HLA-DRB1*基因多态性与新疆维吾尔族及汉族溃疡性结肠炎应用5-氨基水杨酸治疗后反应的关系

2015-12-23阿依努尔·阿合曼,哈迪那·热马赞,高峰

国际消化病杂志 2015年4期

·论著·HLA-DRB1*基因多态性与新疆维吾尔族及汉族溃疡性结肠炎应用5-氨基水杨酸治疗后反应的关系

阿依努尔·阿合曼哈迪那·热马赞高峰

摘要：目的本研究拟采用病例对照方法探讨人类白细胞抗原(HLA)-DRB1*基因单核苷酸多态性与新疆地区维吾尔族及汉族溃疡性结肠炎(UC)易感性的关联性，并应用5-氨基水杨酸(5-ASA)治疗，观察治疗反应，探讨HLA -DRB1*基因单核苷酸多态性与UC疗效之间的关系。方法采用序列特异性引物聚合酶链反应的方法及SBT测序法对120例UC 患者和408名健康对照者DNA的HLA-DRB1 基因分型，病例组中汉族66 例，维吾尔族54例，男性57例，女性63例，平均发病年龄为(48.09±15.63)岁；健康对照组408例，其中汉族212例，维吾尔族196例。120例患者均口服5-ASA，急性期4 g/d，缓解期2 g/d，随餐服用，随访6个月后观察疗效，根据疗效分为治疗有效组及治疗无效组。结果汉族UC患者HLA-DRB1*13等位基因频率高于健康对照组，差异有统计学意义(P<0.05)；HLA-DRB1*12等位基因频率低于健康对照组，差异有统计学意义(P<0.05)；维吾尔族UC 患者HLA-DRB1*01、*04、*13、*14等位基因频率高于健康对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。120例UC患者口服5-ASA后对疗效进行比较，发现HLA-DRB1*04、*13、*14等位基因阳性的维吾尔族与汉族UC患者相比较，两组间的治疗效果差异无统计学意义(P>0.05)。结论HLA-DRB1*基因单核苷酸多态性与新疆地区汉族UC无明显关系，与维吾尔族UC的易感性有关，它们可能在UC的发病中发挥潜在作用，但与新疆地区维吾尔族UC患者服用5-ASA的治疗效果无明显关系。

关键词：溃疡性结肠炎；DRB1*基因多态性；汉族；维吾尔族；疗效观察

DOI:10.3969/j.issn.1673-534X.2015.04.018

基金项目：国家自然科学基金(81160052)

收稿日期：(2014-09-09)

作者单位：830001乌鲁木齐，新疆维吾尔自治区人民医院消化科(阿依努尔·阿合曼，高峰)，门诊部(哈迪那·热马赞)

通信作者：高峰，Email: xjgf@sina.com

Relationship of HLA-DRB1* gene polymorphism between Uyghur and Han UC patients and therapeutic reaction of 5-amino salicylic acid in Xinjiang Uygur Autonomous RegionAHEMANAyinuer,GAOFeng.DepartmentofGastroenterology,People'sHospital,XinjiangUygurAutonomousRegion,Urumqi(830001),China;REMAZANHadina.DepartmentofOutpatient,People'sHospital,XinjiangUygurAutonomousRegion,Urumqi(830001),China

Abstract：ObjectiveThis paper was to explore the relationship of HLA-DRB1 * gene polymorphism between Uyghur and Han UC patients in Xinjiang Uygur Autonomous Region and the treatment response using 5-amino salicylic acid, and to explore the relationship between human leukocyte antigen-DRB1 * polymorphisms and treatment response of ulcerative colitis. MethodsThe specific sequence primer polymerase chain reaction method and SBT sequencing method were used for HLA-DRB1* genotyping of 120 cases of UC patients and 408 cases of normal controls. The 66 cases were Han and 54 cases were Uyghur in the treatment group, with an average onset age of (48.09±15.63) years. The 212 cases were Han and 196 cases were Uyghur in the control group. 120 patients took 5-amino salicylic acid preparations orally, with a dosage of 4 g/d in the acute phase and 2 g/d in the remission phase, with meals and after 6 months of follow-up efficacy. ResultsThe HLA-DRB 1*13 allele frequency of Han UC patients is higher than that in the control group, with statistical significant difference(P<0.05). The HLA-DRB1*12 allele frequency of Han UC patients is lower than that in the control group, with statistical significant difference (P<0.05). The HLA-DRB*01, *04, *13, *14 allele frequency of Uyghur patients is higher than that of the control group, with statistical significant difference (P<0.05). However, no significant difference was found between the Han and Uyghur UC patients, after taking 5-amino salicylic acid preparations orally. ConclusionsHuman leukocyte antigen-DRB1 * gene polymorphism is associated with Uyghur and ulcerative colitis susceptibility. It may play a potential role in the pathogenesis of UC in the Uyghur in Xinjiang Autonomous Region. However, there is no significant difference, after taking 5-amino salicylic acid preparations orally between the Han and Uyghur UC patients.

