不同灸法对免疫抑制兔血细胞的影响

吴爱花，单增天，田岳凤，李雷勇，王 军

（1.山西中医学院，山西太原030024； 2.山西医科大学第二医院，山西太原030006）

不同灸法对免疫抑制兔血细胞的影响

吴爱花1，单增天1，田岳凤1，李雷勇2，王 军1

（1.山西中医学院，山西太原030024； 2.山西医科大学第二医院，山西太原030006）

目的：观察不同灸法对环磷酰胺所致免疫抑制兔外周血细胞的影响。方法：大耳白兔50只随机分为5组，分别为空白组、模型组、隔药饼灸组、艾灸组、假药饼灸组。除空白组外均腹腔注射环磷酰胺60 mg/kg，连续7 d，造成免疫抑制模型。3个治疗组分别进行隔药饼灸、艾灸、假药饼灸治疗，隔日灸，共灸10次。灸疗结束次日静脉取血，进行血细胞系列的检测。结果：与空白组比较，模型组WBC、NEU、RBC、HGB、HCT均显著降低（P＜0.01）。与模型组比较，隔药饼灸组WBC、NEU、RBC、HGB、HCT均升高，差异有统计学意义（P＜0.01）；艾灸组RBC明显升高（P＜0.01）；假药饼灸组9项指标差异均无统计学意义（P＞0.05）。结论：隔药饼灸对因环磷酰胺所致的免疫功能低下状态具有明显的改善作用。

环磷酰胺；免疫抑制；隔药饼灸；艾灸；血细胞

作为祖国医学的一种传统疗法，艾灸能有效调节机体免疫抑制状态已被大量实验研究所证实。本文从药物、艾灸、穴位三者协同作用的隔药饼灸的角度，探讨其对免疫抑制兔外周血细胞系列的影响，为临床艾灸提高机体免疫力低下提供实验依据，丰富艾灸防病治病的理论内涵。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 实验动物 大耳白兔50只，体重（2.5±0.3）kg，雌雄不限，由北京昌扬西山养殖场提供［动物合格证号：SCXK（京）2011-0010］。饲养温度20℃～25℃，相对湿度50%～70%。

1.1.2 药物、试剂与仪器 注射用环磷酰胺（CTX），200 mg/瓶，山西普德药业股份有限公司（批号：H14023686）。0.9%NaCl注射液500 mL（石家庄四药有限公司）。血细胞检测仪（美国雅培公司CELLDYN3700）。

1.2 实验方法

1.2.1 造模 50只大耳白兔随机分为空白组、模型组、隔药饼灸组、艾灸组及假药饼灸组5组，每组10只。动物适应性饲养10 d后，模型组、隔药饼灸组、艾灸组及假药饼灸组均腹部皮下注射环磷酰胺60 mg/kg（环磷酰胺用生理盐水稀释），连续注射7 d，每天上午进行；空白组注射等量生理盐水。

1.2.2 药饼制作 将熟地黄、山萸肉、山药、泽泻、丹皮、茯苓（按组方剂量）打碎成粉末，过120目筛备用，临用前以75%酒精调匀，用模具制成直径1 cm、厚0.3 cm的药饼；假药饼制作方法与药饼相同，其采用的原料是面粉。

1.2.3 穴位选择 神阙、关元、足三里（双）、脾俞（双）、肾俞（双）。穴位定位参照林文注主编《实验针灸学》［1］常用动物穴位定位法及拟人比照法。

1.2.4 施灸方法 动物造模后穴位处剪毛，绑缚固定于兔台。选用江苏盱眙华佗中药厂的艾绒，制成底径0.8 cm、高0.5 cm相等大小的圆锥形艾柱，分别置于药饼和假药饼上，以线香点燃，燃尽更换，每穴连灸3壮，隔日灸，共灸10次；艾灸组选用盱眙华佗中药厂的清艾条（批号：Z32020153），将自制艾灸架置于穴位上施灸，艾绒为3壮艾柱量，线香点燃，隔日灸，共灸10次。

