复方白芍颗粒质量控制研究

王 帆，储晓琴，桂双英

（1．安徽中医药大学药学院，安徽 合肥 230012；2．安徽中医药高等专科学校，安徽 芜湖 241000；3．安徽省中药制剂工程技术研究中心，安徽 合肥 230012；4．安徽省中医药科学院药物制剂研究所，安徽 合肥 230012）

复方白芍颗粒由白芍、甘草、泽泻等中药组成，为安徽省六安地区民间祖传经验方，具有滋阴健肾、活血化瘀、除湿化浊的功效。原方采用药材打粉直接用水冲服给药，临床用于治疗慢性肾炎、肾功能不全，效果显著。本课题组采用现代提取与制剂技术研制了复方白芍颗粒［1］，为了更好地控制制剂质量，本实验对其质量标准进行研究。白芍和泽泻分别是该方中的君药和臣药，芍药苷为治疗慢性肾病的主要活性物质，白芍和泽泻的薄层鉴别方法及芍药苷的含量测定方法比较成熟稳定，因此本实验以白芍和泽泻作为鉴别考察的依据，芍药苷作为定量指标来控制复方白芍颗粒质量。

1 仪器与试药

1．1 仪器 LC－20A高效液相色谱仪：日本岛津公司（配有SPD－M20紫外检测器，LC－20AB泵，LC solution色谱工作站）；AG285型电子天平：德国METTLER公司；循环水式多用真空泵、R－1001N型旋转蒸发仪：河南省郑州长城科工贸有限公司。

1．2 试药 芍药苷对照品（批号110736－201035）：中国药品生物制品检定所；23－乙酰泽泻醇B对照品（批号 MUST－11040101）：四川省成都曼思特生物科技有限公司；薄层层析用硅胶G、薄层层析用硅胶H：山东省青岛海洋化工厂；复方白芍颗粒为自制（批号分别为121024、121120、121209）；阴性对照品为自制；甲醇、乙腈均为色谱纯；水为娃哈哈纯净水；其余化学试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2．1 白芍的鉴别［2－5］取本品颗粒约2．0g，研成细粉，加甲醇10mL，超声波（功率100W，频率40 kHz）30min，滤过，滤液蒸干，残渣加入1mL甲醇使其溶解，即得供试品溶液；另外取适量的芍药苷对照品，加入甲醇适量，使成1mg／mL的溶液，即得对照溶液；取缺白芍提取物的阴性样品，按照上述方法制备阴性对照液；按照《中华人民共和国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法（thin layer chromatography，TLC）试验要求，精密吸取上述3种溶液各10μL，分别点在同一硅胶G薄层色谱板上，将三氯甲烷－甲醇－乙酸乙酯－甲酸（40∶10∶5∶0．2）作为展开剂，展开，晾干，喷洒显色剂5%的香草醛硫酸溶液适量，加热直至斑点颜色显示清晰。在供试品色谱图中，与对照品色谱图的对应位置上，显示相同颜色的蓝紫色斑点，阴性对照溶液无干扰。结果见图1。

2．2 泽泻的鉴别［2］213取本品颗粒约2．0g，研成细粉，加入乙酸乙酯20mL，超声波处理30min，滤过，将滤液加于氧化铝柱（200～300目，5g，内径1cm，干法装柱）上，用乙酸乙酯10mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加入1mL乙酸乙酯使其溶解，作为供试品溶液。取23－乙酰泽泻醇B对照品适量，加乙酸乙酯制成2mg／mL的溶液作为对照品溶液。取缺泽泻提取物的阴性样品同法制成阴性对照溶液；按照TLC法（《中华人民共和国药典》2010年版一部ⅥB）试验，精密吸取上述3种溶液各10μL，分别点在同一硅胶H薄层板上，以乙酸乙酯－环己烷（1∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷洒显色剂5%的硅钨酸乙醇溶液适量，在105℃下加热至斑点颜色显示清晰。供试品色谱图中，在与对照品色谱图相应位置上，显示相同颜色的红色斑点，阴性对照溶液无干扰。结果见图2。

