金花茶对衰老大鼠的抗氧化和抗凋亡作用

金花茶对衰老大鼠的抗氧化和抗凋亡作用

卢春毅刘红杨曦荣曦黄李平1黄振光2

(广西医科大学第一附属医院老年内分泌科，广西南宁530022)

摘要〔〕目的探讨金花茶对亚急性衰老大鼠抗氧化和抗凋亡的作用。方法拟建立大鼠亚急性衰老模型后，予高、低浓度金花茶灌胃干预。测肝脏和睾丸组织超氧化物歧化酶(SOD),丙二醛(MDA)含量及bax、bcl-2 mRNA表达水平。结果与衰老模型组对比，高、低浓度金花茶组肝脏和睾丸组织SOD含量和bcl-2 mRNA表达显著升高(P<0.05)，且MDA含量和bax mRNA表达明显下降(P<0.05)。高、低浓度金花茶组间比较，上述指标有统计学差异(P<0.05)。结结论金花茶可以提高SOD含量和降低MDA含量，通过上调bcl-2和下调bax表达水平，减慢肝脏和睾丸细胞的凋亡，对延缓机体衰老有重要作用。

关键词〔〕金花茶；衰老；凋亡；抗氧化

中图分类号〔〕R5〔

基金项目：广西壮族自治区中医药管理局自筹经费科研课题(g22c1055)

通讯作者：刘红(1960-)，女，教授，硕士生导师，主任医师，主要从事内分泌代谢病研究。

1中医科2药剂科

第一作者：卢春毅(1986-)，女，硕士，医师，主要从事内分泌代谢性疾病研究。

研究证实，茶中总游离氨基酸为80.8 mg/100 g,脯氨酸占总游离氨基酸的38.7%〔1〕；黄酮类物质、茶多酚〔2〕和皂甙的含量分别为8.5%、4.42%和7.0%,维生素C和维生素E的含量分别为90 mg/100 g和520 mg/100 g。金花茶中营养丰富且富含多种延缓衰老作用的成分。本实验观察金花茶对大鼠自由基和凋亡因子表达水平的影响。

1材料与方法

1.1实验仪器和试剂D-半乳糖(博仁生物)；金花茶(广西桂人堂圆茶：多酚类物质含量极高的金花茶鲜嫩叶精制而成)；丙二醛(MDA)，超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒(南京建成生物工程研究所)；DEPC(焦碳酸二乙酯)(美国AMRESCO公司)；DNA Marker(上海生工)；PCR引物(上海生工)；Tag DNA聚合酶(Ptomega公司)；高速低温离心机(Beckman产品)；紫外分光光度计(上海长明光学电子仪厂)；PCR扩增仪(Gene Amp PCR system)；电泳槽(北京东方特力科贸中心)。

1.2实验动物雄性SD大鼠(180～220 g)40只，广西医科大学动物实验中心提供，SPF级饲养，普食。

1.3动物分组和处理随机分成正常对照组、衰老模型组、低浓度金花茶组和高浓度金花茶组，每组10只。衰老模型组和金花茶组采用D-半乳糖连续腹腔注射200 mg·kg-1·d-1制备亚急性衰老动物模型，1次/d,共40 d。衰老模型组造模成功后不再做任何处理。金花茶组大鼠造模成功后，低、高农度组大鼠分别每天用金茶花2、4 g/kg煮水灌胃，1次/d，共40 d。正常对照组大鼠每天灌胃同等剂量的生理盐水，时间同金花茶组大鼠。所有大鼠最后1次灌胃后全部断颈处死取肝脏和睾丸组织测衰老指标。

1.4实验方法按照试剂盒说明书测定肝脏和睾丸组织SOD，MDA。肝脏和睾丸组织bcl-2和bax的RNA检测：根据GeneBank发表的大鼠基因序列，由上海生工设计并合成引物(见表1)。取肝脏和睾丸组织，用总RNA试剂盒提取组织RNA，依次进行RNA检测，逆转录反应，PCR扩增，扩增条件：95℃ 3 min,95℃ 1 min，58℃(bax)30 s/59℃(bcl-2)30 s,72℃ 1 min,35个循环，72℃ 5 min,4℃终止反应，电泳成象及分析。

1.5统计学方法采用SPSS13.0软件进行方差分析和q检验。

2结果

2.1金花茶对衰老大鼠肝脏和睾丸SOD和MDA含量的影响在肝脏和睾丸组织中，与正常对照组相比，衰老模型组MDA含量均明显增多(P<0.05),且SOD活性均降低(P<0.05)；与衰

老模型组相比，高、低浓度金花茶组MDA含量均明显降低，且SOD含量均增高(P均<0.05)，高、低浓度组间均有统计学差异(P<0.05)。此结果说明金花茶能降低衰老机体MDA含量并提高SOD活性，具有抗氧化作用，且高浓度时作用较强。见表2。

