活动期溃疡性结肠炎患者外周血CD4＋CD25＋Treg细胞与肠道炎性反应的相关性研究

2015-12-23吴铁龙,薛丽莉,戴圆圆等

国际消化病杂志 2015年4期

关键词：活动期性反应外周血

·临床研究·活动期溃疡性结肠炎患者外周血CD4+CD25+Treg细胞与肠道炎性反应的相关性研究

吴铁龙薛丽莉戴圆圆薛育政

DOI:10.3969/j.issn.1673-534X.2015.04.019

基金项目：无锡市医管中心科研项目(YGZXQ1318)，江苏省“六大人才高峰”基金(WSN-066)，江苏省“333工程”科研项目(CAE01101-06)，无锡市社会发展科技支撑项目(CSE31N1415)

作者单位：214000南通大学第三附属医院消化内科

通信作者：薛育政，Email: xueyz001@163.com

溃疡性结肠炎(UC)是一种病因尚不完全清楚的慢性肠道炎性疾病。目前研究认为，肠道黏膜免疫系统紊乱在UC发病机制中起着至关重要的作用。导致免疫系统紊乱的原因主要是效应T细胞数量增多或免疫调节功能降低。机体内存在数种免疫调节系统，其中CD4+CD25+调节性T细胞(Treg cell)是发挥免疫调节功能的主要效应细胞。有研究报道，当UC炎性反应活动时，外周血CD4+CD25+Treg细胞数量减少，但它们之间关系的研究不多。本文通过研究活动期UC患者外周血CD4+CD25+Treg细胞水平的变化及其与临床Myao评分、内镜Jeroen评分和病理Matts分级的相关性，探讨外周血CD4+CD25+Treg细胞水平变化的临床意义。

1对象与方法

1.1研究对象

选取2013年8月至2014年8月就诊于南通大学第三附属医院消化内科的UC患者35例，其中男20例、女15例，年龄20～61岁，平均年龄(39±12)岁。所有UC患者的诊断均符合2012年中华医学会消化病学分会炎症性肠病协作组拟定的《2012年炎症性肠病诊断与治疗的共识意见》[1]，排除标准为不愿接受检查者、患有自身免疫性疾病者、近半年服用免疫抑制剂或糖皮质激素者、有其他严重疾病者。根据Mayo评分，缓解期15例和活动期20例(轻度7例、中度6例、重度7例)。选择同期该院健康体检者20名作为正常对照组，其中男11名、女9名，年龄24～56岁，平均年龄(41±10)岁。所有受试者均知情同意行相关检测。

1.2研究方法

所有受试者入院当日空腹抽取EDTA-N2抗凝肘静脉血5 mL，按淋巴细胞分离液(天津灏洋生物制品公司)说明书分离出外周血单核细胞(PBMC)，加入生理盐水，400 g离心20 min，沉淀PBMC，弃上清，重悬PBMC，然后按说明书操作将分离好的100 μL PBMC加入1 μL 异硫氰酸荧光素(FITC)标记的CD4抗体和PE荧光素标记的CD25抗体(美国BD公司)，避光置4℃冰箱中孵育30 min，加入磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤2次，2 000 g离心5 min后弃上清，加入500 μL PBS洗涤后上机检测。用Cxpcytometer软件分析统计CD4+CD25+Treg细胞的百分比。免疫散射比浊法方法测定C反应蛋白(CRP)。

1.3疾病活动度评价

疾病活动度评价包括临床Mayo评分(0～2分为缓解期、3～5分为轻度活动期、6～10分为中度活动期、11～12分为重度活动期)、内镜Jeroen评分[2](0～3分为非活动期、4～7分为轻度活动期、8～12分为中度活动期、13～18分为重度活动期)和病理Matts分级[3](1级为1分、2级为2分、3级为3分、4级为4分、5级为5分)。患者入院当日行Mayo评分评估，对Mayo≥3分的UC患者行肠镜检查及病理活检，根据Jeroen评分系统评估镜下评分，根据病理Matts分级进行病理评分。

1.4统计学分析

2结果

2.1各组外周血CD4+CD25+Treg细胞和CRP水平的比较

活动期UC患者外周血CD4+CD25+Treg细胞水平低于缓解期，缓解期低于正常对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)；活动期CRP水平高于缓解期和正常对照组，差异有统计学意义(P<0.05)，缓解期CRP水平略高于对照组，差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1　各组外周血CD4 + CD25 + Treg细胞

注：与对照组比较，aP<0.05；与缓解期UC组比较，bP<0.05

2.2不同活动期UC组外周血CD4+CD25+Treg细胞和CRP水平的比较

外周血CD4+CD25+Treg细胞水平随着UC病情加重而降低，重度活动期低于轻、中度活动期，差异均有统计学意义(P<0.05)；CRP水平随着病情加重而上升，中、重度活动期UC患者外周血CRP水平高于于轻度活动期，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2　不同活动期UC组外周血CD4 + CD25 + Treg

