克螨特农药对斑马鱼急性毒性的研究

黄 瑜，蔡 佳，王 蓓，鲁义善，简纪常，吴灶和，汤菊芬*

(1.广东海洋大学水产学院，广东湛江524088;2.广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室，广东湛江524088;3.广东省水产经济动物病害控制重点实验室，广东湛江524088;4.仲恺农业工程学院，广东广州510225)

克螨特，又称炔螨特，英文通用名称Propargite，是美国Uniroyal公司1968年研制成功的高效低毒、无内吸性、低残留、具有触杀和胃毒双重作用的有机硫广谱杀螨剂，有效成分为2-(4-叔丁基苯氧基)环己基丙炔-2-基亚硫酸酯［1］。克螨特在农业上主要用于防治棉花、果蔬、花卉的螨害效果显著［2-4］。然而，近年有研究发现克螨特对寄生于鳗鲡身上的指环虫有很好的治疗效果［5］。斑马鱼(Brachydanio rerio)是一种亚热带淡水鱼类，因其体侧具有象斑马一样纵向的暗蓝与银色相间的条纹而得名，斑马鱼体积小、繁殖快、易于培养、成本低、同时易于给药容易观察，是试验中重要的科研鱼类。笔者通过克螨特对斑马鱼的室内急性毒性测定试验，为今后利用克螨特杀灭斑马鱼的寄生虫疾病提供数据支持。

1 材料与方法

1.1 试验用鱼 同批同龄的斑马鱼取自广东省湛江市花鸟虫鱼市场，斑马鱼(Brachydanio rerio)体质量为(0.3 ±0.1)g，全长为(20.0±5.0)mm，雌雄不限，试验前在容积为400 L的大水簇箱中驯养7 d。试验时挑取体格健壮、无伤无病的斑马鱼进行试验。

1.2 试验药物 克螨特(Propargite)，购自汕头市光华化学厂。

1.3 试验条件 养殖用水为曝气充氧除氯24 h以上的自来水，水温(20±3)℃，pH在7.0左右，总硬度101～103 mg/L，碱度52.21 ～57.13 mg/L，溶解氧含量5.2 ～7.1 mg/L。充气使用小型充气泵，饲料为斑马鱼专用饲料。试验是在规格80 L的水族箱中进行，每桶加入药液水50 L。

1.4 试验方法

1.4.1 浓度设置。采用静水试验方法，以4 d为1个试验周期。通过预试验，确定克螨特毒性试验的浓度范围，即96 h 100%死亡浓度(LC100)和0%死亡浓度(LC0)。然后，按照等对数间距法确定克螨特急性毒性试验浓度梯度(表1)，设置7个浓度组和1个对照组进行试验，观察96 h内斑马鱼的反应，每组放30尾，试验药液现配现用。

待测得克螨特对斑马鱼96 h的半致死浓度(LC50)和安全浓度(SC)后，再进行LC50和SC的可信度验证。设置3个平行组，每组30条鱼。试验所用药液现配现用。

1.4.2 结果观察。试验前24 h停止投喂饲料，试验开始后的前8 h内连续观察受试鱼的中毒症状及死亡情况，以后不定时进行观察，并于96 h分别记录试验鱼的死亡数和存活数。

1.4.3 指标计算。LC50和95%可信区间的计算采用寇氏法［6］;按照以下公式计算 SC:SC=0.1 ×96 h LC50［7］。

1.4.4 数据处理。使用SPSS 17.0统计软件对试验数据进行单因素方差分析和Duncan’s多重比较，P＜0.05表示差异显著。

2 结果与分析

2.1 预试验结果 克螨特对斑马鱼96 h全部死亡的最小剂量(LC100)约为1.2 mg/L，无死亡的最大剂量(LC0)约为0.6 mg/L。

2.2 克螨特对斑马鱼的LC50和SC 不同浓度克螨特处理组斑马鱼的死亡数和致死率见表1。根据表1中各浓度克螨特处理组斑马鱼的96 h死亡数和致死率，计算出96 h斑马鱼的 LC50为0.909 mg/L，置信区间为0.876 ～0.943 mg/L，SC为 0.091 mg/L。

表1 各浓度克螨特处理组斑马鱼的96 h死亡数和死亡率

2.3 LC50和SC的验证 根据以上试验得出的斑马鱼LC50和SC进行试验验证。试验表明，斑马鱼LC50的3个组死亡数分别为14、16和15尾;SC的3个组没有鱼死亡。这表明斑马鱼的SC是可信的。显著性分析表明，斑马鱼LC50的理想死亡尾数和LC50的实际死亡尾数没有显著差异，表明LC50的结果也是可信的。

3 讨论

该试验将药物加入斑马鱼所生活的水中，它们会自主连续地从溶液中吸收药物，通过调节水中药物浓度来改变给药剂量。在预试验中发现，随着水中克螨特药物浓度的增加，斑马鱼在一定时间内的死亡率会相应增加，说明产生毒性的药物浓度与斑马鱼的死亡率呈正相关，因此可以用LC50来表示药物毒性大小。笔者随机选取体质健壮且大小均匀的斑马鱼进行试验，每组受试数均为30尾，这为判别药物的作用效果提供了良好条件，大大降低了因为研究材料的质量不佳和数量不足从而导致试验误差较大的可能性。

研究表明，克螨特农药在96 h对鳟鱼 LC50为0.118 mg/L［8］，蓝鳃翻车鱼 LC50为 0.197 mg/L［9］，鲤鱼 LC50为 1.0 mg/L［10］。笔者通过克螨特农药对斑马鱼毒性的研究发现，96 h克螨特对斑马鱼的LC50为0.909 mg/L。依据试验所得斑马鱼对克螨特LC50和SC进行试验验证。结果表明，斑马鱼在LC50下的理想死亡尾数和实际死亡尾数并没有显著性差异，表明试验结果可信。在克螨特SC条件下饲养96 h，也没有造成斑马鱼的死亡，说明斑马鱼对克螨特SC的结果也可信。这些结果为今后利用克螨特杀灭斑马鱼感染寄生虫的用药量提供了重要的数据基础。

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