2.2金花茶对衰老大鼠肝脏和睾丸bcl-2 bax mRNA表达的影响在肝脏和睾丸组织中，衰老模型组大鼠肝组织中bax表达均增高，bcl-2表达均降低，与正常对照组对比有统计学差异(P均<0.05)；与衰老模型组相比，高、低浓度金花茶组bax表达均明显降低(P<0.05)，bcl-2表达均明显增高(P<0.05)，高、低浓度组间有统计学差异(P<0.05)。由此可知金花茶能抑制衰老大鼠肝脏和睾丸组织细胞凋亡，高浓度时抑制作用较强。见表2。

表1RT-PCR引物设计及合成程序

基因引物序列RCP产物长度bax上游:5'CTAGCAAACTGGTGCTCAAGG3'178bp下游:5'GATGGTCACTGTCTGCCATGT3'bcl-2上游:5'GATTGTGGCCTTCTTTGAGTTC3'111bp下游:5'CGGTTCAGGTACTCAGTCATCC3'

组别肝脏MDA SOD睾丸MDA SOD肝脏bcl-2mRNA baxmRNA睾丸bcl-2mRNA baxmRNA正常对照组3.75±0.65357.93±46.062.86±0.24277.94±26.300.821±0.1400.272±0.0220.564±0.0350.183±0.126衰老模型组6.84±0.281)211.68±30.691)6.01±0.451)181.20±19.811)0.296±0.0251)0.865±0.1891)0.189±0.0291)0.608±0.0291)低浓度金花茶组4.99±0.192)265.44±23.482)4.99±0.192)220.98±26.422)0.424±0.0152)0.418±0.0352)0.361±0.0232)0.350±0.0142)高浓度金花茶组5.59±0.382)3)296.57±24.542)3)4.51±0.332)3)253.76±13.472)3)0.502±0.0162)3)0.309±0.0052)3)0.461±0.0102)3)0.440±0.0102)3)

与正常对照组比较：1)P<0.05；与衰老模型组比较：2)P<0.05；与低浓度金花茶组比较：3)P<0.05

3讨论

当生物体内氧化与抗氧化系统失衡，抗氧化酶SOD活性降低，过氧化物MDA堆积，直接损害或者通过一系列过氧化链式反应引起蛋白质变性和核酸破坏，导致线粒体等广泛的生物细胞结构破功能受损，促进了细胞的凋亡，引起机体衰老〔3〕。本实验中,经D-半乳糖腹腔注射，衰老模型组大鼠睾丸和肝脏组织中氧化与抗氧化系统失衡，bcl-2 mRNA表达明显下降而bax mRNA表达升高，相比正常对照组睾丸和肝细胞凋亡增加。

衰老与性腺的功能退化和性激素水平的降低密切相关〔4〕。睾酮主要由睾丸细胞分泌，并且与睾丸组织SOD活性正相关〔5〕，由于增龄过程中氧化应激的作用和睾丸细胞的不断凋亡，致使睾丸细胞功能受损减低，可能导致血清睾酮水平的下降使衰老程度加重。此外，肝脏作为性激素代谢的重要器官，自由基损伤及肝细胞凋亡使肝脏代谢睾酮等性激素能力下降〔6〕，未代谢性激素过多残留可能通过负反馈抑制，导致体内性激素分泌减少加快衰老。

本文结果表明，金花茶一方面可能通过对抗脂质过氧化，平衡机体氧化与抗氧化系统延缓衰老；另一方面可能通过抑制睾丸和肝脏组织细胞凋亡，以提高睾丸和肝脏组织维持机体性激素水平的能力，协调睾丸和肝脏功能，多位点加强机体抗衰老作用。机体的衰老可能与睾丸和肝脏的功能下降失调有关，但其发生机制尚未完全明确，金花茶延缓衰老的作用机制也还需进一步研究探讨。

4参考文献

1林华娟,秦小明,曾秋文，等.金花茶茶花的化学成分及生理活性成分分析〔J〕.食品科技，2010；36(10)：88-92.

2颜栋美，姚艾东.金花茶多酚抗氧化性能的研究〔J〕.河南工业大学学报(自然科学版)，2009；30(2):42-5.

3蔡崇岳，黎明，庄仁汉，等.衰老雄性大鼠睾丸组织脂质过氧化与睾酮水平和bcl-2基因表达的研究〔J〕.中华男科学杂志，2007；13(1)：46-9.

4Ponholzer A，Plas E，Schatzl G,etal.Association of DHEA2S and estradiol serum level to symptoms of aging men〔J〕.Aging Male，2002；5(4):233-8.

5蔡崇岳，章振保，田生平.衰老雄性大鼠睾丸组织抗氧化酶与血清睾酮水平、凋亡蛋白酶-3基因表达的研究〔J〕.汕头大学医学院学报，2006；19(3)：154-7.

6洪美珠，陈国良.肝硬化与睾酮、雌二醇相互作用关系研究现状〔J〕.世界华人消化杂志，2006；14(35)：3397-401.

〔2012-12-19修回〕

(编辑赵慧玲/曹梦园)