注：与轻度组比较，aP<0.05；与中度组比较，bP<0.05

2.3活动期UC组外周血CD4+CD25+Treg细胞水平与疾病活动度评分及CRP水平的相关性分析

线性回归分析发现,活动期UC组外周血CD4+CD25+Treg细胞水平与临床Mayo评分、内镜Jeroen评分、病理Matts评分及CRP水平均呈负相关(RA=0.67，RB=0.78，RC=0.86，P<0.01；RD=0.72，P<0.05)。见图1。

图 1　活动期UC组外周血CD4 + CD25 + Treg细胞水平与疾病活动度评分及CRP水平的相关性分析

3讨论

UC是一种慢性免疫性肠道疾病，其发病机制主要是肠道黏膜免疫功能紊乱，导致效应T细胞介导的针对肠道共生菌群的异常免疫反应。CD4+CD25+Treg细胞是机体内发挥免疫调节功能的主要效应细胞，可通过细胞-细胞间直接接触和分泌抗炎因子如转化生长因子-β(TGF-β)、白细胞介素-10(IL-10)等抑制辅助T细胞增殖和促炎因子分泌，阻止免疫损伤和维持免疫耐受[4]。研究报道，相比于正常人，UC患者外周血CD4+CD25+Treg细胞水平下降，但该细胞水平与炎性活动之间的相关性研究不多[5-6]。本研究结果显示，相比于缓解期UC组和对照组，活动期UC组外周血CD4+CD25+Treg细胞水平明显下降，且随着炎性反应加重而降低，与临床活动Mayo评分、内镜Jeroen评分及病理Matts评分呈负相关，提示CD4+CD25+Treg细胞水平降低与UC肠道炎性反应活动密切相关，与Wang等[7]的研究结果相似。此外，研究发现CD4+CD25+Treg细胞可以从外周血迁移至肠道黏膜固有层，也可以从肠道黏膜固有层迁移至外周体循环[8]，而活动期UC患者肠道炎性反应区域组织中CD4+CD25+Treg细胞的水平明显高于非炎性反应区域[7]，提示导致外周血CD4+CD25+Treg细胞水平降低的可能原因是，CD4+CD25+Treg细胞从外周体循环及非炎性反应区域向炎性反应区域趋化集聚。

此外，本研究还检测了非特异性炎性反应指标CRP的水平，发现与正常对照组相比，缓解期UC组外周血CRP水平无明显差异，而活动期UC组CRP水平随着炎性反应加重而上升，与Rodgers等[9]的研究结果相似。进一步研究发现，活动期UC组CRP上升水平与CD4+CD25+Treg细胞水平降低呈负相关。造成活动期UC患者CRP水平上升的原因可能是外周血CD4+CD25+Treg细胞水平降低，免疫调节功能减弱，促炎因子分泌增多，炎性细胞活化刺激CRP水平升高。

综上所述，活动期UC患者外周血CD4+CD25+Treg细胞水平与疾病活动度密切相关，检测外周血CD4+CD25+Treg细胞水平有助于监测炎性反应活动及判断严重程度，但临床实用价值还有待进一步行大样本研究。

参考文献

1中华医学会消化病学分会炎症性肠病学组. 炎症性肠病诊断与治疗的共识意见(2012年, 广州). 中华消化杂志, 2012, 32: 796-813.

2Bergeijk JD, Wilson JH, Nielsen OH, et al. Octreotide in patients with active ulcerative colitis treated with high dose corticosteroids. Eur J Gastroenterol Hepatol, 2002, 14: 243-248.

3Matts SG. The value of rectal biopsy in the diagnosis of ulcerative colitis. Q J Med, 1961, 30: 393-407.

4Beissert S, Schwarz A. Regulatory T Cells. J Invest Dermatol, 2006, 126: 15-24.

5廖山婴, 朱小波, 沙卫红, 等. 溃疡性结肠炎患者外周血 CD4+CD25+调节性T 细胞水平及其临床意义. 新医学, 2013, 44: 764-766.

6Kekilli M, Tunc B, Beyazit Y, et al. Circulating CD4+CD25+regulatory T cells in the pathobiology of ulcerative colitis and concurrent primary sclerosing cholangitis. Dig Dis Sci, 2013, 58: 1250-1255.

7Wang Y, Liu XP, Zhao ZB, et al. Expression of CD4+forkhead box P3 (FOXP3)+regulatory T cells in inflammatory bowel disease. J Dig Dis, 2011, 12: 286-294.

8Kamikozuru K, Fukunaga K, Hirota S, et al. The expression profile of functional regulatory T cells, CD4+CD25high+/forkhead box protein P3+, in patients with ulcerative colitis during active and quiescent disease. Clin Exp Immunol, 2009, 156: 320-327.

9Rodgers AD, Cummins AG. CRP correlates with clinical score in ulcerative colitis but not in Crohn′s disease. Dig Dis Sci, 2007, 52: 2063-2068.

华医学会消化病学分会炎症性肠病学组. 炎症性肠病诊断与治疗的共识意见(2012年, 广州). 中华消化杂志, 2012, 32: 796-813.