Key words：Ulcerative colitis; DRB1*gene polymorphisms; Han; Uyghur; Treatment response

溃疡性结肠炎(UC)是一种慢性复发性非特异性肠道炎症性疾病，其发病机制可能是由感染、遗传等因素作用于易感人群，引起肠道免疫系统反应紊乱导致肠道炎性病变与结构破坏[1]。5-氨基水杨酸(5-ASA)具有抗炎特性，被广泛用于UC的治疗，尽管其确切机制尚不清楚，但其干扰花生四烯酸代谢、清除氧自由基、抑制核因子-κB(NF-κB)激活、诱导细胞凋亡等的潜在机制已被广泛认同[2]。目前5-ASA是临床上治疗UC的一线药物。

人类白细胞抗原(HLA)是调控人类免疫应答的一个关键因素，其中HLA 的Ⅱ类抗原在抗原识别和免疫反应中起重要作用。HLA 基因位于人类第6号染色体短臂(6p21. 3)，具有高度多态性，含有大量遗传信息，是目前研究较为广泛的与炎症性肠病相关的基因之一[3]。有研究发现，新疆地区维吾尔族与汉族UC的结肠镜检出率均高于国内外水平。汉族发病年龄较维吾尔族更大，且汉族年龄分布广泛，老年患者明显高于维吾尔族。比较两者的病情严重程度发现，维吾尔族的中、重型患者多于汉族[4]。研究显示HLA-DRB1*基因单核苷酸多态性与新疆地区维吾尔族及汉族UC的易感性有关[5]。本研究旨在探索通过检测新疆维吾尔族及汉族UC患者的HLA-DRB1基因多态性来观察患者服用5-ASA后的疗效，为制定个体化的临床治疗方案提供理论依据。

1材料与方法

1.1研究对象

本研究选择新疆自治区人民医院自2013年1月至2014年1月住院的120例UC患者，其中汉族66例，男性31例，女性35例；维吾尔族54例，其中男性26例，女性28例，平均发病年龄为(48.07±15.83)岁。健康对照组有408人，其中汉族212人，维吾尔族196人，年龄与性别的构成差异均无统计学意义(P>0.05)。120例患者均接受肠镜检查并且随访至2014年1月，UC的临床与内镜诊断、病理检查结果及疗效判断采用Lennard-Jones标准[6]及中华医学会2012年广州会议制定的IBD诊治规范共识意见[7]。所有研究对象均为居住在新疆地区、无血缘关系、无免疫性和遗传性疾病史的维吾尔族及汉族人群。排除慢性菌痢、阿米巴痢疾、肠结核、克罗恩病、缺血性肠炎及结肠癌等疾病，所有患者均伴有腹痛、腹泻、脓血便、肛门坠胀等症状。

1.2主要试剂及方法

1.2.1HLA-DRB1基因检测试剂及方法对每例入选的研究对象空腹抽取5 mL静脉血，EDTA-Na2抗凝，基因组应用试剂盒提取DNA。按照HLA- DRB1* 各等位基因的DNA序列，参照基因文库中所有纯合子、杂合子有可能出现的序列进行引物设计，由上海捷瑞生物工程有限公司合成并纯化(见表1)。

表1　HLA-DRB1*等位基因PCR-SBT引物核苷酸序列

PCR反应DNA扩增，PCR 产物纯化使用 High Pure PCR Purification Kit(Roche Diagnostics)设备。PCR产物纯化后产物测序反应采用using BigDye Terminator v3.1的试剂盒(ABI、USA)和ABI 3730XL DNA测序仪进行测序。DRB1*基因结果分析：应用Qiagen SBTengine HLA Typing software DRB1分型进行数据的分析。

1.2.2治疗药物及方法120例患者均口服5-ASA制剂(美沙拉嗪缓释颗粒)，商品名为Etiasa(艾迪莎)，急性期4 g/d(8袋)，缓解期2 g/d(4袋)，随餐服用，随访6个月后观察疗效[8]。治疗后均进行肠镜检查，根据临床症状和肠镜结果进行疗效评估。

1.3统计学处理

应用SPSS13.0统计软件进行χ2检验或Fisher′s精确检验，当P<0.05时，计算OR，采用Miettinen卡方值法计算OR和95%CI。表型频率用直接计数法，基因频率按Hardy-Weinberg定理，应用方根法计算。

