Th 17/Treg平衡与葡萄胎严重程度的关系

郭赛群，张 颖，王丽峰，邱文山，温都苏，谭春燕，杨 岚广东医学院附属廉江市人民医院妇产科，广东 廉江 54400；广东医学院附属医院妇产科，广东 湛江5400

既往有研究发现葡萄胎恶变伴随Th1/Th2失衡［1］，我们在既往的研究中发现葡萄胎恶变出现Treg数量的增加［2］。作为与Th1/Th2紧密相联的Th17/Treg平衡，我们推测Th17/Treg平衡参与了葡萄胎的恶变，其机制可能是Th17功能减弱，不足以制衡Treg的过度免疫抑制，而出现免疫耐受。为此，我们探讨Th17/Treg平衡在葡萄胎恶变的作用，并发现葡萄胎患者确实存在Th17/Treg的失衡，且与严重程度相关。

1 资料与方法

1.1 患者入选与分组

经临床表现、B超及HCG等确诊，合并免疫系统疾病如类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮等；近8周内服用激素或免疫抑制剂者［3］。共收集检测葡萄胎患者60例（轻中重各20例），同时收集20例绒癌患者作为阳性对照，并且收集同龄段的20名健康女性作为阴性对照。以上入选对象年龄均无统计学差异。

1.2 标本采集与指标检测

于入选后次日清晨空腹抽取以上观察对象的静脉血5 ml，抗凝后于4℃保存待检。对不同分度葡萄胎患者进行清宫或活检，取得蜕膜组织后进行分离，获取蜕膜基质细胞留待下述免疫学检测[4]。

1.3 流式细胞术

采用Beckman多色流式细胞仪检测外周血及蜕膜组织内Th17细胞及其胞内细胞因子IL-17、IL-23，及其功能因子RORγt的含量；同样采用流式细胞术，检测Treg及其胞内功能因子IL-10、TGF-β1及Foxp3的百分含量[5]。CD4-FITC、CD25-FITC以及IL-10、TGF-β1及Foxp3抗体，均购自美国eBioscience公司。

1.4 统计学方法

定量资料采均数±标准差表示，采用单因素方差分析SBK法比较3组间的两两差异；相关性分析采用Spearman非参数法。运用统计软件包SPSS 13.0分析数据，以P<0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 流式细胞术检测结果

绒癌患者Th17、IL-17、IL-23及RORγt与正常人比较均无统计学差异，而葡萄胎患者仅IL-23与正常人无显著性差异，Th17、IL-17及RORγt均显著低于正常人及绒癌患者（P<0.05）。与正常人比较，绒癌患者Treg、IL-10、TGF-β及Foxp3均显著升高，且显著高于葡萄胎患者，三组间任意两组均有统计学差异（P<0.05）。三组间的Th17/Treg平衡以葡萄胎患者最低，显著低于另外两组，三组间差异两两差异均有统计学意义（P<0.05，表1）。

表1 3组外周血内Th17、Treg及其细胞因子含量与Th17/Treg平衡的比较(x±s,%)

2.2 葡萄胎患者Th17、Treg及Th17/Treg平衡的比较

随着病变严重程度加重，葡萄胎患者外周血及蜕膜内Treg数量递增，而Th17及Th17/Treg递减。与外周血比较，葡萄胎患者蜕膜内Th17升高，而蜕膜Treg含量降低。组间比较方面，除蜕膜内Treg无组间差异外（P=0.068），其余组间差异均有统计学意义（均为P<0.05，表2）。

2.3 相关性分析

表2 不同病变程度葡萄胎患者Th17、Treg及Th17/Treg平衡的比较(x±s,%)

外周血及蜕膜Treg均与病变程度分级呈显著正相关性；而Th17及Th17/Treg均与分级呈显著负相关性，其中相关程度最大为Th17/Treg平衡与重度的关系（以上所得r值的绝对值均大于0.7，P值均小于0.05，表3）。