2．3 芍药苷含量测定［6－10］

2．3．1 色谱条件 色谱柱为phenomenex C18（250 mm×4．6mm，5μm）；流动相：乙腈－0．05%磷酸水溶液（14∶86）；流速：1．0mL／min；检测波长：230nm；柱温：30℃；进样量：20μL。理论塔板数按照芍药苷的峰计算应高于2 000，分离度应不低于1．5。

2．3．2 对照品溶液制备 取经干燥的芍药苷对照品适量，精密称取33．35mg，置于50mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，制成0．667mg／mL的芍药苷对照品贮备溶液。吸取对照品贮备溶液1mL置10mL量瓶中，加入甲醇至刻度，即得66．7μg／mL的芍药苷对照品溶液。

2．3．3 供试品溶液的制备 取本品适量，研细，精密称定0．5g，置50mL量瓶中，加甲醇至刻度，超声提取30min，放冷，用甲醇补足缺失量，用0．45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

2．3．4 阴性对照溶液 按制剂工艺制备处方中除去白芍的阴性对照样品，照“2．3．3”项下方法制备阴性对照溶液。分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各20μL，按含量测定项下方法测定，色谱图（见图3）提示，在对照品色谱相应的位置上，供试品溶液具有相同保留时间的色谱峰，阴性对照在此峰位无吸收。

2．3．5 线性关系考察 分别精密量取芍药苷对照品贮备溶液（0．667mg／mL）0．1、0．2、0．4、0．6、0．8、1．0mL，分别置2mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，过0．45μm微孔滤膜，制成系列对照品溶液。按“2．3．1”项下方法测定，以峰面积y对芍药苷浓度x（μg／mL）进行线性回归，即得回归方程：y＝29 505x－108 325，r＝0．999 1（n＝6）。结果表明，芍药苷浓度在33．35～333．50μg／mL范围内与峰面积的线性关系良好。

2．3．6 精密度考察 精密量取芍药苷对照品溶液20μL，连续进样6次，测得芍药苷的峰面积，结果表明此方法的精密度良好（RSD＝1．20%）。

2．3．7 重复性考察 取相同批号样品6份，按照“2．3．3”项下的方法制备样品溶液，测得芍药苷的峰面积，计算其平均含量为2．30%，RSD为1．98%（n＝6），表明该方法重复性良好。

2．3．8 稳定性考察 取同一样品溶液，分别于0、1、2、4、8、12h进样，测定芍药苷峰面积，结果其RSD为2．0%，表明样品溶液在12h内基本稳定。

2．3．9 加样回收率考察 称取6份已知含量的样品（批号121120）约0．1g，精密称定，置50mL量瓶中，分别精密加入浓度0．667mg／mL对照品贮备溶液4mL，按照“2．3．3”项下方法操作，测定芍药苷含量，结果见表1。

表1 加样回收率试验结果

2．3．10 样品含量测定 按“2．3．3”项下方法制备供试品溶液（批号分别为121024、121120、121209），分别吸取对照品溶液和供试品溶液各20μL，注入高效液相色谱仪，按色谱条件测定峰面积，以外标一点法计算芍药苷含量。结果见表2。

表2 样品含量测定结果

3 讨论

3．1 超声时间的确定 在含量测定时，采用超声提取法制备供试品溶液，对提取溶剂和超声时间进行考察，分别选择甲醇、50%乙醇、70%乙醇、无水乙醇超声30min，结果甲醇明显优于不同浓度乙醇；再分别以甲醇超声提取20、30、40min，结果甲醇超声提取30min与40min提取率相近，并高于20min，故选择甲醇超声提取30min。

3．2 流动相的选择 曾采用乙腈－水（14∶86）为流动相，但存在明显的拖尾现象，选用乙腈－0．05%磷酸（14∶86）作流动相时，可改善拖尾现象，且峰型较好。因此，本实验选取乙腈－0．05%磷酸溶液（14∶86）为流动相。

3．3 线性关系考察 芍药苷浓度在33．35～333．5 μg／mL范围内与峰面积的线性关系良好（r＝0．999 1），不仅说明方法可靠，而且说明无论是用标准曲线还是用外标一点法计算含量，其结果区别不大，因此，在样品测定中采用外标一点法计算芍药苷含量，简单准确。

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