香菇中粗多糖含量测定的方法比较

◎何东慧 郭晓燕

（谱尼测试集团股份有限公司，北京 100000）

香菇，又名香菌、花菇、冬菇、香蕈等，俗称中国蘑菇，是一种重要的食药用栽培真菌。香菇肉质肥厚细嫩，味道鲜美，香气独特，营养丰富，是一种食药同源的食物，具有很高的营养、药用和保健价值。随着人们生活水平的提高，香菇食品、药品、保健品等制品将日益受到人们的青睐。

多糖是由多个单糖分子缩合、失水而成，是一类分子机构复杂且庞大的糖类物质。它包括有淀粉、纤维素、糖元等。一般检测的粗多糖并不包含所有的多糖，是指从植物、中草药或真菌中提取的活性多糖，具有水溶性。随着分子生物学的发展，人们逐渐认识到多糖具有极其重要的生物功能。多糖与免疫功能的调节、细胞与细胞的识别、细胞间物质的转运、癌症的诊断与治疗等都有着密切的关系，近年来又发现多糖的糖链能控制细胞的分裂和分化、调节细胞的生长和衰老。

关于食用菌中粗多糖测定的方法没有国家标准，只有一个农业部推荐的方法。另外，《保健食品功效成分检测方法》介绍了几种粗多糖的测定方法。本文就香菇中粗多糖含量的测定方法：农业部推荐方法和《保健食品功效成分检测方法》中苯酚-硫酸法进行了一些介绍和讨论。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

（1）干香菇；

（2）硫酸；

（3）无水乙醇；

（4）苯酚；

（5）80%乙醇溶液；

（6）葡萄糖，使用前应于105℃烘干至恒重；

（7）80%苯酚溶液；

（8）5%苯酚溶液：吸取5mL苯酚溶液（2.1.7），溶于75mL水中，混匀，现用现配；

（9）100mg/L标准葡萄糖溶液：称取0.1000g葡萄糖（2.1.6）于100mL烧杯中，加水溶解，定容至1000mL，置4℃冰箱中贮存。

1.2 仪器

紫外可见分光光度计；分析天平，感量为0.001g；超声提取器；离心机。

1.3 实验方法

1.3.1 实验原理

在硫酸作用下，粗多糖先水解为单糖，单糖迅速脱水生成糖醛衍生物，该衍生物与苯酚反应生成的溶液在490nm下有特征吸收，以此测定样品中粗多糖含量。

1.3.2 样品的提取

方法一：称取0.5g左右粉碎过20mm孔径筛的样品，置于50mL具塞离心管内，加5mL水浸润样品，然后缓慢加入20mL无水乙醇（即溶液中乙醇的浓度为80%），使用涡旋振荡器振摇，使混合均匀，于4℃冰箱中静置4小时以上，在以4000r/min离心5min，弃去上清液。不溶物用10mL乙醇溶液洗涤、离心。用水将上述不溶物转移入圆底烧瓶，加入50mL蒸馏水，装上磨口的空气冷凝管，于沸水浴中提取2h。冷却至室温，过滤，将上清液转移至100mL容量瓶中，用水洗涤残渣2～3次，洗涤液转至容量瓶中，加水定容。此溶液为样品测定液。

方法二：称取混合均匀的样品1.0～2.0g，置于100mL容量瓶中，加水80mL左右，于沸水浴中加热1小时，冷却至室温后补加水至刻度，混匀后过滤，弃去初滤液。准确吸取5mL滤液置于50mL离心管中，加入无水乙醇20mL，混匀，于4℃冰箱静置4小时以上，以4000r/min离心5min，弃去上清液，残渣用80%乙醇溶液10mL洗涤，离心后弃去上清液。残渣用水溶解并定容至50mL。此溶液为样品溶液。

