结直肠癌去整合素-金属蛋白酶-9表达与预后的关系

唐 翀，姜 湉，高雪松，施 文，秦炜颜，孙永强

南通大学第二附属医院普外科，南通 226001

结直肠癌去整合素-金属蛋白酶-9表达与预后的关系

唐 翀，姜 湉，高雪松，施 文，秦炜颜，孙永强

南通大学第二附属医院普外科，南通 226001

目的 探讨结直肠癌去整合素-金属蛋白酶-9（ADAM-9）表达与临床病理因素、预后的关系。方法 应用免疫组化检测不同临床分期结直肠癌（72例）ADAM-9表达，术后随访分析与结直肠癌患者预后的相关性。结果

结直肠癌；去整合素-金属蛋白酶-9；预后

结直肠癌是发病率有增高趋势的常见消化道恶性肿瘤之一。去整合素-金属蛋白酶-9（ADAM-9）作为ADAM家族成员之一，主要参与调节细胞-基质的相互作用[1]，通过调控细胞膜表面生长、调控因子及受体活性，与肿瘤的发生、发展、转移密切相关[2]。本研究旨在探讨ADAM9在结直肠癌中表达及其与临床病理因素和预后的关系。

1 资料与方法

1.1 标本

石蜡标本来源于2009年1月至2014年12月南通市第一人医院普外科手术根治切除的结直肠癌，共72例。其中，男38例，女34例，年龄42～81（中位年龄66岁）；TNM（2010年，AJCC/UICC）Ⅰ～Ⅱ期20例，Ⅲ～Ⅳ期52例。并取其中10例正常组织为对照。所有病例病理均经南通市第一人民医院病理科诊断确认；术前均未行放、化疗，无二次手术史。

1.2 主要试剂

兔抗人ADAM-9多克隆抗体，美国CHEMICON公司产品。Envision system HRP抗鼠/兔免疫组化二抗试剂盒，N-Histofine公司产品。DNA ladder：世联博研（北京）科技有限公司，DAB浓缩型试剂盒，上海信裕生物科技有限公司。

1.3 免疫组化染色

蜡块连续切片常规脱蜡水化，柠檬酸组织抗原修复液对切片进行高压抗原修复，一张切片加兔抗人ADAM9抗体（1∶250），另一张切片加鼠抗人原始造血细胞（CD34）单克隆抗体（1∶100），孵育，加二抗，室温下孵育，加新鲜配制的DAB显色，冲洗，苏木素复染，读片。

结果判定：以PBS代替一抗作阴性对照。ADAM-9染色为弥漫性分布，主要表达于细胞浆，少量表达于细胞膜，细胞核内无表达。用半定量积分法，对切片染色反应阳性细胞率及阳性强度进行综合评分。每张切片选取至少5个高倍（×400）视野，每个视野计数100个细胞。胞浆着色为阳性细胞，阳性细胞的染色强度按无着色、淡黄色、棕黄色和棕褐色分别记为0、1、2、3分，ADAM-9阳性细胞率按＜5%、6%～25%、26%～50%、＞50%分别记为0、1、2、3分，然后两项记分相乘，得出结果判断：大于等于1分的记为阳性，小于1分的为阴性（其中一项计分为0即为阴性）。

1.4 随访所有患者均进行了电话随访，随访时间6～72个月（中位32个月）。

1.5 统计学分析

所有数据均用SPSS 17.0软件包进行统计学分析，定性资料采用χ2检验、生存分析使用Kaplan-Meier法，P＜0.05为有显著差异。

2 结果

2.1 ADAM 9蛋白表达

10例正常结肠细胞无ADAM-9表达；结直肠癌组织ADAM 9阳性率为69.44%（50/72），差异有统计学意义（P＜0.05），见表1。

表1 ADAM9在结肠癌及癌旁正常结肠组织中的表达Tab.1 Expression of ADAM9 in normal colon tissues and carcinomas

2.2 结直肠癌ADAM 9表达与临床病理因素的关系

ADAM-9表达与结直肠癌患者的性别、年龄、肿瘤大小、组织学类型无差异，但与肿瘤侵犯深度、淋巴结转移，TNM分期相关（P＜0.05），见表2。

表2 结直肠癌ADAM 9表达与临床病理因素间的关系Tab.2 Relationship between ADAM 9 expression and clinicopathological factors in colorectal cancer

2.3 ADAM-9表达与结肠癌预后

TNMⅢ～Ⅳ期患者5年生存率44.26%，Ⅰ～Ⅱ期患者94.21%（图1）。ADAM-9阳性患者5年生存率48.32%，ADAM-9阴性患者生存率89.64%（图2），均有统计学差异（P＜0.05）。

图1 结肠腺癌患者不同TNM分期生存曲线Fig.1 Survival curves of colorectal cancer patients with different TNM stages

图2 ADAM9表达结肠腺癌患者生存曲线Fig.2 Survival curves of colon cancer patients with ADAM9 expression

