGC-803细胞增殖的影响［J］.牡丹江医学院学报，2012，33（4）：24-26.

［11］李志雄，梁蔚波，唐晖，等.龙葵碱对前列腺癌LNCaP及Du145细胞系的作用及机制［J］.广东医学，2013，34（8）：1 153-1 156.

［12］陈培丰，潘磊，高聚伟，等.龙葵正丁醇萃取物对肝癌H22荷瘤小鼠的抑瘤作用及其免疫功能的影响［J］.中国中医药科技，2013，20（2）：141-142.

［13］曲中原，邹翔，邹晓祺，等.龙葵碱药理作用研究进展［J］.黑龙江医药，2014，27（4）：795-797.

［14］Lopez D M，Charyulu V，Adkins B.Influence of breast cancer on thymic function in mice［J］.J Mammary Gland Biol Neoplasia，2002，2（7）：191-199.

（编辑：翟春涛）

Effects of n-butanol extract from Solanum Nigrum L.on metastatic tumor growth

Jin Wang1，Gao Juwei2，Pan Lei3，Chen Peifeng3
（1.First Clinical Medical College to Zhejiang Chinese Medical University，Hangzhou Zhejiang 310053；2.Zhongshan Hospital of Zhejiang Province，Hangzhou Zhejiang 310005；3.First Hospital Affiliated to Zhejiang Chinese Medical University，Hangzhou Zhejiang 310006）

Objective：To observe the inhibiting effects of n-butanol extract from Solanum Nigrum L.on metastatic tumor growth in mice with lewis lung cancer.Methods：40 C57BL/6J mice set up Lewis Lung tumor model were randomly divided into tumor-burdened blank control group，cyclophosphamide group，n-butanol extract high，medium and low dosage group with 8 mice in each group.The mice were given drug respectively in 15 days and subsequently were killed.Tumor tissue were striped and weighed so as to calculate the tumor growth inhibition rate.Mice′s thymus and spleen were dissected and weighed so as to calculate index of thymus and spleen.Results：The inhibition rate of n-butanol extract high，medium and low dosage group were 32.14%，13.93%and 15.36%.The thymus index growth rate of n-butanol extract high dosage group was 134.31%；the spleen index growth of n-butanol extract medium dosage was 128.73%.Conclusion：The n-butanol extract from Solanum nigrum L.has certain inhibition effect on lewis lung cancer growth and the extract can increase mice′s thymus and spleen index.

Solanum nigrum L.；n-butanol；inhibition rate；thymus index；spleen index

R285.5

A

1671-0258（2015）01-0024-03

浙江省中医药科技计划项目（2009CA015）

金旺，在读硕士，E-mail：592694497@qq.com

陈培丰，主任医师，教授，E-mail：CPF12345@163.com