1.3 样品采集及指标观察

实验结束后第2天，动物麻醉，腹腔静脉采血，采用血细胞检测仪观察外周血细胞系列的变化。包括白细胞系列：白细胞（WBC）、嗜中性粒细胞百分比［NEU（%）］、淋巴细胞百分比［LYM（%）］、单核细胞百分比［MONO（%）］、嗜酸性粒细胞百分比［EOS（%）］、嗜碱性粒细胞百分比［BASO（%）］；红细胞系列：红细胞（RBC）、血红蛋白（HGB）、红细胞压积（HCT）。

1.4 统计学方法

实验数据均以均数±标准差（x±s）表示，采用单因素方差分析（one way-ANOVA）并进行组间比较，P＜0.05为差异有统计学意义。全部数据输入计算机用SAS8.2统计软件，由统计专业人员进行分析。

2 结果

与空白组比较，模型组白细胞系列中WBC、NEU，红细胞系列中RBC、HGB、HCT均明显降低，差异均具有统计学意义（P＜0.01），LYM、MONO、EOS、BASO 4项指标差异无统计学意义（P＞0.05）。

与模型组比较，隔药饼灸组白细胞系列中WBC、NEU，红细胞系列中RBC、HGB、HCT均明显升高，差异均具有统计学意义（P＜0.01）；艾灸组RBC与模型组比较明显升高，差异具有统计学意义（P＜0.01），其余8项指标与模型组比较差异均无统计学意义（P＞0.05）；假药饼灸组9项指标与模型组比较差异均无统计学意义（P＞0.05）。结果见表1。

3 讨 论

已有大量实验研究证明，环磷酰胺是烷化剂中最常用的一种免疫抑制剂，在实验研究中利用其对动物机体的免疫功能和造血功能损害可制作免疫抑制模型［2-4］。采用CTX造模方法简单易行，用量及时间均可灵活掌握，所以常用其来制造免疫功能低下实验模型。血细胞是机体重要的免疫细胞，由白细胞、红细胞及血小板组成，其中白细胞通常又被称为免疫细胞，血液的免疫防御功能主要是靠白细胞实现，其数量及功能的变化反映免疫功能的强弱。此外，血液的运输功能主要是靠红细胞来完成，红细胞数量减少或质量下降，会不同程度地影响血液运输功能，从而出现一系列病理变化。

灸法作为中国传统预防保健的常用疗法，可升高外周血细胞系列的数量，正向调节免疫功能低下或受抑状态［5-6］，从而达到扶正祛邪目的。神阙穴与关元穴均为任脉之穴，可补肾固本、调理脏腑；足三里为足阳明胃经主要穴位之一，常灸之可保健防病、延年益寿、增强体力等；脾俞、肾俞为脾肾两脏气血汇聚于腰背之背俞穴，灸其补益脾肾，两穴通用可达滋阴补肾、健脾益气之功。

有实验研究表明，熟地黄、山茱萸、山药、茯苓、泽泻、丹皮六味药有机结合对改善机体免疫功能具有一定的协同作用［7-8］。隔药饼灸是将艾灸、药物与穴位有机结合，通过艾灸的温热，促进皮肤对滋阴补肾药物的吸收，经经络传输从而发挥药物归经之效能，达到提高机体免疫防御功能的作用。课题

表1 隔药饼灸对免疫抑制兔血细胞系列的影响 （x±s）

组前期试验也表明，隔药饼灸对不同年龄人群、艾灸对亚健康人群的外周血细胞系列均有明显的调节作用［9-10］。

本实验结果表明，造模后WBC、NEU、RBC、HGB、HCT明显低于空白组（P＜0.01），表明腹腔注射环磷酰胺造模成功。隔药饼灸神阙、关元、足三里（双）、脾俞（双）、肾俞（双）后，可明显回升免疫抑制兔血细胞系列WBC、NEU、RBC、HGB、HCT的含量，与空白组比较差异不明显，表明隔药饼灸通过回升血细胞系列的数量达到提高免疫抑制兔的免疫功能。艾灸后免疫抑制兔RBC明显升高，但与空白组相比仍存在明显差异，说明艾灸对RBC有明显回升作用，但作用不及隔药饼灸；假药饼灸组与模型组比较各项指标无明显差异，与空白组差异显著，说明假药饼灸治疗效果不佳。艾灸组的作用不够理想，可能与灸量或时间有关，本课题后期研究将进行探讨。

［1］林文注，王佩.实验针灸学［M］.上海：上海科学技术出版社，1994：283-287.