3 讨论

葡萄胎的病因未明，但有越来`越多的证据表明，葡萄胎的发病与免疫异常有因果关系。人体免疫学分为体液免疫及细胞免疫，其中体液免疫以抗体等为主，而细胞免疫则以T细胞及B细胞等为主［6］。目前国际上以T细胞的研究为主。近年国内外不少学者从免疫学角度探讨妊娠滋养细胞疾病的发病机制，并发现T细胞数量及功能的异常在葡萄胎发病机制当中发挥重要作用［7］。CD4+辅助性T细胞（Th）是以表达CD4分子为特征的一个重要T细胞亚群，目前主要分为Th1（分泌IL-2及IFN-γ为特征）及Th2亚群（分泌IL-4、IL-8及TNF-α等为特征），且Th的过度活化已被证实为葡萄胎的一个新的发病机制［8］。近年还发现一种以分泌IL-17为主要特征的CD4+辅助性T细胞，命名为Th17 T细胞亚群，功能以提呈抗原、促进免疫反应为主［9］。在CD4+T细胞里面，还有一个特殊的亚群—CD4+CD25+Treg细胞，该细胞以分泌IL-10及TGF-β1为主要特征，且以Foxp3蛋白作为主要的转录因子，功能以调节尤其是抑制免疫反应为主［10］。由此看出，同样作为CD4+T细胞，Th及Treg恰好行使了相反的功能，亦即Th17促进免疫反应，而Treg抑制免疫反应，因此Th17/Treg构成一对平衡，从而在某些免疫性疾病如血管炎性肉芽肿、自身免疫脊髓炎、多发性硬化症等起到重要角色［11］。但目前尚未见有研究探讨葡萄胎，尤其是恶变的葡萄胎患者的Th17/Treg变化特点，这不利于葡萄胎的新型免疫机制的研究。

表3 Th17/Treg平衡与葡萄胎病变程度的关系（r/P）

本研究发现，绒癌患者Th17、IL-17、IL-23及RORγt与正常人比较均无统计学差异，而葡萄胎患者仅IL-23与正常人无显著性差异，Th17、IL-17及RORγt均显著低于正常人及绒癌患者，这说明一个重要现象：Th17、IL-17及RORγt三者在鉴别葡萄胎与绒癌起到重要作用！与正常人比较，绒癌患者Treg、IL-10、TGF-β及Foxp3均显著升高，且显著高于葡萄胎患者，三组间任意两组均有统计学差异，因此在Treg的差异方面与Nagymanyoki［1,4］报道的有所类似。从Th17与Treg的比较可以看出，Th17细胞在葡萄胎的表达的特异性要优于Treg。从平衡（比值）看，三组间的Th17/Treg平衡以葡萄胎患者最低，显著低于另外两组，三组间差异两两差异均有统计学意义，说明葡萄胎患者的Th17减少、Treg增多的现象要较绒癌患者更为显著。

在与病情严重程度的相关性方面，我们发现随着病变严重程度加重，葡萄胎患者外周血及蜕膜内Treg数量递增，而Th17及Th17/Treg递减，说明病情越重，平衡失调则越重。与外周血比较，葡萄胎患者蜕膜内Th17升高，而蜕膜Treg含量降低，这说明蜕膜组织内的细胞数量改变要较外周血显著。组间比较方面，除蜕膜内Treg无组间差异外，其余组间差异均有统计学意义，说明蜕膜内Treg的特异性不如Th17理想。相关性分析显示，外周血及蜕膜Treg均与病变程度分级呈显著正相关性；而Th17及Th17/Treg均与分级呈显著负相关性，其中相关程度最大为Th17/Treg平衡与重度的关系，这表明通过统计学分析证实了免疫细胞的数量与葡萄胎程度存在直接联系。

通过本研究我们认为，外周血及蜕膜内Th17细胞减少、Treg增多，从而导致Th17/Treg比值变小从而向Treg倾斜，是葡萄胎的一个重要免疫学现象，并且与葡萄胎的严重程度呈显著相关性。因此Th17/Treg对葡萄胎患者具有重要的临床意义。

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［2］郭赛群,张 颖,王丽峰,等.葡萄胎恶变患者调节性T细胞水平变化及其临床意义［J］.实用医学杂志,2012,28(8):100-1.

［3］王 芳,康 旭,李英勇.Th1/Th2类细胞因子与葡萄胎恶变的相关性研究［J］.现代妇产科进展,2007,16(12):920-2.

［4］Nagymanyoki Z,Callahan MJ,Parast MM,et al.Immune cell profiling in intraplacental and postmolar choriocarcinomas［J］.J Reprod Med,2008,53(8):558-64.

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［6］陈巧英,李大金.CD4～+CD25～+调节性T细胞的生物学特性及功能［J］.中国免疫学杂志,2007(1):89-92.

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［11］Differentiation DC,function of pro-inflammatory Th17 lymphocytes［J］.Microbes infect,2009,11:584-8.