线性方程为y=9.418 4x+0.008 3，R2=0.999 6

1.3.3 标准曲线

方法一：分别吸取0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL的标准葡萄糖工作溶液置于20mL具塞玻璃试管中，用蒸馏水补至1.0mL。向试液中加入1.0mL苯酚溶液，然后快速加入5.0mL硫酸（与液面垂直加入，勿接触试管壁，以便与反应液充分混合），静置10min。使用涡旋振荡器使反应液充分混合，然后将试管放置于30℃水浴中反应20min，490nm测吸光值。以葡萄糖质量为横坐标，吸光度为纵坐标，制定标准曲线。

方法二：吸取标准葡萄糖工作液的体积及试剂加入量同方法一，试剂加入后，置于沸水浴中加热15min，冷却后，同样在490nm测吸光值。以葡萄糖质量为横坐标，吸光度为纵坐标，制定标准曲线。

1.3.4 测定

分别吸取方法一和方法二的样品溶液1mL于20mL具塞试管中，分别按1.3.3步骤操作，测定吸光度。同时做空白试验。

1.3.5 结果计算

样品中粗多糖含量按下面两个公式计算。

方法一：

其中：X—样品中粗多糖含量，g/100g；

C1—方法一中从标准曲线上查得样品定容液中含糖量，mg；

C2—方法二中从标准曲线上查得样品定容液中含糖量，mg；

m1—方法一中样品质量，g；

m2—方法二中样品质量，g。

2 结果与分析

2.1 两种方法标准曲线的绘制

按照上述方法要求，分别绘制方法一和方法二的标准曲线。标准序列分别见表1和表2，曲线线性图见图1和图2。从图1和图2看出，方法二的线性要比方法一线性好。

表1 方法一葡萄糖标准序列表

图1 方法一葡萄糖标准曲线

线性方程为y=9.139 7x+0.002 3，R2=0.996 4

表2 方法二葡萄糖标准序列表

图2 方法二葡萄糖标准曲线

2.2 两种方法的精密度分析

按照上述两种方法分别测定同一个干香菇样品，测定结果见表3。通过数据比较得出，两种方法测定结果比较接近，但方法二的精密度较高。

2.3 两种方法的准确度分析

分别对两种方法进行加标回收实验，实验数据见表4。由于加入葡萄糖标准溶液为单糖溶液，再加入乙醇进行分离时，葡萄糖很容易被分离出去，故标品均在显色前加入，所以两种方法的准确度都很好。

表3 样品测定结果

表4 样品加标回收实验

2.4 两种测定法的比较

从分析结果来看，两种方法测定结果没有明显的差异。下面对这两种方法的区别、优缺点分别进行分析。

表5 两种测定方法的区别

2.4.1 两种测定方法的区别

两种测定方法的区别见表5。

2.4.2 两种方法优缺点

两种方法的优缺点见下表6。

表6 两种方法优缺点

3 结论

香菇中粗多糖的测定方法比较简单，但实际操作过程比较麻烦，要注意的方面很多。比色法测定多糖并非特异性反应，方法灵敏度高，在测定过程中会出现偏差较大的结果，主要是操作不够严谨所致，反复沉淀、洗涤、弃上清液、样液的转移等都是造成测定结果偏差的原因。在操作过程中要多思考，控制好操作过程，这样才能得到较好的实验结果。

[1]王国佳,曹红.香菇多糖的研究进展[J].解放军药学学报,2011(5):451-455.

[2]李月梅.香菇的研究现状及发展前景[J].微生物学通报,2005(4):149-152.

[3]张军霞,胡喜巧.香菇多糖几种提取方法的比较[J].河南科技学院学报:自然科学版,2008(1):45-49.

[4]郭金龙,陈有君.苯酚-硫酸法的改进发展[J].食品科学,2008(12):555-558.

[5]王超,张曜武.苯酚-硫酸法测定杏鲍菇多糖方法的研究[J].天津化工,2011(6).

[6]白鸿.保健食品功效成分检测方法[M].北京:中国中医药出版社,2011.

[7]耿安静,陈健.香菇精多糖乙醇沉淀规律的研究[J].食品科学, 2010(4):99-102.

[8]闫巧娟,韩鲁佳,江正强,等.黄芪多糖分子量的分布研究[J].食品科学,2004(8):27-31.