［2］罗月苹，王嫣，汪伟，等.环磷酰胺致新西兰大白兔白细胞减少症模型的建立［J］.激光杂志，2013，34（2）：77-78.

［3］寿旗扬，应华忠，周卫民，等.两种方法注射环磷酰胺致小鼠白细胞减少症模型的比较［J］.实验动物与比较医学，2008，28（4）：266-268.

［4］应军，肖百全，杨威，等.鸡血藤与阿胶升白细胞作用的比较研究［J］.中药新药与临床药理，2011，22（2）：175-177.

［5］张敏，李旭廷，曾富强，等.当归补血汤对环磷酰胺所致家兔血细胞减少的影响［J］.四川畜牧兽医，2012，39（12）：19-23.

［6］郑雪峰，聂焱，王志强，等.艾灸关元穴对化疗后低白细胞模型大鼠外周血象影响的实验研究［J］.湖北中医杂志，2009，31（5）：5-6.

［7］曹建恒.六味地黄丸对2型糖尿病患者红细胞免疫功能调节作用的影响［J］.新中医，2005，37（3）：45-46.

［8］宋宇，宋颖，段冷昕，等.六味地黄丸及其不同工艺提取物对小鼠免疫功能的影响［J］.北京中医药大学学报，2008，31（6）：385-388.

［9］董成林，田岳凤，李雷勇，等.隔药饼灸对不同年龄人群机体血细胞系列影响的比较［J］.世界中西医结合杂志，2014，9（1）：58-60.

［10］陈猛，李雷勇，田岳凤，等.艾灸对中青年亚健康状态人群血细胞系列的干预作用［J］.山西中医学院学报，2014，15（1）：39-42.

（编辑：翟春涛）

Influence of different moxibustion on blood cells series in immunosuppressive rabbits

Wu Aihua1，Shan Zengtian1，Tian Yuefeng1，Li Leiyong2，Wang Jun1
（1.Shanxi College of TCM，Taiyuan Shanxi 030024；2.The Second Hospital of Shanxi Medical University，Taiyuan Shanxi 030006）

Objective：To observe the influence of blood cells series in immunosuppressive rabbits treated with herbal cake-separated moxibustion，moxibustion and sham cake-separated moxibustion.Methods：50 rabbits were randomly divided into blank group，model group，herbal cake-separated moxibustion group，moxibustion group and sham cake-separated moxibustion group.Except the blank group，other groups were given intraperitoneal injection of cyclophosphamide（Cy）60 mg/kg in 7 consecutive days so as to set up the immunosuppressive model.Three treatment groups were treated every other day by herbal cake-separated moxibustion，moxibustion，sham cake-separated moxibustion respectively，a total of 10 times.Then abdominal vein blood was collected and blood cell series was detected after treatment.Results：Compared with the blank group，the WBC、NEU、RBC、HGB、HCT of model group were significantly decreased（P＜0.01）.Compared with model group，the WBC，RBC，HGB，HCT，NEU of herbal cake-separated moxibustion group were extremely significant increased（P＜0.01）.The RBC of moxibustion group was significantly higher than that of model gronp（P＜0.01）. Conclusion：Herbal cake-separated moxibustion has obvious effect on improving immunosuppressive state of rabbits induced by cyclophosphamide.

cyclophosphamide；immunosuppressive；herb cake-separated moxibustion；moxibustion；blood cells series

R332

A

1671-0258（2015）01-0019-03

国家自然科学基金面上项目（81373742）

吴爱花，在读硕士，E-mail：170225989@qq.com

田岳凤，教授，博士研究生导师，E-mail：tyfsx@163.com