2结果

2.1维吾尔族UC患者与健康对照组HLA-DRB1*等位基因频率分布比较

维吾尔族UC患者(54例)HLA-DRB1*01、*04、*13、*14等位基因频率高于健康对照组(196例)，差异有统计学意义(P<0.05)；HLA-DRB1*8、*03、*11等位基因频率低于健康对照组，但差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。

2.2汉族UC患者和健康对照组HLA-DRB1等位基因分布比较

汉族UC患者(66例)HLA-DRB1*13等位基因频率高于健康对照组(212例)，差异有统计学意义(P<0.05)；HLA-DRB1*12等位基因频率低于健康对照组，差异有统计学意义(P<0.05)；HLA-DRB1*03等位基因频率低于健康对照组，差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。

表2　汉族及维吾尔族UC患者HLA-DRB1基因多态性差异性比较

2.3维吾尔族与汉族UC患者疗效比较

维吾尔族与汉族UC患者均口服5-ASA制剂(美沙拉嗪缓释颗粒)，对HLA-DRB1*04、*13、*14基因多态性阳性的维吾尔族和汉族UC患者疗效进行比较，发现两组差异无统计学意义(P>0.05)。见表3。

表3　维吾尔族UC患者HLA-DRB1基因多态性及疗效比较

注：治疗有效组包括缓解和有效，治疗无效组包括临床症状、结肠镜检查均无改善

3讨论

近年来对UC的病因和发病机制的研究较为活跃，且取得了一定进展，但至今仍未完全阐明，目前研究的重点方向包括感染因素、免疫学因素及遗传因素。氨基水杨酸类药物和皮质类固醇类药物目前仍然是治疗UC的主要药物，具有起效快、近期临床缓解率高等优点，但停药后易复发，长期用药的不良反应较多，部分顽固性患者的疗效并不理想[9]。 5-ASA制剂主要包括巴柳氮、柳氮磺吡啶(SASP)、美沙拉嗪和奥沙拉嗪等，其中巴柳氮和SASP是5-ASA的前体药，均可在结肠细菌的作用下释放出5-ASA，美沙拉嗪是5-ASA的控释剂，奥沙拉嗪则是由两分子5-ASA藕合而成，它们的活性成分均为5-ASA，是轻、中度UC诱导缓解和维持缓解的一线药物。5-ASA有良好的耐受性，不良反应小，抗炎作用肯定。

本研究表明，汉族UC患者的发病年龄较维吾尔族的发病年龄大，且汉族年龄分布广泛，老年患者明显高于维吾尔族[4]。本研究对新疆地区维吾尔族UC患者与健康对照组HLA-DRB1等位基因频率分布进行比较，结果提示HLA-DRB1*01、*04、*13、*14等位基因与维吾尔族UC呈正相关。本研究还指出，直接检测HLA-DRB1基因多态性对预测5-ASA类药物的疗效并没有帮助。

综上所述，本研究发现HLA-DRB1*基因可能在汉族及维吾尔族UC的发病中发挥潜在作用，但与5-ASA的治疗效果并无明显关系，对于中国新疆地区的UC患者，无论基因是否有差异对预测疗效并无指导意义，故其在临床应用中的费用-效益比尚有待研究。

参考文献

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2马明江, 鲍秀琦. 5-ASA对大鼠溃疡性结肠炎NF-κB表达的影响. 黑龙江医学, 2013, 36: 7-8.

3Bouzid D, Kammoun A, Amouri A, et al. Inflammatory bowel disease: susceptibility and disease heterogeneity revealed by human leukocyte antigen genotyping. Genet Test Mol Biomarkers, 2012, 16: 482-487.

4高峰, 刘兴, 丁努, 等. 新疆地区汉族及维吾尔族溃疡性结肠炎临床特点分析. 中华消化内镜杂志, 2007, 29: 423-427.

5Aheman A, Gao F, Kuerbanjiang A, et al. Difference in DRB1* gene polymorphisms between Han and Uyghur ulcerative colitis patients in China. World J Gastroenterol, 2013, 19: 2709-2713.

6Lennard-Jones JE. Classification of inflammatory bowel disease. Scand J Gastroenterol Suppl, 1989, 170: 2-6.

7中华医学会消化病学分会炎症性肠病学组. 炎症性肠病诊断与治疗的共识意见. 胃肠病学, 2012, 17: 763-781.

8Lachaine J, Yen L, Beauchemin C, et al. Medication adherence and persistence in the treatment of Canadian ulcerative colitis patients: analyses with the RAMQ database. BMC Gastroenterol, 2013, 13: 23.

9江学良, 王志奎, 秦成勇. 中国溃疡性结肠炎的研究现状与对策. 世界华人消化杂志, 2000, 8: 610-613.