3 讨论

研究表明，肿瘤转移的关键步骤是细胞外基质（extracellular matrix，ECM）的降解。ECM包括多种成分，降解过程需多种酶参与，蛋白水解酶就是其中重要的酶，该酶主要有血浆酶系统、基质金属蛋白酶（MMP）、去整合素-金属蛋白酶（a disintegrin and metalloproteinase，ADAM）和组织蛋白酶系统。ADAM是一个重要的金属蛋白酶家族，在细胞外基质降解、细胞粘连、细胞基质粘连、细胞融合及信号转导中具有重要作用，广泛参与各种正常的生理活动。ADAM参与肿瘤进展转移。

目前认为，ADAM9促进肿瘤发生、发展、转移主要通过ADAM与ECM降解，ADAM与细胞信号传导，ADAM与细胞黏附分子激活三个途径。已有研究表明，ADAM-9在多种消化癌细胞中高表达。Liu等[3]报道ADAM-9高表达可成为判断食管癌转移和预后的标志。Zhou等[4]发现索拉非尼可通过上调MIR-1274a抑制ADAM-9，达到抗晚期肝癌效果。ADAM-9在胃、结肠癌中表达上调，且表达程度与肿瘤进展相关[5]。提示ADAM-9可作为一个特异性指标对消化恶性肿瘤诊断及临床分期提供指导。

本研究显示，ADAM9在结直肠癌中高表达；ADAM-9表达与结直肠癌患者性别、年龄、肿瘤大小、组织学类型无关，与肿瘤TNM分期、浸润深度、淋巴结转移正相关，与结肠癌术后患者复发负相关。提示ADAM-9可作为预测结肠癌生存期指标，用于术后复发风险的评估。

[1] Hamada S，Satoh K，Fujibuchi W，et al.MiR-126 acts as a tumor suppressor in pancreatic cancer cells via the regulation of ADAM9[J].Mol Cancer Res，2012，10（1）：3-10.

[2] Rocks N1，Paulissen G，El Hour M，et al.Emerging roles of ADAM and ADAMTS metalloproteinases in cancer[J]. Biochimie，2008，90（2）：369-379.

[3] Liu R，Gu J，Jiang P，et al.DNMT1-microRNA126 epigenetic circuit contributes to esophageal squamous cell carcinoma growth via ADAM9-EGFR-AKT signaling[J].Clin Cancer Res，2015，21（4）：854-863.

[4] Zhou C，Liu J，Li Y，et al.microRNA-1274a，a modulator of sorafenib induced a disintegrin and metalloproteinase 9（ADAM9）down-regulation in hepatocellular carcinoma[J]. FEBS Lett，2011，585（12）：1828-1834.

[5] 施文，李俊生.结肠癌组织中ADAM9的表达及其与微血管密度的关系[J].东南大学学报：医学版，2009，28（4）：274-278.

Relationship between expression of a disintegrin and metalloproteinase-9 and prognosis in colorectal cancer

TANG Chong，JIANG Tian，GAO Xuesong，SHI Wen，QIN Weiyan，SUN Yongqiang
Department of General Surgery，Second Affiliated Hospital，Nantong University，Nantong 226001，China

Objective To investigate the correlation of expression of a disintegrin and metalloproteinase-9(ADAM-9)with clinicopathological factors and prognosis in colorectal cancer.Methods The expression of ADAM-9 in 72 cases of colorectal cancer of different clinical stages was detected by immunohistochemistry,and its correlation with prognosis was analyzed.Results ADAM-9 was overexpresssed in cancer tissues(69.4%,50/72)and negatively expressed in normal tissues,with significant differences(P＜0.05).The expression of ADAM-9 in colorectal cancer was associated with TNM stage,depth of invasion and lymph node metastasis（P＜0.05），but was not related to gender,age，tumor size and histological type.Kaplan-Meier survival analysis revealed that the survival time of patients with positive expression of ADAM-9 was significantly lower than that of patients with negative expression（P＜0.05）.ConclusionsThe expression of ADAM-9 in colorectal cancer is positively related to TNM stage,depth of invasion and lymph node metastasis,and is negatively related to the time of recurrence.ADAM-9 may be a prognostic indicator of survival of colorectal cancer,and can be used in evaluation of recurrence after operation.

Colorectal cancer；A disintegrin and metalloproteinase-9；Prognosis

R656

A

2095-378X（2015）04-0223-03

10.3969/j.issn.2095-378X.2015.04.002

唐 翀（1980—），男，江苏南通人，主治医师，研究胃肠外科

孙永强，电子信箱：sunyq505@163.com

在结直肠正常组织ADAM-9表达阴性，癌组织中高表达，其阳性率为（69.4%，50/72）明显高于正常组织（P＜0.05）；ADAM-9表达与结直肠癌患者性别、年龄、肿瘤大小、组织学类型无差异，但与肿瘤侵犯深度、淋巴结转移，TNM分期相关（P＜0.05）；Kaplan-Meier生存分析显示，ADAM-9表达阳性结肠腺癌患者术后生存期明显低于阴性表达者（P＜0.05）。结论 ADAM-9表达与肿瘤TNM分期、浸润深度、淋巴结转移呈正相关，与术后复发时间呈负相关，提示ADAM-9可作为预测结肠癌生存期的指标，用于术后复发风险的评估。