UPLC-MS/MS法测定牛乳中己烯雌酚、玉米赤霉醇和玉米赤霉酮残留

2015-12-16崔向云张雪峰李照袁凤琴徐向峰常建军宋晓东

中国乳品工业 2015年10期

崔向云，张雪峰，李照，袁凤琴，徐向峰，常建军，宋晓东

（内蒙古蒙牛乳业（集团）股份有限公司中心实验室，呼和浩特011500）

0 引言

己烯雌酚、玉米赤霉醇和玉米赤霉酮都属于己烯雌酚类激素，是人工合成的非类固醇同化性激素，曾被用在畜牧业养殖过程中，用来提高饲料转化率及促进牲畜生长[1,3]。为了防止这些激素随畜产品进入人体，危害人类健康，建立一种该类化合物的快速检验方法成为解决这一问题的关键。

目前，检测该类激素的方法有分光光度法、酶联免疫法、气相色谱-串联质谱法、高效液相色谱法以及液相色谱-串联质谱法[1,2,4]。近年来，由于液相色谱-串联质谱法具有高灵敏度、高选择性，在食品中兽药残留的检测应用越来越多[2,5,6]。然而，绝大多数方法样品前处理方法耗时较长，不利于企业日常快速检测。本文提供了一种快速、准确检测液态乳中己烯雌酚、玉米赤霉醇和玉米赤霉酮的方法。

1 实验

1.1 仪器、试剂与材料

超高效液相色谱-串联四级杆质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI），固相萃取装置。

己烯雌酚、玉米赤霉醇、玉米赤霉酮标准品；甲醇、乙腈均为色谱纯；实验室用水为去离子水；MAX固相萃取柱（60 mg/3 mL）。

1.2 溶液的配制

标准溶液的配制：准确称取适量的己烯雌酚、玉米赤霉醇、玉米赤霉酮标准品，用甲醇配制成质量浓度为100 mg/L的标准储备液，-18℃冰箱储存。使用时，根据需要再用甲醇稀释成适当浓度的标准工作液。固相萃取淋洗液：取5 mL甲醇，用超纯水定容至100 mL；固相萃取洗脱洗液：取5 mL甲酸，用甲醇定容至100 mL；定容液的配制：取50 mL乙腈和50 mL超纯水混合。

1.3 色谱条件

色谱柱：ACQUITY UPLC HSS T3（2.1mm×100mm，1.8 μm）；柱温为40 ℃；进样体积为5 μL；流动相A为乙腈，流动相B为水；梯度洗脱为0～3.0 min，体积分数为50%～80%的A溶液；3.0～4.0 min，体积分数为80%～100%的A溶液；4.0～4.5 min，体积分数为100%～50%的A溶液；4.5～5.0 min，体积分数为50%A溶液；流速为0.35 mL/min。

1.4 质谱条件

离子化模式为电喷雾负离子模式（ES-）；质谱扫描方式为多反应监测（MRM）；电离电压为3.00 kV；离子源温度为110℃；去溶剂气温度为350℃；去溶剂气（N2）流量为500 L/h；碰撞气（高纯Ar）流量为50 L/h。锥孔电压、碰撞能量及定性和定量离子等质谱参数如表1所示。

表1 己烯雌酚、玉米赤霉醇、玉米赤霉酮的质谱参数及保留时间

1.5 样品前处理

1.5.1 样品的提取

称取液奶样品2 g，精确到0.1 mg，于10 mL离心管中，加入3 mL乙腈，涡旋混合30 s，于离心机上以转速5 000 r/min离心5 min，取上清液至50 mL离心管中，再在沉淀中加入2 mL乙腈，涡旋混合30 s，于离心机上以5 000 r/min离心5 min，合并上清液；在上清液中加入5 mL超纯水，混合均匀并用浓度为1.0 mol/L的NaOH溶液调节pH值至11.0，待净化。

1.5.2 样品的净化

MAX固相萃取小柱预先用5 mL甲醇、5 mL水活化及平衡，将提取液经过小柱，待提取液自然流净后，用5 mL淋洗液淋洗固相萃取柱，减压抽干固相萃取柱15 s后，用5 mL洗脱液洗脱，并收集洗脱液，氮吹仪吹干后用1 mL定容液溶解，经0.22 μm滤膜过滤后用超高效液相色谱-串联质谱法进行测定。

2 结果

2.1 回收率和精密度

图1是纯牛奶中加标己烯雌酚、玉米赤霉醇和玉米赤霉酮得到的MRM色谱图。实验以未检出己烯雌酚、玉米赤霉醇和玉米赤霉酮的乳制品作为空白样品，分别对空白样品加标做了回收率实验。纯牛奶中添加己烯雌酚、玉米赤霉醇和玉米赤霉酮的质量浓度为2.0，5.0和10.0 μg/L。每个水平做6次平行实验，取其平均值作为最终回收率。纯牛奶中添加己烯雌酚、玉米赤霉醇和玉米赤霉酮的最终回收率分别为72.3%～94.5%、72.8%～87.4%和88.9%～110.6%，而且各平行样间的相对标准偏差均小于10%，平行性很好（见表2）。